Name: In vivo Imagerie confocale par fluorescence de l’activité neuronale induite par la stimulation sensorielle chez des larves de poisson-zèbre partiellement restreintes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-18T12:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Découvrez l'imagerie confocale in vivo de l'activité neuronale induite par stimulation sensorielle chez les larves de poisson-zèbre partiellement immobilisées. Cette méthode utilise les indicateurs GCaMP pour visualiser les dynamiques calciques en temps réel.

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<ol><li>Ahrens, M. B., Orger, M. B., Robson, D. N., Li, J. M., Keller, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-brain+functional+imaging+at+cellular+resolution+using+light-sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Method%22%5BJournal%5D)">Whole-brain functional imaging at cellular resolution using light-sheet microscopy.</a> Nat Method. 10 (5), 413-420 (2013).</li>
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<li>Abdelfattah, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+optimization+of+a+rhodopsin-based+fluorescent+voltage+indicator%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Sensitivity optimization of a rhodopsin-based fluorescent voltage indicator.</a> Neuron. 111 (10), 1547-1563.e9 (2023).</li>
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<li>Kawashima, T., Okuno, H., Bito, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+era+for+functional+labeling+of+neurons%3A+activity-dependent+promoters+have+come+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">A new era for functional labeling of neurons: activity-dependent promoters have come of age.</a> Front Neural Circuits. 8, 37(2014).</li>
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<li>Reijmers, L. G., Perkins, B. L., Matsuo, N., Mayford, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+a+stable+neural+correlate+of+associative+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Localization of a stable neural correlate of associative memory.</a> Science. 317 (5842), 1230-1233 (2007).</li>
<li>Mohr, M. A., Argast, P., Pantazis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+cellular+structures+in+vivo+using+confined+primed+conversion+of+photoconvertible+fluorescent+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protoc%22%5BJournal%5D)">Labeling cellular structures in vivo using confined primed conversion of photoconvertible fluorescent proteins.</a> Nature Protoc. 11 (12), 2419-2431 (2016).</li>
<li>Arrenberg, A. B., Del Bene, F., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+control+of+zebrafish+behavior+with+halorhodopsin%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Optical control of zebrafish behavior with halorhodopsin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (42), 17968-17973 (2009).</li>
<li>Wyart, C., Del Bene, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Let+there+be+light%3A+zebrafish+neurobiology+and+the+optogenetic+revolution%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Let there be light: zebrafish neurobiology and the optogenetic revolution.</a> Rev Neurosci. 22 (1), 121-130 (2011).</li>
<li>Douglass, A. D., Kraves, S., Deisseroth, K., Schier, A. F., Engert, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escape+behavior+elicited+by+single%2C+channelrhodopsin-2-evoked+spikes+in+zebrafish+somatosensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Escape behavior elicited by single, channelrhodopsin-2-evoked spikes in zebrafish somatosensory neurons.</a> Curr Biol. 18 (15), 1133-1137 (2008).</li>
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<li>Roberts, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+short-term+sensitization+by+an+aversive+chemical+stimulus+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Induction of short-term sensitization by an aversive chemical stimulus in zebrafish larvae.</a> eNeuro. 7 (6), (2020).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Agarose à bas point de fusion</td><td>Invitrogen</td><td>16520-100</td><td>Diluée à 3 %</td> d’isothiocyanate</tr> <tr><td>d’allyle (AITC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>377430</td><td>Stimulant chimique</td></tr><tr><td>E3</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Milieu aquatique pour larves de poisson-zèbre</td></tr><tr><td>Plats à fond de verre</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-567-400</td><td>Utilisé pour retenir le poisson-zèbre pendant les expériences</td></tr> <tr><td>d’imagerieMicropipette (10-100 uL)</td><td>Cole-Parmer</td><td>21600-14</td><td>Appareil utilisé pour la création de dilutions AITC</td></tr><tr><td>Lames de microscope</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-A3</td><td>Utilisé pour le dépistage du phénotype</td></tr><tr><td>Pince à finition miroir</td><td>DUMONT</td><td>11251-23</td><td>Utilisé pour orienter le poisson-zèbre dans l’agarose</td></tr><tr><td>myTEMP Mini incubateurs numériques Benchmark</td><td></td><td>H2200-HC</td><td>Zone d’attente pour le poisson zèbre ; réglé à 28,5 ° ; C</td></tr><tr><td>Gants en nitrile</td><td>MedPRIDE</td><td>MPR-50504</td><td>EPI de base</td></tr><tr><td>Boîtes de Pétri</td><td>VWR</td><td>89107-632</td><td>Récipient pour poissons zèbres</td></tr><tr><td>Tubes Posi-Click</td><td>DENVILLE</td><td>C-2171</td><td>Utilisé pour la dilution AITC</td></tr><tr><td>Pipettes de transfert en polyuréthane Samco</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>225</td><td>Appareil utilisé pour sélectionner l’animal/administrer un bolus dilué d’AITC</td></tr><tr><td>Stemi SV11 Apomicroscope</td><td>Zeiss</td><td>1.25496E+11</td><td>Utilisé pour la mise en scène de poissons-zèbres</td></tr><tr><td>Larves transgéniques de poisson-zèbre (2 à 7 DPF)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Sujets d’essai ; Tg(elav3 :GCaMP6s) souche</td></tr><tr><td>Zeiss Microscope confocal (Modèle LSM9)</td><td>Zeiss</td><td>3523004097</td><td>Imagerie des poissons</td></tr></tbody></table>

in vivo imagerie confocale par fluorescence de l’activité neuronale induite par la stimulation sensorielle chez des larves de poisson-zèbre partiellement restreintes

In Vivo Confocal Fluorescence Imaging of Neural Activity Induced by Sensory Stimulation in Partially Restrained Larval Zebrafish

L’administration d’isothiocyanate d’allyle provoque un signal neuronal associé au calcium chez les larves de poisson-zèbre L’administration d’AITC (étape 2.6) provoque une augmentation généralisée de l’activité neuronale associée aux GCaMP6s dans le cerveau de la larve de poisson-zèbre11,30. Nous avons observé une augmentation du signal fluorescent dans une petite région du cerveau après l’application de l’AITC, comme le montre la <strong clas...

In vivo Imagerie confocale par fluorescence de l’activité neuronale induite par la stimulation sensorielle chez des larves de poisson-zèbre partiellement restreintes

Zebrafish larvae are a promising vertebrate model system for studying the neural mechanisms of behavior. Their translucence and relatively simple neural ...

in-vivo-confocal-fluorescence-imaging-neural-activity-induced-sensory

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Ce protocole décrit l'imagerie des neurones individuels ou des cellules de la crête neurale dans la vie des embryons de poisson zèbre. Cette méthode est utilisée pour examiner les comportements cellulaires actine et la localisation utilisant la fluorescence confocale time-lapse microscopie.

Imagerie en temps réel de la motilité cellulaire et cytosquelette d&#39;actine des neurones individuels et de la crête neurale dans les embryons de poissons zèbres

Cette vidéo montre la méthode d’étude de la détection visuelle des proies chez les larves de poisson-zèbre transgénique à l’aide de l’imagerie fluorescente basée sur des indicateurs calciques avec leurs neurones exprimant des complexes indicateurs de calcium fluorescents.

Analyse de l’activité neuronale évoquée par la proie chez une larve de poisson-zèbre transgénique

Cette vidéo montre l’enregistrement des signaux électriques des neurones afférents chez une larve de poisson-zèbre paralysée en positionnant une micropipette près du ganglion de la ligne latérale et en formant un joint lâche pour la capture du signal. La solution extracellulaire maintient la viabilité neuronale pendant ce processus.

Surveillance des signaux électriques des neurones afférents chez une larve de poisson-zèbre immobilisée

Source : Schramm, P. et al. Imagerie in vivo du tissu cérébral entièrement actif chez les larves et les juvéniles de poisson-zèbre éveillés par ablation du crâne et de la peau. J. Vis. Exp. (2021)Cette vidéo démontre l’imagerie in vivo des neurones cérébelleux chez les larves de poisson-zèbre transgénique, qui expriment des protéines fluorescentes dans les neurones de Purkinje. Le processus consiste à anesthésier les larves, à les immobiliser dans de l’agarose et à retirer soigneusement la peau...

Imagerie in vivo du cerveau d’une larve de poisson-zèbre pour visualiser les neurones cérébelleux

Les protocoles décrits ici permettent d’étudier les propriétés électriques des cellules excitables dans les conditions physiologiques les moins invasives en utilisant des embryons de poisson-zèbre dans un système in vivo associés à un indicateur de tension génétiquement codé (GEVI) basé sur le transfert d’énergie par résonance de fluorescence (FRET) exprimé sélectivement dans le type de cellule d’intérêt.

Biosensing Potentiel de membrane de neurones moteurs dans les embryons vivants de zébrés

Nous présentons ici un protocole pour l’ablation d’une sous-population génétiquement marquée de neurones par un laser à deux photons de larves de poisson zèbre.

Ablation d’une Population neuronale à l’aide d’un Laser à deux photons et son évaluation à l’aide d’imagerie calcique et enregistrement comportemental chez les larves de poisson zèbre

Le poisson-zèbre est un système de modèle qui possède de nombreuses fonctionnalités utiles y compris la clarté optique, rapide développement externe et, d’une importance particulière pour le domaine de l’ouïe et l’équilibre, extérieurement situé des cellules ciliées sensorielles. Cet article décrit comment transgénique zebrafish permet de doser la mécanosensibilité cellulaire-cheveux et la fonction présynaptique dans sa totalité.

En imagerie calcique Vivo des cellules ciliées ligne latérale chez le poisson zèbre larvaire

Nous présentons ici une méthode pour imager le cerveau embryonnaire du poisson-zèbre in vivo jusqu’aux stades larvaire et juvénile. Cette procédure micro-invasive, adaptée des approches électrophysiologiques, donne accès aux détails cellulaires et subcellulaires des neurones matures et peut être combinée avec des études optogénétiques et neuropharmacologiques pour caractériser la fonction cérébrale et l’intervention médicamenteuse.

Imagerie in vivo de tissu cérébral entièrement actif chez des larves et des juvéniles de poissons-zèbres éveillés par enlèvement du crâne et de la peau

Un protocole d’imagerie in vivo du cerveau entier de larves de poisson-zèbre à l’aide de la microscopie à fluorescence tridimensionnelle est présenté ici. La procédure expérimentale comprend la préparation des échantillons, l’acquisition d’images et la visualisation.

In vivo Imagerie du cerveau entier de larves de poisson-zèbre à l’aide de la microscopie à fluorescence tridimensionnelle

Nous présentons ici un protocole permettant d’effectuer une imagerie calcique à deux photons dans le cerveau antérieur dorsal du poisson-zèbre adulte.

Imagerie calcique à deux photons de l’activité du cerveau antérieur chez le poisson-zèbre adulte

La jonction neuromusculaire larvaire du poisson-zèbre est un modèle intéressant pour l’étude de la physiologie synaptique. Il se prête à de nombreuses techniques expérimentales, notamment l’électrophysiologie et l’imagerie optique. Ici, nous décrivons un protocole d’imagerie de la transmission synaptique à l’aide d’une sonde à base de pHluorin sous un microscope à épifluorescence vertical.

Imagerie en direct du recyclage des vésicules synaptiques dans la jonction neuromusculaire de larves de poisson-zèbre disséquées

Découvrez l'imagerie confocale in vivo de l'activité neuronale induite par stimulation sensorielle chez les larves de poisson-zèbre partiellement immobilisées. Cette méthode utilise les indicateurs GCaMP pour visualiser les dynamiques calciques en temps réel.

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