Name: Transplantation cellulaire à haute résolution chez le poisson-zèbre embryonnaire et larvaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: Apprenez la transplantation cellulaire à haute résolution chez Danio rerio embryonnaire et larvaire. Cette méthode permet d'étudier les dynamiques spatiales et temporelles des signaux neuronaux au-delà des stades blastula et gastrula.

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<meta charset="utf8"></head><body>Transplantation de cellules de poisson-zèbre robuste pour la recherche sur la régénération et le développement

<ol><li>Solini, G. E., Dong, C., Saha, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+transplantation+experiments%3A+Past%2C+present%2C+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Embryonic transplantation experiments: Past, present, and future.</a> Trends Dev Biol. 10, 13-30 (2017).</li>
<li>Gilbert, S. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGilbert%2C+SF+%22A+Conceptual+History+of+Modern+Embryology%22">A Conceptual History of Modern Embryology</a>. , Springer. New York, NY. (1991).</li>
<li>Spemann, H., Mangold, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+embryonic+primordia+by+implantation+of+organizers+from+a+different+species.+1923%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of embryonic primordia by implantation of organizers from a different species. 1923.</a> Int J Dev Biol. 45 (1), 13-38 (2001).</li>
<li>Kretzschmar, K., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+Tracing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Lineage Tracing.</a> Cell. 148 (1), 33-45 (2012).</li>
<li>Gansner, J. M., Dang, M., Ammerman, M., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+22+-+Transplantation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 22 - Transplantation in zebrafish.</a> Methods in Cell Biol. 138, 629-647 (2017).</li>
<li>Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Details+of+the+interphase+nucleus+in+Japanese+quail+%28Coturnix+coturnix+japonica%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Biol+Fr+Belg%22%5BJournal%5D)">Details of the interphase nucleus in Japanese quail (Coturnix coturnix japonica).</a> Bull Biol Fr Belg. 103 (3), 435-452 (1969).</li>
<li>Ho, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+movements+and+cell+fate+during+zebrafish+gastrulation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Suppl%22%5BJournal%5D)">Cell movements and cell fate during zebrafish gastrulation.</a> Dev Suppl. , 65-73 (1992).</li>
<li>Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+patterning+deciphered+in+avian+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Developmental patterning deciphered in avian chimeras.</a> Development, Growth & Differentiation. 50, S11-S28 (2008).</li>
<li>Wagner, D. E., Wang, I. E., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonogenic+neoblasts+are+pluripotent+adult+stem+cells+that+underlie+planarian+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Clonogenic neoblasts are pluripotent adult stem cells that underlie planarian regeneration.</a> Science. 332 (6031), 811-816 (2011).</li>
<li>Balaban, E., Teillet, M. A., Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+quail-chick+chimera+system+to+the+study+of+brain+development+and+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Application of the quail-chick chimera system to the study of brain development and behavior.</a> Science. 241 (4871), 1339-1342 (1988).</li>
<li>Carmany-Rampey, A., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modern+mosaic+analysis+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Modern mosaic analysis in the zebrafish.</a> Methods. 39 (3), 228-238 (2006).</li>
<li>Kragl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+keep+a+memory+of+their+tissue+origin+during+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cells keep a memory of their tissue origin during axolotl limb regeneration.</a> Nature. 460 (7251), 60-65 (2009).</li>
<li>Rojo-Laguna, J. I., Garcia-Cabot, S., Saló, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+transplantation+in+planarians%3A+A+useful+tool+for+molecular+analysis+of+pattern+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue transplantation in planarians: A useful tool for molecular analysis of pattern formation.</a> Semin Cell Dev Biol. 87, 116-124 (2019).</li>
<li>Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+choreography+of+appendage+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular choreography of appendage regeneration.</a> Cell. 165 (7), 1598-1608 (2016).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscles+are+barely+required+for+the+patterning+and+cell+dynamics+in+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Muscles are barely required for the patterning and cell dynamics in axolotl limb regeneration.</a> Front Genet. 13, 1036641(2022).</li>
<li>Wells, K. M., Kelley, K., Baumel, M., Vieira, W. A., McCusker, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+control+of+growth+and+size+in+the+axolotl+limb+regenerate%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Neural control of growth and size in the axolotl limb regenerate.</a> Elife. 10, e68584(2021).</li>
<li>Otsuki, L., Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+memory+in+vertebrate+regeneration%3A+a+century%27s+insights+from+the+salamander+limb%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Positional memory in vertebrate regeneration: a century's insights from the salamander limb.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 14 (6), e040899(2022).</li>
<li>de Abreu, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+of+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model of neurodevelopmental disorders.</a> Neuroscience. 445, 3-11 (2020).</li>
<li>Alper, S. R., Dorsky, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+advantages+of+zebrafish+larvae+as+a+model+for+spinal+cord+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Unique advantages of zebrafish larvae as a model for spinal cord regeneration.</a> Front Mol Neurosci. 15, 983336(2022).</li>
<li>Blader, P., Strähle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+developmental+genetics+and+central+nervous+system+development%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Zebrafish developmental genetics and central nervous system development.</a> Hum Mol Genet. 9 (6), 945-951 (2000).</li>
<li>Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+chimeric+zebrafish+embryos+by+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generating chimeric zebrafish embryos by transplantation.</a> J Vis Exp. (29), e1394(2009).</li>
<li>Boulanger-Weill, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+interactions+between+newborn+and+mature+neurons+leading+to+integration+into+established+neuronal+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional interactions between newborn and mature neurons leading to integration into established neuronal circuits.</a> Curr Biol. 27 (12), 1707-1720 (2017).</li>
<li>Dong, J., Stuart, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgene+manipulation+in+zebrafish+by+using+recombinases%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Transgene manipulation in zebrafish by using recombinases.</a> Methods Cell Biol. 77, 363-379 (2004).</li>
<li>Kawakami, K., Shima, A., Kawakami, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+functional+transposase+of+the+Tol2+element%2C+an+Ac-like+element+from+the+Japanese+medaka+fish%2C+and+its+transposition+in+the+zebrafish+germ+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Identification of a functional transposase of the Tol2 element, an Ac-like element from the Japanese medaka fish, and its transposition in the zebrafish germ lineage.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (21), 11403-11408 (2000).</li>
<li>Hwang, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genome+editing+in+zebrafish+using+a+CRISPR-Cas+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Efficient genome editing in zebrafish using a CRISPR-Cas system.</a> Nat Biotechnol. 31 (3), 227-229 (2013).</li>
<li>Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+primary+motoneuron+identity+in+developing+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Determination of primary motoneuron identity in developing zebrafish embryos.</a> Science. 252 (5005), 569-572 (1991).</li>
<li>Elsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+5+-+Cellular+methods%3A+detailed+procedure+for+transplanting+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 5 - Cellular methods: detailed procedure for transplanting single cells.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Poulain, F. E., Gaynes, J. A., Stacher Hörndli, C., Law, M. -Y., Chien, C. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+retinal+axon+guidance+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Analyzing retinal axon guidance in zebrafish.</a> Methods Cell Biol. 100, 3-26 (2010).</li>
<li>Masai, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-cadherin+mediates+retinal+lamination%2C+maintenance+of+forebrain+compartments+and+patterning+of+retinal+neurites%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">N-cadherin mediates retinal lamination, maintenance of forebrain compartments and patterning of retinal neurites.</a> Development. 130 (11), 2479-2494 (2003).</li>
<li>Raible, D. W., Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulative+interactions+in+zebrafish+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Regulative interactions in zebrafish neural crest.</a> Development. 122 (2), 501-507 (1996).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Barsh, G. R., Isabella, A. J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+motor+neuron+topographic+map+determined+by+parallel+mechanisms+of+hox5+expression+and+time+of+axon+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Vagus motor neuron topographic map determined by parallel mechanisms of hox5 expression and time of axon initiation.</a> Curr Biol. 27 (24), 3812-3825 (2017).</li>
<li>Isabella, A. J., Stonick, J. A., Dubrulle, J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+positional+memory+guides+target-specific+axon+regeneration+in+the+zebrafish+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Intrinsic positional memory guides target-specific axon regeneration in the zebrafish vagus nerve.</a> Development. 148 (18), 199706(2021).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+1%3A+General+methods+for+zebrafish+care%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 1: General methods for zebrafish care.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Grant, P. K., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuroepithelial+basement+membrane+serves+as+a+boundary+and+a+substrate+for+neuron+migration+in+the+zebrafish+hindbrain%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">The neuroepithelial basement membrane serves as a boundary and a substrate for neuron migration in the zebrafish hindbrain.</a> Neural Dev. 5 (1), 9(2010).</li>
<li>Konantz, J., Antos, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+genetic+morpholino+approach+using+cardiac+ventricular+injection+to+transfect+multiple+difficult-to-target+tissues+in+the+zebrafish+larva%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Reverse genetic morpholino approach using cardiac ventricular injection to transfect multiple difficult-to-target tissues in the zebrafish larva.</a> J Vis Exp. (88), e51595(2014).</li>
<li>Novoa, B., Figueras, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+model+for+the+study+of+inflammation+and+the+innate+immune+response+to+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: model for the study of inflammation and the innate immune response to infectious diseases.</a> Adv Exp Med Biol. 946, 253-275 (2012).</li>
<li>Speirs, Z. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+can+we+learn+about+fish+neutrophil+and+macrophage+response+to+immune+challenge+from+studies+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Fish+Shellfish+Immunol%22%5BJournal%5D)">What can we learn about fish neutrophil and macrophage response to immune challenge from studies in zebrafish.</a> Fish Shellfish Immunol. 148, 109490(2024).</li>
<li>Trede, N. S., Langenau, D. M., Traver, D., Look, A. T., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+to+understand+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish to understand immunity.</a> Immunity. 20 (4), 367-379 (2004).</li>
<li>Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+maturation+of+the+immune+system+in+zebrafish%2C+Danio+rerio%3A+a+gene+expression+profiling%2C+in+situ+hybridization+and+immunological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Comp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study.</a> Dev Comp Immunol. 28 (1), 9-28 (2004).</li>
<li>Wienholds, E., Schulte-Merker, S., Walderich, B., Plasterk, R. H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target-selected+inactivation+of+the+zebrafish+rag1+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Target-selected inactivation of the zebrafish rag1 gene.</a> Science. 297 (5578), 99-102 (2002).</li>
<li>Petrie-Hanson, L., Hohn, C., Hanson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+rag1+mutant+zebrafish+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization of rag1 mutant zebrafish leukocytes.</a> BMC Immunol. 10, 8(2009).</li>
<li>Roh-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-dependent+cytoplasmic+transfer+during+melanoma+invasion+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Macrophage-dependent cytoplasmic transfer during melanoma invasion in vivo.</a> Dev Cell. 43 (5), 549-562 (2017).</li>
<li>Bukrinsky, A., Griffin, K. J. P., Zhao, Y., Lin, S., Banerjee, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+spi-1-like+%28spi-1l%29+in+zebrafish+myeloid+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Essential role of spi-1-like (spi-1l) in zebrafish myeloid cell differentiation.</a> Blood. 113 (9), 2038-2046 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10 mL « seringue à réservoir"</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-459</td><td></td></tr><tr><td>Filtre à vide jetable de 150 mL, .2 &micro ; m, PES</td><td>Corning</td><td>431153</td><td></td></tr><tr><td>20 x 12 mm Bloc chauffant</td><td>Corning</td><td>480122</td><td></td></tr><tr><td>robinet d’arrêt 3 voies</td><td>Braun Medical Inc.</td><td></td><td></td>455991</tr><tr><td>3 x 1 Lame en verre dépoli</td><td>VWR</td><td>48312-004</td><td></td></tr><tr><td>Objectif de trempage à l’eau 40x</td><td>Nikon</td><td>MRD07420</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de calcium dihydraté</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3306</td><td></td></tr><tr><td>Manipulateur grossier</td><td>Narishige</td><td>MN-4</td><td></td></tr><tr><td>Pompe à microseringue personnalisée</td><td>Université de l’Oregon</td><td>N/A</td><td>Fabriqué par l’atelier d’usinage de l’Université de l’Oregon (tsa.uoregon@gmail.com). Une alternative disponible dans le commerce est répertoriée ci-dessous.</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>1129500</td><td></td></tr><tr><td>Eclipse FN1 « Microscope de transplantation"</td><td>Nikon</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Poignée d’électrode</td><td>World Precision Instruments</td><td>5444</td><td></td></tr><tr><td>Lame chirurgicale stérile à plumes, #11</td><td>VWR</td><td>21899-530</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulateur fin, Hydraulique à huile à trois axes&nbsp ;</td><td>Narishige</td><td>MMO-203</td><td></td></tr><tr><td>HEPES pH 7.2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375-100G</td><td></td></tr><tr><td>Haute Précision #3 Style Scalpel Handle</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-163</td><td></td></tr><tr><td>Kimble Pipette Pasteur jetable en borosilicate, pointe large, 5.75 in</td><td>DWK Life Sciences</td><td>63A53WT</td><td></td></tr><tr><td>Adaptateur de chromatographie KIMBLE&nbsp ;</td><td>DWK Life Sciences</td><td>420408-0000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Huile minérale légère</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3516-1L</td><td></td></tr><tr><td>LSE chauffage numérique à bain sec, 1 bloc, 120 V</td><td>Corning</td><td>6875SB</td><td></td></tr><tr><td>Pompe à microseringue manuelle</td><td>World Precision Instruments</td><td>MMP</td><td>Alternative commerciale à la pompe à microseringue sur mesure</td></tr><tr><td>Porte-microélectrodes</td><td>World Precision Instruments</td><td>MPH310</td><td></td></tr><tr><td>MicroFil Pipette Filler</td><td>World Precision Instruments</td><td>MF28G67-5</td><td></td></tr><tr><td>Vernis à ongles</td><td>Electron MIcroscopy Sciences</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Eau sans nucléase</td><td>VWR</td><td>82007-334</td><td></td></tr><tr><td>P-97 Extracteur de micropipette de type flamant/brun</td><td>Sutter Instruments</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-streptomycine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>p4458-100ML</td><td>5 000 unités de pénicilline et 5 mg de streptomycine/mL</td></tr><tr><td>Pompe pipette 10 mL</td><td>Bel-Art</td><td>37898-0000</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de potassium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Professional Super Glue</td><td>Loctite</td><td>LOC1365882</td><td></td></tr><tr><td>Tubes à essai en polystyrène à fond rond</td><td>Falcon</td><td>352054</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Micromètre de platine</td><td>Meiji Techno America</td><td>MA285</td><td></td></tr><tr><td>Seringues sans aiguille, 50 mL</td><td>BD Medical</td><td>309635</td><td></td></tr><tr><td>Tricaïne Méthanosulfonate</td><td>Syndel USA</td><td>SYNCMGAUS03</td><td></td></tr><tr><td>Trilene XL smooth casting Ligne de pêche</td><td>Berkley</td><td>XLFS6-15</td><td></td></tr><tr><td>Tubes en polyéthylène n° 205</td><td>BD Medical</td><td>427445</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Low Melting Point Agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16520050</td><td></td></tr><tr><td>Micropipettes calibrées Wiretrol II</td><td>Drummond</td><td>50002010</td><td></td></tr></tbody></table>

transplantation cellulaire à haute résolution chez le poisson-zèbre embryonnaire et larvaire

High-resolution Cell Transplantation in Embryonic and Larval Zebrafish

Les résultats des expériences de transplantation sont directement observés en visualisant des cellules donneuses marquées par fluorescence chez des animaux hôtes à des moments appropriés après la transplantation à l’aide d’un microscope à fluorescence. Ici, nous avons transplanté des neurones vagues antérieurs individuels à 3 dpf. Les animaux hôtes ont ensuite été incubés pendant 12 ou 48 h, anesthésiés, montés dans le LMA sur une lamelle de verre et imagés au microscope confocal (figure 5). À 12 h après la transplantation (hpt), nous observons un neurone donneur transplanté avec succès (Figure 5A). Nous pouvons confirmer le positionnement correct de la cellule, car elle est située parmi les neurones vagues de l’hôte dans la région antérieure du noyau moteur du vague de l’hôte ; la cellule semble également intacte et saine, comme l’indique l’extension de plusieurs courtes protubérances de neurites (Figure 5A). 2 jours après la transplantation (dpt), nous pouvons à nouveau confirmer qu’un seul neurone a été transplanté avec succès dans la bonne position du noyau hôte (Figure 5B). À ce stade, nous observons que le neurone a prolongé un nouvel axone jusqu’au 4ème arc pharyngé (Figure 5B). L’observation directe révèle également quand la procédure a échoué. Dans cet exemple, nous observons un hôte 2 dpt dans lequel aucun neurone donneur n’est présent ; au contraire, une petite tache verte, probablement un fragment d’un neurone d’un donneur mort après la transplantation, est apparente (figure 5C). Bien que les taux de réussite des greffes varient en fonction de l’expérience de l’utilisateur et du nombre et du type de cellules transplantées, nous constatons un taux de réussite (défini comme la présence d’un neurone survivant qui a prolongé un axone dans l’hôte à 2-3 dpt) de 66 % (n = 453 greffes) pour les greffes de motoneurones vagues effectuées à 3-4 dpf33.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig01.jpg"> Figure 1 : Vue d’ensemble de l’appareil de transplantation. (A) Microscope à fluorescence droit ; (B) 40x objectif d’immersion dans l’eau ; (C) micromanipulateur grossier ; (D) micromanipulateur fin ; (E) porte-microélectrode ; (F) poignée d’électrode ; (G) robinet d’arrêt à trois voies ; (H) pompe à microseringue ; (I) tubes en polyéthylène ; (J) adaptateurs de chromatographie ; (K) Seringue à réservoir de 10 ml. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig02.jpg"> Figure 2 : Montage d’animaux pour la transplantation. (A) Une lame de verre dépoli de 3 pouces x 1 pouce avec du vernis à ongles transparent appliqué dans un contour rectangulaire (ligne pointillée). (B) Animaux donneurs (flèche) et hôtes (pointe de flèche) montés dans des gouttes d’agarose, alignés verticalement avec le site cible de la transplantation (cerveau postérieur) orienté vers la droite. (C) Agarose avec bord droit et coins découpés pour exposer le site cible de la transplantation. Encart : zoom de la région encadrée. (D) Lame de transplantation inondée de solution de Ringer avec de la pénicilline-streptomycine et de la tricaïne. Barres d’échelle = 5 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig03.jpg"> Figure 3 : Préparation de l’aiguille de transplantation. (A) Aiguille de transplantation cassée au sommet d’un micromètre de scène. (B) Remplisseuse de pipette (1) insérée dans l’aiguille de transplantation (2) pour remplir l’aiguille d’huile minérale. (C) Préparation de la lame de transplantation et aiguille en place sur le microscope de transplantation. 1 : Arroser le ménisque entre l’objectif de trempage 40x et la lame inondée 2 : Aiguille de transplantation 3 : Porte-microélectrode. (D) Pointe d’une aiguille de transplantation cassée avec un ménisque d’huile stable (pointe de flèche) vue au microscope de transplantation à un grossissement de 40x. Barres d’échelle = 100 μm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig04.jpg"> Figure 4 : Le processus de transplantation au microscope. (A) Aiguille positionnée à l’extérieur de l’animal donneur, visant les motoneurones vagues (vert, pointe de flèche). (B) Aiguille positionnée à l’intérieur de l’animal donneur après avoir absorbé les neurones donneurs marqués par fluorescence (pointes de flèches). (C) Aiguille contenant plusieurs neurones donneurs (pointes de flèches) positionnés à l’extérieur de l’animal hôte, visant les motoneurones vagues antérieurs de l’hôte (rouge, astérisque). (D) Animal hôte après la transplantation avec l’aiguille retirée. Un groupe de neurones de donneurs transplantés exprimant la GFP (pointe de flèche) a été expulsé dans l’hôte. Barres d’échelle = 30 μm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig05.jpg"> Figure 5 : Résultats représentatifs. (A,B) Des greffes réussies. (A) La région antérieure d’un noyau moteur vague hôte de 12 hpt (magenta) contenant un neurone donneur (vert, noir dans A'). Le neurone donneur a étendu plusieurs neurites (flèches en A'). (B) Le noyau moteur vague (B-B') et les branches axonales pharyngées (B''-B''', branches axonales étiquetées) d’un hôte 2 dpt (magenta) contenant un neurone donneur (vert, noir en B', B'''). Le neurone donneur a étendu un nouvel axone à la branche 4 (pointes de flèches). Les figures 5A, B représentent différents animaux. (C) Greffe infructueuse. Le noyau moteur vague d’un hôte de 2 dpt (magenta). Aucun neurone donneur n’est présent ; au contraire, une petite tache (verte, noire en C'), représentant probablement un fragment d’un neurone donneur mort (pointe de flèche), est présente. Barres d’échelle = 20 μm. Abréviations : dpt = jours après la transplantation ; HPT = heures après la transplantation. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Transplantation cellulaire à haute résolution chez le poisson-zèbre embryonnaire et larvaire

Development and regeneration occur by a process of genetically encoded spatiotemporally dynamic cellular interactions. The use of cell transplantation ...

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