Name: Isolement de chondrocytes et de chondroprogéniteurs à l’aide de l’adhésion de la fibronectine et du dosage migratoire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: Découvrez l'isolement de chondrocytes et chondroprogéniteurs par adhésion à la fibronectine et dosage migratoire sur cartilage articulaire humain. Cette méthode optimise les stratégies thérapeutiques en ingénierie tissulaire cartilagineuse.

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<meta charset="utf8"></head><body>Chondroprogénitor et isolement de chondrocytes à partir de cartilage articulaire humain

<ol><li>Muthu, S., Visawanathan, V., Chellamuthu, G., Thabrez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+effectiveness+of+various+treatments+for+cartilage+defects+compared+to+microfracture%3A+A+network+meta-analysis+of+randomized+controlled+trials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cartilage+Joint+Preserv%22%5BJournal%5D)">Clinical effectiveness of various treatments for cartilage defects compared to microfracture: A network meta-analysis of randomized controlled trials.</a> J Cartilage Joint Preserv. 4 (2), 100163(2023).</li>
<li>Sophia Fox, A. J., Bedi, A., Rodeo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+basic+science+of+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Sports+Health%22%5BJournal%5D)">The basic science of articular cartilage.</a> Sports Health. 1 (6), 461-468 (2009).</li>
<li>Brittberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+articular+cartilage+repair-An+up-to-date+review%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Joint%22%5BJournal%5D)">Clinical articular cartilage repair-An up-to-date review.</a> Annals of Joint. 3 (0), (2018).</li>
<li>Muthu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+cartilage+regeneration%3A+emerging+hypotheses+and+related+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Failure of cartilage regeneration: emerging hypotheses and related therapeutic strategies.</a> Nat Rev Rheumatol. 19 (7), 403-416 (2023).</li>
<li>Lavrentieva, A., Hatlapatka, T., Neumann, A., Weyand, B., Kasper, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+for+osteogenic+and+chondrogenic+differentiation+of+MSC%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Biochem+Eng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Potential for osteogenic and chondrogenic differentiation of MSC.</a> Adv Biochem Eng Biotechnol. 129, 73-88 (2013).</li>
<li>Fernandez-Moure, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+osteogenic+potential+of+mesenchymal+stem+cells+from+cortical+bone%3A+a+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhanced osteogenic potential of mesenchymal stem cells from cortical bone: a comparative analysis.</a> Stem Cell Res Ther. 6, 203(2015).</li>
<li>Goldberg, A., Mitchell, K., Soans, J., Kim, L., Zaidi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+mesenchymal+stem+cells+for+cartilage+repair+and+regeneration%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">The use of mesenchymal stem cells for cartilage repair and regeneration: a systematic review.</a> J Orthop Surg Res. 12, 39(2017).</li>
<li>Zha, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+of+mesenchymal+stem+cells+in+cartilage+regeneration%3A+From+characterization+to+application%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity of mesenchymal stem cells in cartilage regeneration: From characterization to application.</a> NPJ Regen Med. 6 (1), 1-15 (2021).</li>
<li>Hayes, A. J., Tudor, D., Nowell, M. A., Caterson, B., Hughes, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondroitin+Sulfate+sulfation+motifs+as+putative+biomarkers+for+isolation+of+articular+cartilage+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Chondroitin Sulfate sulfation motifs as putative biomarkers for isolation of articular cartilage progenitor cells.</a> J Histochem Cytochem. 56 (2), 125-138 (2008).</li>
<li>Dowthwaite, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+surface+of+articular+cartilage+contains+a+progenitor+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The surface of articular cartilage contains a progenitor cell population.</a> J Cell Sci. 117 (Pt 6), 889-897 (2004).</li>
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<li>Fellows, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+divergent+progenitor+cell+sub-populations+in+human+osteoarthritic+cartilage%3A+the+role+of+telomere+erosion+and+replicative+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Characterization of a divergent progenitor cell sub-populations in human osteoarthritic cartilage: the role of telomere erosion and replicative senescence.</a> Sci Rep. 7, 41421(2017).</li>
<li>Vinod, E., Kachroo, U., Amirtham, S. M., Ramasamy, B., Sathishkumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+fresh+chondrocytes%2C+cultured+chondrocytes+and+chondroprogenitors+derived+from+human+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of fresh chondrocytes, cultured chondrocytes and chondroprogenitors derived from human articular cartilage.</a> Acta Histochem. 122 (1), 151462(2019).</li>
<li>Korpershoek, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+highly+proliferative+and+multipotent+meniscus+progenitors+through+differential+adhesion+to+Fibronectin%3A+A+novel+approach+in+meniscus+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Selection of highly proliferative and multipotent meniscus progenitors through differential adhesion to Fibronectin: A novel approach in meniscus tissue engineering.</a> Int J Mol Sci. 22 (16), 8614(2021).</li>
<li>Wang, J., Roberts, S., Li, W., Wright, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+characterization+of+regional+human+meniscus+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Phenotypic characterization of regional human meniscus progenitor cells.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 1003966(2022).</li>
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<li>Xue, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+identification+of+stem+cells+in+different+subtypes+of+cartilage+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Isolation and identification of stem cells in different subtypes of cartilage tissue.</a> Expert Opin Biol Ther. 15 (5), 623-632 (2015).</li>
<li>McCarthy, H. E., Bara, J. J., Brakspear, K., Singhrao, S. K., Archer, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparison+of+equine+articular+cartilage+progenitor+cells+and+bone+marrow-derived+stromal+cells+as+potential+cell+sources+for+cartilage+repair+in+the+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+J%22%5BJournal%5D)">The comparison of equine articular cartilage progenitor cells and bone marrow-derived stromal cells as potential cell sources for cartilage repair in the horse.</a> Vet J. 192 (3), 345-351 (2012).</li>
<li>Elsaesser, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+migrative+subpopulation+of+adult+human+nasoseptal+chondrocytes+with+progenitor+cell+features+and+their+potential+for+in+vivo+cartilage+regeneration+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+%26+Biosci%22%5BJournal%5D)">Characterization of a migrative subpopulation of adult human nasoseptal chondrocytes with progenitor cell features and their potential for in vivo cartilage regeneration strategies.</a> Cell & Biosci. 6, 11(2016).</li>
<li>Batschkus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+secretome+of+human+chondrogenic+progenitor+cells+with+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Anat%22%5BJournal%5D)">Mapping the secretome of human chondrogenic progenitor cells with mass spectrometry.</a> Ann Anat. 212, 4-10 (2017).</li>
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<li>Vinod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraarticular+injection+of+allogenic+chondroprogenitors+for+treatment+of+osteoarthritis+in+rabbit+knee+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Orthop+Trauma%22%5BJournal%5D)">Intraarticular injection of allogenic chondroprogenitors for treatment of osteoarthritis in rabbit knee model.</a> J Clin Orthop Trauma. 10 (1), 16-23 (2018).</li>
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<li>Carluccio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+cells+activated+by+platelet+lysate+in+human+articular+cartilage+as+a+tool+for+future+cartilage+engineering+and+reparative+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Progenitor cells activated by platelet lysate in human articular cartilage as a tool for future cartilage engineering and reparative strategies.</a> Cells. 9 (4), E1052(2020).</li>
<li>Wang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-articular+delivery+of+extracellular+vesicles+secreted+by+chondrogenic+progenitor+cells+from+MRL%2FMpJ+superhealer+mice+enhances+articular+cartilage+repair+in+a+mouse+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Intra-articular delivery of extracellular vesicles secreted by chondrogenic progenitor cells from MRL/MpJ superhealer mice enhances articular cartilage repair in a mouse injury model.</a> Stem Cell Res Ther. 11 (1), 93(2020).</li>
<li>Wang, H. C., Lin, T. H., Hsu, C. C., Yeh, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoring+osteochondral+defects+through+the+differentiation+potential+of+cartilage+stem%2Fprogenitor+cells+cultivated+on+porous+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Restoring osteochondral defects through the differentiation potential of cartilage stem/progenitor cells cultivated on porous scaffolds.</a> Cells. 10 (12), 3536(2021).</li>
<li>Kellgren, J. H., Lawrence, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiological+assessment+of+osteo-arthrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rheum+Dis%22%5BJournal%5D)">Radiological assessment of osteo-arthrosis.</a> Ann Rheum Dis. 16 (4), 494-502 (1957).</li>
<li>Vinod, E., Kachroo, U., Rebekah, G., Yadav, B. K., Ramasamy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+articular+chondrocytes+and+chondroprogenitors+derived+from+non-diseased+and+osteoarthritic+knee+joints+to+assess+superiority+for+cell-based+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">Characterization of human articular chondrocytes and chondroprogenitors derived from non-diseased and osteoarthritic knee joints to assess superiority for cell-based therapy.</a> Acta Histochem. 122 (6), 151588(2020).</li>
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<li>Vinod, E., Padmaja, K., Ramasamy, B., Sathishkumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review+of+articular+cartilage+derived+chondroprogenitors+for+cartilage+repair+in+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthopaed%22%5BJournal%5D)">Systematic review of articular cartilage derived chondroprogenitors for cartilage repair in animal models.</a> J Orthopaed. 35, 43-53 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>22-lame de scalpel&nbsp ;</td><td>FOURGON</td><td></td><td></td>EN</tr><tr><td>VERRE plaque 6 puits&nbsp ;</td><td>CORNING</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Bleu Alcian</td><td>THERMO SCIENTIFIC</td><td>J6012</td><td></td></tr><tr><td>Rouge Alizarine&nbsp ;</td><td>SIGMA</td><td>130223</td><td></td></tr><tr><td>Amphotéricine-B (2 &mu ; g/mL).</td><td>GIBCO</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Acide ascorbique (62 &mu ; g/mL)</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>A4544-25G</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX LX cytomètre en flux&nbsp ;</td><td>BECKMAN COULTER</td><td>CYTExpert Software Version 2.5</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>&nbsp ; C34006</td><td></td></tr><tr><td>CD105-FITC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 561443 <tr><td>CD106-APC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 551147 <tr><td>CD14-FITC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 555397 <tr><td>CD29-APC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 559883 <tr><td>CD34-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 348057 <tr><td>CD45-FITC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td> 347463</tr><tr><td>CD49b-FITC</td><td>MILTENYL BIOTEC</td><td>· MACS 130/100337</td><td></td></tr><tr><td>CD49E-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 555617 <tr><td>CD73-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 550257 <tr><td>CD90-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td>561970</td><td></td></tr><tr><td>Compteur</td><td>de cellules DE NOVIX</td><td>Cell Drop BF</td><td></td></tr><tr><td>Filtre à cellules</td><td>HIMEDIA</td><td>TCP024</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>BECKMAN COULTER</td><td>Allegra X-30R</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur CO2</td><td>THERMO SCIENTIFIC</td><td>MODEL-371</td><td></td></tr><tr><td>Collagène de type X (COL10A1), facteur de transcription lié à l’arunage (RUNX2), facteur de transcription SRY-Box 9 (SOX-9), Aggrecan (ACAN) et collagène de type II (COL2A1)&nbsp ;</td><td>EUROGENTEC, BELGIQUE</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collagénase de type II</td><td>WORTHINGTON</td><td>LS004176</td><td></td></tr><tr><td>DMEM F-12 (Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium F-12)</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>D8900-1L</td><td></td></tr><tr><td>Lecteur de plaques ELISA</td><td>MOLECULAR DEVICES</td><td>SpectraMax i3x Reader</td><td></td></tr><tr><td>Fast Green</td><td>FISHER SIENTIFIC</td><td>2353459</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>GIBCO</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>FGF2</td><td>CLOUD CLONE CORP</td><td>APA551Hu01</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectine (10 &micro ; L/mL)</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>Système de synthèse Premier brin</td><td>TAKARA BIO</td><td>6110A</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>GIBCO</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Hématoxyline</td><td>QUALIGENS</td><td>Q39411</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp ;</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>M8787</td><td></td></tr><tr><td>Huile Rouge O</td><td>SIGMA</td><td>1320065</td><td></td></tr><tr><td>PBS (Phosphate Tamponné Saline)</td><td>GIBCO</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Thermocycleur PCR&nbsp ;</td><td>APPLIED BIOSYSTEMS</td><td>Thermocycleur Quantstudio 12K Flex&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-streptomycine (100 UI/mL)</td><td>GIBCO</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Picrosirius Red</td><td>ALFA AESAR</td><td>2610108</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps primaire (souris Collagène de type II)</td><td>DSHB</td><td>DSHB II II6B3</td><td></td></tr><tr><td>Pronase</td><td>ROCHE</td><td>10165913103</td><td></td></tr><tr><td>Quant-iT Picogreen réactif dsDNA</td><td>THERMO SCIENTIFIC</td><td>P7589</td><td></td></tr><tr><td>Réfrigérateur</td><td>ELANPRO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RNeasy MiniKit</td><td>QIAGEN</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>Safranin O</td><td>QUALIGENS</td><td>Q39962</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps secondaire (Anticorps IgG anti-souris de chèvre, conjugué HRP)</td><td>THERMO SCIENTIFIC</td><td>31430</td><td></td></tr><tr><td>Bain d’eau agité&nbsp ;</td><td>Kits de différenciation REMI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StemPro&nbsp ;</td><td>GIBCO</td><td>1007201, A1007001 et A1007101</td><td></td></tr><tr><td>flacon T-25</td><td>CORNING</td><td>430639</td><td></td></tr><tr><td>TakyonTM Low Rox SYBR Master Mix dTTP Bleu&nbsp ;</td><td>EUROGENTEC</td><td>UF-LSMT-B0701</td><td></td></tr><tr><td>TGF&beta ;</td><td>ABCAM</td><td>ab277760</td><td></td></tr><tr><td>Culture tissulaire Pétride</td><td>TARSONS</td><td>960010</td><td></td></tr><tr><td>Bleu de toluidine</td><td>QUALIGENS</td><td>2040</td><td></td></tr><tr><td>Bleu de tryphane&nbsp ;</td><td>GIBCO</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine EDTA</td><td>GIBCO</td><td>25200072</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement de chondrocytes et de chondroprogéniteurs à l’aide de l’adhésion de la fibronectine et du dosage migratoire

Isolation of Chondrocytes and Chondroprogenitors Using Fibronectin Adhesion and Migratory Assay

À partir de 86,9 mg de coupes de cartilage, un rendement en cellules chondrocytaires de 1,72 x 105 cellules a été noté. Lors de la charge, les chondrocytes adhèrent rapidement, présentant un aspect initial de galets arrondis et se transformant en un état fibroblastique lors d’une expansion ultérieure (Figure 1 A, B). L’ensemencement de ces chondrocytes sur des plaques de fibronectine entraîne généralement une adhésion de 2 %, chaque cellule subissant une croissance clonale (Figure 2 C, D), atteignant une population doublant de 5 jours 10 à 12 (32 cellules/clone). Les clones dans la zone de 10 cm² sont combinés et étendus jusqu’au passage nécessaire pour produire des FAA-CP. Les explants de cartilage, maintenus en culture après incubation de la collagénase, présentent un relâchement de la matrice extracellulaire, et la migration est généralement observée dès le 7ème jour (Figure 2E). Les PC-FAA et les MCP présentent une structure en forme de fuseau, une caractéristique couramment associée aux BM-MSC, acquérant une structure en nid d’abeille avant la confluence (figures 1E, F).
Les trois types de cellules isolées, à savoir les chondrocytes, les FAA-CP et les MCP, sont étroitement surveillés à l’aide de l’imagerie à contraste de phase. Les PC-FAA ne sont transférés qu’après confirmation de cinq doublements de population.
La caractérisation phénotypique des cellules isolées et élargies comprend généralement l’analyse cytométrique en flux pour les marqueurs présumés de la chondrogenèse, à savoir CD146 et CD166, ainsi que l’analyse de l’expression génique pour les marqueurs de chondrogenèse (SOX-9, ACAN, COL2A1), le marqueur fibrocartilagineux COL1A1 et les marqueurs d’hypertrophie (RUNX2 et COL10A1). Les trois groupes de cellules présentent une expression élevée (&gt;95 %) de CD105, CD73 et CD90 ; expression faible à négative de CD34 et CD45 ; et une expression élevée (&gt;98 %) de CD166, avec une expression modérée et dépendante du donneur de CD146 (40 % à 75 %) (figure 2A).
Les résultats de la qRT-PCR montrent une expression comparable et élevée de SOX-9, d’ACAN et de COL1A1, un marqueur du fibrocartilage, car les cellules sont cultivées avant l’évaluation (Figure 2B). Pour confirmer la chondrogenèse, une absorption positive de complexes rouge-orangé dans les zones contenant du GAG après la safranine O, et de complexes bleuâtres à violacés après le bleu d’Alcian et le bleu de toluidine est observée dans tous les groupes de cellules, avec une proportion plus élevée dans les groupes FAA-CP et MCP. L’analyse immunohistochimique des granules différenciées chondrogéniques pour le collagène de type II montre une absorption fibrillaire brunâtre dans les trois groupes (Figure 3). De plus, l’analyse GAG/ADN a également montré la confirmation de la différenciation chondrogénique avec des groupes FAA-CP présentant une expression plus élevée (Figure 2C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67160/67160fig01.jpg"> 
Figure 1 : Isolement et caractérisation des chondrocytes et des chondroprogéniteurs. L’algorithme d’étude décrit l’isolement de trois groupes de cellules et leurs caractéristiques morphologiques sous un microscope à contraste de phase immédiatement après l’isolement et après quelques jours d’expansion. (A) Des chondrocytes fraîchement isolés se fixent aux cultures adhérentes pendant les premiers jours de la culture, acquérant un aspect fibroblastique avec une expansion supplémentaire (B). (C) Les chondrocytes soumis à un test d’adhésion de la fibronectine présentent une croissance clonale, atteignant une population doublant de 5 au jour 10 (D). (E) Les chondroprogéniteurs migrent du bord de l’explant au 10e jour de la culture et présentent un schéma de croissance en forme de fuseau avec une expansion supplémentaire (F). Grossissement de l’image en contraste de phase : 10x ; Barres d’échelle : 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67160/67160fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67160/67160fig02.jpg"> 
Figure 2 : Données de caractérisation moléculaire. (A) Analyse cytométrique en flux pour les marqueurs MSC positifs et négatifs et les marqueurs potentiels de chondrogenèse. (B) Données d’expression RT-PCR pour les trois groupes de cellules pour l’analyse de l’expression génique des marqueurs chondrogéniques et hypertrophiques. (C) Analyse GAG/ADN total des pastilles différenciées chondrogènes. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67160/67160fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67160/67160fig03.jpg"> 
Figure 3 : Coloration de confirmation après différenciation chondrogénique. Safranine O et analyse immunohistochimique du collagène de type II entre les trois groupes cellulaires. Barres d’échelle : pour un grossissement de 10x, 50 μm ; Grossissement 40x, 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67160/67160fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Isolement de chondrocytes et de chondroprogéniteurs à l’aide de l’adhésion de la fibronectine et du dosage migratoire

Chondroprogenitor cells (CPCs), recently identified as a distinct subpopulation, exhibit promise due to their mesenchymal properties, heightened ...

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Research

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JoVE Journal

Biology

Biologie

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Isolement et caractérisation des fibroblastes cardiaques adultes et des myofibroblastes

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Isolement de chondrocytes et de chondroprogéniteurs à l’aide de l’adhésion de la fibronectine et du dosage migratoire

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