Name: Isolement et enregistrement par patch-clamp de cellules entières de la microglie de l’hippocampe chez des souris adultes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T14:47:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Découvrez l'isolement et l'enregistrement patch-clamp de cellules entières de microglie de l'hippocampe chez la souris adulte. Cette méthode permet d'étudier l'activité des canaux ioniques dans leur environnement natif.

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<meta charset="utf8"></head><body>Enregistrement électrophysiologique de la microglie de l’hippocampe chez des souris adultes

<ol><li>Ginhoux, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+mapping+analysis+reveals+that+adult+microglia+derive+from+primitive+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fate mapping analysis reveals that adult microglia derive from primitive macrophages.</a> Science. 330 (6005), 841-845 (2010).</li>
<li>Tremblay, M. E., Lowery, R. L., Majewska, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+interactions+with+synapses+are+modulated+by+visual+experience%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Microglial interactions with synapses are modulated by visual experience.</a> PLoS Biol. 8 (11), e1000527(2010).</li>
<li>Voet, S., Prinz, M., Van Loo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+central+nervous+system+inflammation+and+multiple+sclerosis+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Microglia in central nervous system inflammation and multiple sclerosis pathology.</a> Trends Mol Med. 25 (2), 112-123 (2019).</li>
<li>Salter, M. W., Beggs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublime+microglia%3A+Expanding+roles+for+the+guardians+of+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Sublime microglia: Expanding roles for the guardians of the CNS.</a> Cell. 158 (1), 15-24 (2014).</li>
<li>Wohleb, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-microglia+interactions+in+mental+health+disorders%3A+For+better%2C+and+for+worse%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neuron-microglia interactions in mental health disorders: For better, and for worse.</a> Front Immunol. 7, 544(2016).</li>
<li>Kettenmann, H., Hanisch, U. K., Noda, M., Verkhratskya, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of microglia.</a> Physiol Rev. 91 (2), 461-553 (2011).</li>
<li>Sarkar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+ion+channels%3A+Key+players+in+non-cell+autonomous+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Microglial ion channels: Key players in non-cell autonomous neurodegeneration.</a> Neurobiol Dis. 174, 105861(2022).</li>
<li>Hanisch, U. K., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia%3A+Active+sensor+and+versatile+effector+cells+in+the+normal+and+pathologic+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia: Active sensor and versatile effector cells in the normal and pathologic brain.</a> Nat Neurosci. 10 (11), 1387-1394 (2007).</li>
<li>Collins, H. Y., Bohlen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+rodent+microglia+to+promote+a+dynamic+ramified+morphology+in+serum-free+medium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of rodent microglia to promote a dynamic ramified morphology in serum-free medium.</a> J Vis Exp. 133, e57122(2018).</li>
<li>Lyons, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+physiologic+properties+of+microglia+and+blood-borne+cells+in+rat+brain+slices+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Distinct physiologic properties of microglia and blood-borne cells in rat brain slices after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 20 (11), 1537-1549 (2000).</li>
<li>Li, Q., Lan, X., Han, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+tmem119%2FSALL1+and+CCR2%2FCD69+in+FACS-sorted+microglia-+and+monocyte%2Fmacrophage-enriched+cell+populations+after+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Expression of tmem119/SALL1 and CCR2/CD69 in FACS-sorted microglia- and monocyte/macrophage-enriched cell populations after intracerebral hemorrhage.</a> Front Cell Neurosci. 12, 520(2018).</li>
<li>Sarkar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv1.3+modulates+neuroinflammation+and+neurodegeneration+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Kv1.3 modulates neuroinflammation and neurodegeneration in Parkinson's disease.</a> J Clin Invest. 130 (8), 4195-4212 (2020).</li>
<li>Maezawa, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv1.3+inhibition+as+a+potential+microglia-targeted+therapy+for+Alzheimer%27s+disease%3A+Preclinical+proof+of+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Kv1.3 inhibition as a potential microglia-targeted therapy for Alzheimer's disease: Preclinical proof of concept.</a> Brain. 141 (2), 596-612 (2018).</li>
<li>Delbridge, A. R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+brain+slice+culture+microglia+exhibit+molecular+similarity+to+acutely+isolated+adult+microglia+and+provide+a+platform+to+study+neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organotypic brain slice culture microglia exhibit molecular similarity to acutely isolated adult microglia and provide a platform to study neuroinflammation.</a> Front Cell Neurosci. 14, 592005(2020).</li>
<li>Volden, T. A., Reyelts, C. D., Hoke, T. A., Arikkath, J., Bonasera, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+flow+cytometry+and+magnetic+bead-based+methods+to+enrich+cns+single+cell+suspensions+for+quiescent+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Validation of flow cytometry and magnetic bead-based methods to enrich cns single cell suspensions for quiescent microglia.</a> J Neuroimmune Pharmacol. 10 (4), 65-665 (2015).</li>
<li>Wulff, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+voltage-gated+kv1.3+k%28%2B%29+channel+in+effector+memory+t+cells+as+new+target+for+ms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The voltage-gated kv1.3 k(+) channel in effector memory t cells as new target for ms.</a> J Clin Invest. 111 (11), 1703-1713 (2003).</li>
<li>Tan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocytin-labeling+in+whole-cell+recording%3A+Electrophysiological+and+morphological+properties+of+pyramidal+neurons+in+CYLD-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Biocytin-labeling in whole-cell recording: Electrophysiological and morphological properties of pyramidal neurons in CYLD-deficient mice.</a> Molecules. 28 (10), 4092(2023).</li>
<li>Manitz, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+characterization+of+microglia+in+the+offspring+of+polyi%3AC+treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric characterization of microglia in the offspring of polyi:C treated mice.</a> Brain Res. 1636, 172-182 (2016).</li>
<li>Xu, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+protocol+of+mouse+hippocampal+primary+microglia+culture+by+using+manual+dissociation%2C+magnetic+activated+cell+sorting+and+tic+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Sheng+Li+Xue+Bao%22%5BJournal%5D)">A modified protocol of mouse hippocampal primary microglia culture by using manual dissociation, magnetic activated cell sorting and tic medium.</a> Sheng Li Xue Bao. 71 (6), 883-893 (2019).</li>
<li>Zelenka, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+protocol+for+the+isolation+of+highly+purified+neonatal+murine+microglia+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Novel protocol for the isolation of highly purified neonatal murine microglia and astrocytes.</a> J Neurosci Methods. 366, 109420(2022).</li>
<li>Keren-Shaul, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unique+microglia+type+associated+with+restricting+development+of+alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A unique microglia type associated with restricting development of alzheimer's disease.</a> Cell. 169 (7), 1276-1290.e17 (2017).</li>
<li>Yang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Various+cell+populations+within+the+mononuclear+fraction+of+bone+marrow+contribute+to+the+beneficial+effects+of+autologous+bone+marrow+cell+therapy+in+a+rodent+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Various cell populations within the mononuclear fraction of bone marrow contribute to the beneficial effects of autologous bone marrow cell therapy in a rodent stroke model.</a> Transl Stroke Res. 7 (4), 322-330 (2016).</li>
<li>Gingras, M., Gagnon, V., Minotti, S., Durham, H. D., Berthod, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+protocols+for+isolation+of+primary+motor+neurons%2C+astrocytes+and+microglia+from+embryonic+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimized protocols for isolation of primary motor neurons, astrocytes and microglia from embryonic mouse spinal cord.</a> J Neurosci Methods. 163 (1), 111-118 (2007).</li>
<li>Ramesha, S., Rayaprolu, S., Rangaraju, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+approach+to+characterize+phagocytic+properties+of+acutely-isolated+adult+microglia+and+brain+macrophages+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry approach to characterize phagocytic properties of acutely-isolated adult microglia and brain macrophages in vitro.</a> J Vis Exp. 160, e61467(2020).</li>
<li>Mccarthy, K. D., De Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+separate+astroglial+and+oligodendroglial+cell+cultures+from+rat+cerebral+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue.</a> J Cell Biol. 85 (3), 890-902 (1980).</li>
<li>Sakmann, B., Edwards, F., Konnerth, A., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+clamp+techniques+used+for+studying+synaptic+transmission+in+slices+of+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Q+J+Exp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Patch clamp techniques used for studying synaptic transmission in slices of mammalian brain.</a> Q J Exp Physiol. 74 (7), 1107-1118 (1989).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Boîte de Pétri 100 mm</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Falcon</td> tubes <td>BD</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>24 puits Boîte de</td> Pétri <td>BD</td><td>353047</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Boîte de Pétri</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>353001-50 mL Falcon</td><td>tubes BD</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu ; m dépistage cellulaire</td><td>Miltenyi</td><td>130-095-823</td><td>Pour éliminer les amas cellulaires avant le tri cellulaire</td></tr><tr><td>Kit de dissociation du cerveau de souris adulte</td><td>Miltenyi</td><td>130- 107-677</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-CD11b</td><td>Bio-Rad</td><td>MCA74</td><td>Chèvre Anti-souris IgG également disponible. Pour bloquer les immunoglobulines endogènes.</td></tr><tr><td>Anticorps anti-Iba 1</td><td>SYSY</td><td>234308</td><td>chèvre Anti-cobaye IgG) également disponible. Pour bloquer les immunoglobulines endogènes.</td></tr><tr><td>Axon Digidata 1440A</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axon MultiClamp 700B Amplificateur</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA Albumine Fraction V</td><td>BioFrox</td><td>4240GR500</td><td>Sérum</td></tr><tr><td>C57BL/6 souris&nbsp ;</td><td>Guangdong Medical Laboratory Animal Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD11 b/c MicroBeads</td><td>Miltenyi</td><td>130-105-634</td><td></td></tr><tr><td>Hydrate de chloral</td><td>Absin</td><td>abs47051394</td><td>Largement utilisé comme anesthésie chez la souris</td></tr><tr><td>Clampfit 10.6</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope confocal</td><td>Zeiss</td><td>&nbsp ; LSM 800</td><td></td></tr><tr><td>Milieu de culture</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>C11995500BT-DAPI colorant</td><td>Beyotime</td><td>C1002</td><td></td></tr><tr><td>Extracteur d’électrodes</td><td>Narishige</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Servicebio</td><td>G4203</td><td></td></tr><tr><td>Agitateur horizontal</td><td>SCILOGEX</td><td>SLK-O3000-S</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel d’analyse d’images</td><td>Fidji</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colonnes MACS</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Séparateurs MACS</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde</td><td>Fisher Scientific</td><td>T353-500</td><td>Utiliser une solution fraîche à 4 % dans 1X PBS, pH 7,2-7,4.</td></tr><tr><td>Poly-L-lysine</td><td>Beyotime</td><td>&nbsp ; C0313</td><td>Revêtement de lamelle</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>X100</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement et enregistrement par patch-clamp de cellules entières de la microglie de l’hippocampe chez des souris adultes

Isolation and Whole-Cell Patch-Clamp Recording of Hippocampal Microglia from Adult Mice

En bref, le processus implique l’isolement de la microglie de l’hippocampe du cerveau de souris adulte, suivi d’un enregistrement de ces cellules par patch-clamp de cellules entières (Figure 1). La procédure commence par la dissection de l’hippocampe de souris adultes C57BL/6J âgées de 3 à 5 mois. Plus précisément, le cerveau entier est retiré après la perfusion et placé dans une boîte de culture contenant du PBS glacé (Figure 2A). Pour assurer l’isolement aigu des cellules de l’hippocampe, le cortex cérébral est retiré et le tissu de l’hippocampe en forme de croissant est isolé intact (Figure 2B).
Pour une qualité de cellule optimale et des enregistrements ultérieurs de haute qualité sur cellules entières, il est crucial de contrôler le temps de digestion pendant la préparation de la suspension monocellulaire. L’étude a systématiquement agité manuellement le tissu de l’hippocampe dans le mélange d’enzymes et a strictement limité la période de digestion à un maximum de 15 minutes (Figure 3). Les cellules ont ensuite été isolées à l’aide de la méthode MACS, atteignant une pureté de 86,20 % ± 0,68 %19,20. Pour confirmer que ces cellules triées étaient des cellules microgliales, des marqueurs de surface microgliale ont été testés par immunofluorescence à l’aide d’anticorps anti-Iba1 et anti-CD11b, qui sont largement utilisés pour détecter les microglies18. Les résultats ont indiqué que les cellules isolées étaient CD11b et Iba1 positives, confirmant l’isolement réussi de la microglie (Figure 4).
Enfin, pour évaluer si les microglies isolées sont de haute qualité pour les expériences de suivi, nous décrivons comment effectuer des enregistrements patch-clamp de cellules entières pour évaluer les courants potassiques microgliaux. La microglie enregistrée avait une capacité membranaire moyenne de 10,42 ± 2,05 (Figure 5). Les résultats ont démontré que les courants potassiques microgliaux pouvaient être enregistrés, indiquant que les microglies fortement isolées conviennent aux études neurobiologiques.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig01.jpg"> 
Figure 1 : Vue d’ensemble de la procédure expérimentale. Il y a quatre étapes principales : les tissus cérébraux sont soigneusement extraits et l’hippocampe est disséqué bilatéralement ; Les tissus de l’hippocampe sont digérés pour préparer une suspension unicellulaire à l’aide d’un mélange enzymatique tel que détaillé dans la section du protocole ; les cellules cibles sont isolées par une méthode de tri cellulaire activée par magnétisme ; et les courants potassiques dans les cellules isolées aiguës sont dosés par enregistrement patch-clamp de cellules entières. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig02.jpg"> 
Figure 2 : Dissection de l’hippocampe. (A) L’ensemble du cerveau d’une souris de 3 à 5 mois. (B) Hippocampe bilatéral isolé. Barre d’échelle : 0,5 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig03.jpg"> 
Figure 3 : Schéma de principe montrant la digestion des tissus de l’hippocampe. Illustration des étapes expérimentales critiques, garantissant que le tissu de l’hippocampe est digéré en une suspension unicellulaire en ajoutant des mélanges d’enzymes à 37 °C avec agitation continue jusqu’à 15 min. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig04.jpg"> 
Figure 4 : Identification d’une microglie hippocampique aiguë isolée. Des images confocales représentatives montrant des cellules CD11b (vertes) et Iba1 (rouges) positives purifiées de l’hippocampe, confirmant que les cellules isolées sont des cellules microgliales. Barre d’échelle : 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig05.jpg"> 
Figure 5 : Enregistrement des courants potassiques microgliaux de cellules entières. (A) Une électrode d’enregistrement est positionnée à la surface d’une microglie hippocampique isolée. Barre d’échelle : 20 μm. (B) Courants potassiques représentatifs de la microglie hippocampique isolée aiguëment isolée dans des conditions de pince de tension. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Isolement et enregistrement par patch-clamp de cellules entières de la microglie de l’hippocampe chez des souris adultes

Microglia are resident immune cells in the brain that interact with neurons to maintain the homeostasis of the central nervous system (CNS). Studies show ...

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La préparation de coupes de cerveau de courte durée isolé hippocampes, ainsi que les enregistrements électrophysiologiques simultanées d'astrocytes et les neurones...

Deux enregistrements électrophysiologiques des synapses-réponses évoquées astrogliales et neuronales aiguës dans des coupes d&#39;hippocampe

La vidéo montre une technique permettant d’isoler la microglie du cortex d’un cerveau de souris adulte. Tout d’abord, le cortex subit une segmentation et une homogénéisation pour éliminer les neurones et autres cellules gliales, préservant ainsi la microglie. Ensuite, la suspension cellulaire est exposée à des microbilles magnétiques anti-myéline et à un champ magnétique, séparant efficacement les cellules microgliales et myéloïdes des débris de myéline et des cellules contenant de la myéline.

Isolement de la microglie du cortex d’un cerveau de souris adulte

La vidéo présente un protocole pour étudier les interactions synaptiques et les réponses neuronales dans une tranche de cerveau d’hippocampe de souris transfectée. Il s’agit d’éclairer des neurones sensoriels à longue portée pour déclencher des potentiels d’action et d’enregistrer les potentiels post-synaptiques excitateurs qui en résultent dans le neurone enregistré à l’aide de la technique du patch-clamp à cellules entières.

photostimulation et enregistrements de neurones dans des tranches d’hippocampe de souris

Cette vidéo montre l’enregistrement de l’activité du réseau neuronal rythmique, également connue sous le nom d’oscillations thêta, dans un hippocampe isolé. Des électrodes sont insérées dans diverses couches et positions spatiales pour détecter et analyser les oscillations thêta. Cela montre les compositions neuronales uniques et la connectivité du réseau neuronal à travers les différentes couches de l’hippocampe.

Enregistrement in vitro des oscillations thêta dans l’hippocampe de souris

Une des clés de réussite de l'enquête de la biologie de la microglie est la préservation de la microglie immunofunction ex vivo lors de l'isolement de tissu du SNC. Isoler la microglie par les résultats serrant rotatifs dans des cultures de cellules de grande pureté et immunofonctionnel évaluée par imagerie de fluorescence, immunocytochimie, et ELISA activation de la microglie suivante avec le lipopolysaccharide stimuli pro-inflammatoires (LPS) et Pam 3 CSK 4 (Pam).

Isolation des corticale microglie avec immunophénotype préservée et fonctionnalité De murins nouveau-nés

Réseaux corticaux sont contrôlés par un petit, mais diversifié ensemble des interneurones inhibiteurs. Exploration fonctionnelle des interneurones nécessite donc l'enregistrement ciblée et identification rigoureuse. Décrit ici est une approche combinée impliquant des enregistrements de cellules entières de paires simples ou synapses de neurones couplés avec marquage intracellulaire, post-hoc morphologique et l'analyse immunocytochimique.

De cellules entières de patch-clamp enregistrements de Morphologically- et interneurones hippocampiques neurochemically identifiés

Ici, nous présentons un protocole pour l'enregistrement du réseau neuronal rythmique theta et les oscillations gamma à partir d'une préparation isolée de l'hippocampe entier. Nous décrivons les étapes expérimentales de l'extraction de l'hippocampe aux détails des enregistrements de pince à lames, à l'unité et à l'ensemble des cellules, ainsi qu'à la stimulation optogénétique du rythme theta.

Tuning dans la bande Hippocampal Theta<em&gt; In Vitro</em&gt;: Méthodologies pour l&#39;enregistrement à partir du circuit de Septohippocampal de Rongeur isolé

Nous fournissons un protocole pour l'isolement des microglies de différentes régions disséquées d'un hémisphère de cerveau de souris adulte, suivi de la préparation semi-automatisée de bibliothèque pour le séquençage profond d'ARN unicellulaire des transcriptomes pleine longueur. Cette méthode aidera à élucider l'hétérogénéité fonctionnelle des microglies dans la santé et la maladie.

Isolement des microglies spécifiques à la région de l'hémisphère cérébral d'une souris adulte pour le séquençage profond de l'ARN à une seule cellule

Nous présentons un protocole pour préparer des tranches aiguës de l’hippocampe dorsale-intermédiaire des souris. Nous comparons cette préparation transversale avec le tranchage coronal en termes de qualité des enregistrements et de préservation des caractéristiques morphologiques des neurones enregistrés.

Préparation de tranches aiguës de l’hippocampe dorsal pour l’enregistrement des cellules entières et la reconstruction neuronale dans le gyrus bosselé de souris adultes

Cet article décrit une méthode d’observation chronique in vivo de la microglie au repos dans l’hippocampe de souris CA1 à l’aide d’une chirurgie contrôlée avec précision et d’une microscopie à deux photons.

In vivo Imagerie chronique à deux photons de la microglie dans l’hippocampe de souris

Nous décrivons un protocole permettant d’isoler les cellules microgliales de l’hypothalamus de souris (ou de petites structures cérébrales équivalentes) en utilisant le tri cellulaire activé magnétiquement (MACS), dans un délai relativement court. La microglie hypothalamique triée par MACS peut être utilisée pour l’analyse ex vivo et peut être utilisée pour effectuer des essais in vitro .

Isolement de la microglie hypothalamique à partir du cerveau d’une souris adulte fraîchement perfusée par tri cellulaire activé par magnétisme  

Découvrez l'isolement et l'enregistrement patch-clamp de cellules entières de microglie de l'hippocampe chez la souris adulte. Cette méthode permet d'étudier l'activité des canaux ioniques dans leur environnement natif.

Isolement et enregistrement par patch-clamp de cellules entières de la microglie de l’hippocampe chez des souris adultes

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