Name: Imagerie longitudinale intravitale de la dynamique vasculaire dans la moelle osseuse calvaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: Découvrez la microscopie intravitale à deux photons pour étudier la dynamique vasculaire dans la moelle osseuse calvaire. Cette méthode permet de visualiser les réponses des vaisseaux sanguins à l'hématopoïèse normale et pathologique chez les modèles transgéniques.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Lo Celso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+tracking+of+individual+haematopoietic+stem%2Fprogenitor+cells+in+their+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche.</a> Nature. 457 (7225), 92-96 (2009).</li>
<li>Pittet, M. J., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging.</a> Cell. 147 (5), 983-991 (2011).</li>
<li>Itkin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+bone+marrow+blood+vessels+differentially+regulate+haematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Distinct bone marrow blood vessels differentially regulate haematopoiesis.</a> Nature. 532 (7599), 323-328 (2016).</li>
<li>Christodoulou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+imaging+of+native+haematopoietic+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal imaging of native haematopoietic stem and progenitor cells.</a> Nature. 578 (7794), 278-283 (2020).</li>
<li>Upadhaya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+reveals+motility+of+adult+hematopoietic+stem+cells+in+the+bone+marrow+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging reveals motility of adult hematopoietic stem cells in the bone marrow niche.</a> Cell Stem Cell. 27 (2), 336-345.e4 (2020).</li>
<li>Hawkins, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+acute+leukaemia+exhibits+dynamic+interactions+with+bone+marrow+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-cell acute leukaemia exhibits dynamic interactions with bone marrow microenvironments.</a> Nature. 538 (7626), 518-522 (2016).</li>
<li>Duarte, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+in+vivo+characteristics+of+acute+myeloid+leukemia+cells+behavior+by+intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Defining the in vivo characteristics of acute myeloid leukemia cells behavior by intravital imaging.</a> Immunol Cell Biol. 97 (2), 229-235 (2019).</li>
<li>Passaro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+permeability+in+the+bone+marrow+microenvironment+contributes+to+disease+progression+and+drug+response+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Increased vascular permeability in the bone marrow microenvironment contributes to disease progression and drug response in acute myeloid leukemia.</a> Cancer Cell. 32 (3), 324-341.e6 (2017).</li>
<li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLT3+inhibitors+upregulate+CXCR4+and+E-selectin+ligands+via+ERK+suppression+in+AML+cells+and+CXCR4%2FE-selectin+inhibition+enhances+anti-leukemia+efficacy+of+FLT3-targeted+therapy+in+AML%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">FLT3 inhibitors upregulate CXCR4 and E-selectin ligands via ERK suppression in AML cells and CXCR4/E-selectin inhibition enhances anti-leukemia efficacy of FLT3-targeted therapy in AML.</a> Leukemia. 37 (6), 1379-1383 (2023).</li>
<li>Pendleton, E. G., Tehrani, K. F., Barrow, R. P., Mortensen, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+harmonic+generation+characterization+of+collagen+in+whole+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Second harmonic generation characterization of collagen in whole bone.</a> Biomed Opt Express. 11 (8), 4379-4396 (2020).</li>
<li>Dispositif de liaison d'un animal de laboratoire à au moins un système d'expérimentation, et procédé de fixation d'un tel dispositif. France patent. , WO/2021/123449 (2021).</li>
<li>Horton, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia+induced+by+MLL-ENL+is+cured+by+oncogene+ablation+despite+acquisition+of+complex+genetic+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia induced by MLL-ENL is cured by oncogene ablation despite acquisition of complex genetic abnormalities.</a> Blood. 113 (20), 4922-4929 (2009).</li>
<li>Scott, M. K., Akinduro, O., Lo Celso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+4-dimensional+tracking+of+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+adult+mouse+calvarial+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo 4-dimensional tracking of hematopoietic stem and progenitor cells in adult mouse calvarial bone marrow.</a> J Vis Exp. (91), e51683(2014).</li>
<li>Jung, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+mouse+bone+marrow%3A+Hemodynamics+and+vascular+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of mouse bone marrow: Hemodynamics and vascular permeability.</a> Methods Mol Biol. 1763, 11-22 (2018).</li>
<li>Le, V. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+longitudinal+visualization+of+bone+marrow+engraftment+process+in+mouse+calvaria+using+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo longitudinal visualization of bone marrow engraftment process in mouse calvaria using two-photon microscopy.</a> Sci Rep. 7, 44097(2017).</li>
<li>Spencer, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+measurement+of+local+oxygen+concentration+in+the+bone+marrow+of+live+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Direct measurement of local oxygen concentration in the bone marrow of live animals.</a> Nature. 508 (7495), 269-273 (2014).</li>
<li>Yang, M., Mahanty, A., Jin, C., Wong, A. N. N., Yoo, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+metabolic+imaging+for+sensitive+and+robust+monitoring+of+anti-CD47+immunotherapy+response+in+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Label-free metabolic imaging for sensitive and robust monitoring of anti-CD47 immunotherapy response in triple-negative breast cancer.</a> J Immunother Cancer. 10 (9), e005199(2022).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+strain-specific+morphogenesis+and+angiogenesis+of+murine+calvaria+with+large-scale+optoacoustic+and+Ultrasound+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Tracking strain-specific morphogenesis and angiogenesis of murine calvaria with large-scale optoacoustic and Ultrasound Microscopy.</a> J Bone Miner Res. 37 (5), 1032-1043 (2022).</li>
<li>Lassailly, F., Foster, K., Lopez-Onieva, L., Currie, E., Bonnet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+imaging+reveals+structural+and+functional+heterogeneity+in+different+bone+marrow+compartments%3A+functional+implications+on+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Multimodal imaging reveals structural and functional heterogeneity in different bone marrow compartments: functional implications on hematopoietic stem cells.</a> Blood. 122 (10), 1730-1740 (2013).</li>
<li>Rindone, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+3D+imaging+of+the+cranial+microvascular+environment+at+single-cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Quantitative 3D imaging of the cranial microvascular environment at single-cell resolution.</a> Nat Commun. 12 (1), 6219(2021).</li>
<li>Mills, W. A. 3rd, Coburn, M. A., Eyo, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emergence+of+the+calvarial+hematopoietic+niche+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">The emergence of the calvarial hematopoietic niche in health and disease.</a> Immunol Rev. 311 (1), 26-38 (2022).</li>
<li>Bixel, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+is+uncoupled+from+osteogenesis+during+calvarial+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis is uncoupled from osteogenesis during calvarial bone regeneration.</a> Nat Commun. 15 (1), 4575(2024).</li>
<li>Koh, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+skull+bone+marrow+is+an+expanding+and+resilient+haematopoietic+reservoir%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adult skull bone marrow is an expanding and resilient haematopoietic reservoir.</a> Nature. 636 (8041), 172-181 (2024).</li>
<li>Kolabas, Z. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+molecular+profiles+of+skull+bone+marrow+in+health+and+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distinct molecular profiles of skull bone marrow in health and neurological disorders.</a> Cell. 186 (17), 3706-3725.e9 (2023).</li>
<li>Rosenhain, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preclinical+micro-computed+tomography+database+including+3D+whole+body+organ+segmentations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Data%22%5BJournal%5D)">A preclinical micro-computed tomography database including 3D whole body organ segmentations.</a> Sci Data. 5, 180294(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Amira</td><td>Thermo ScientificTM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anesthésie</td><td></td><td></td><td>Isoflurane 2 % à 3 %</td></tr><tr><td>Masque anesthésique (détection d’animaux)</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unité d’anesthésie</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>N° B6. Cg-Gt(ROSA)26Sortm9(CAG-tdTomato)Hze</td><td>Laboratoires Jackson</td><td>MGI : 3809523</td><td></td></tr><tr><td>CalvariaVue</td><td>Ymétrie</td><td>https://ymetry.com/site/head-fixation-implants/44-mouse-head-fixation-implant-for-calvaria.html</td><td></td></tr><tr><td>Ciment dentaire</td><td>Kemdent</td><td>SUN527</td><td></td></tr><tr><td>Dextran 500 kDa-Cy5&nbsp ;</td><td>Toubou-bio</td><td>DX500-S5-1</td><td>3 mg/souris</td></tr><tr><td>Dextran 70 kDa-TRITC</td><td>Sigma</td><td>Réf. T1162</td><td>3 mg/souris</td></tr><tr><td>Désinfectant</td><td>MP-Labo</td><td>Dermidine-60ml</td><td></td></tr><tr><td>Rasoir</td><td>Aescular</td><td>Isis</td><td></td></tr><tr><td>Gel pour les yeux</td><td>Ocry-gel</td><td>10g</td><td></td></tr><tr><td>Fidji&nbsp ;</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>v 17 mai 30</td><td></td></tr><tr><td>Fidji plugings pour faire le pont avec Imaris</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>Imaris_Bridge96.jar ; ImarisBridgeUtils.jar</td><td></td></tr><tr><td>Caisson chauffant&nbsp ;</td><td>Datteset</td><td>Thermacage</td><td></td></tr><tr><td>Coussin chauffant pour la chirurgie</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Coussin chauffant d’imagerie & Sonde rectale</td><td>F. Haer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imaris v9.6.0</td><td>Instruments Oxford</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gel intrasite</td><td>Chinoxie</td><td>2390766</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel LAS AF</td><td>Leica</td><td>LAS X 3.5.7.23225</td><td></td></tr><tr><td>Médicament</td><td></td><td></td><td>Buprecare, 0,01 mg/kg</td></tr><tr><td>Objectif HCX IRAPO L 25x/0.95 EAU</td><td>Leica</td><td>506374</td><td></td></tr><tr><td>Tampon salin (PBS 1x)</td><td>Sigma</td><td>Réf. P4417</td><td>Stériliser en autoclave</td></tr><tr><td>SP8 DIVE FALCON Microscope multiphotonique&nbsp ;</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masque stéréotoxique</td><td>Minerve</td><td>1201261</td><td></td></tr><tr><td>Perles de stérilisateur</td><td>Sigma</td><td>Z742555</td><td></td></tr><tr><td>Outils chirurgicaux</td><td>Moria</td><td>4877A ; 2183</td><td></td></tr><tr><td>Couverture de survie</td><td>SECURIMED</td><td>11006</td><td></td></tr><tr><td>Écouvillons / Mouchoirs</td><td></td><td></td><td>Stériliser en autoclave</td></tr><tr><td>Seringue 1 mL 26 g</td><td>BD Plastipak</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Régulateur de température</td><td>F. Haer</td><td>40-90-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>souris Tg(Nes-EGFP)33Enik&nbsp ;</td><td>Laboratoires Jackson</td><td>MGI : 5523870</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Pdgfb-icre/ERT2)1Souris Frut</td><td>Laboratoires Jackson</td><td>MGI : 3793852</td><td></td></tr><tr><td>Souris Tg(Cdh5-cre/ERT2)1Rha</td><td>Laboratoires Jackson</td><td>MGI : 3848982</td><td></td></tr><tr><td>Gel à ultrasons&nbsp ;</td><td>Laboratoires Parker</td><td>Aquasonic 100</td><td></td></tr></tbody></table>

imagerie longitudinale intravitale de la dynamique vasculaire dans la moelle osseuse calvaire

Intravital Longitudinal Imaging of Vascular Dynamics in the Calvarial Bone Marrow

Dans les figures 1 et 2, le modèle CAO d’un implant de fixation de la tête en titane positionné sur un crâne de souris numérisé, qui est conçu pour suivre la structure anatomique du crâne et fournir un dispositif léger et biocompatible capable de tenir fermement à la platine du microscope assurant la stabilité au niveau cellulaire. En suivant ce protocole étape par étape, l’implant est fixé de manière stable au crâne de la souris et peut être solidement fixé au support de microscope par sa queue d’aronde, permettant une zone d’imagerie plate pour la rétention de liquide et l’observation intravitale au fil du temps. Il peut être fermé avec un couvercle pour minimiser tout dommage ou infection de la plaie, permettant une imagerie répétée de la même zone tissulaire pendant des semaines. Une fois réveillée, la souris portant un implant de tête peut se promener librement, se nourrir et avoir une routine régulière.
La figure 3 montre une vue par balayage tuile du système vasculaire calvaire BM composé de capillaires hétérogènes, y compris les artérioles, les capillaires de transition et les sinusoïdes. Les vaisseaux sont intégrés dans un microenvironnement tissulaire complexe en contact étroit avec la surface de l’os et les cellules mésenchymateuses périvasculaires. Au cours du développement de la leucémie, des cellules leucémiques isolées peuvent être détectées dans le microenvironnement de la BM à proximité des vaisseaux, et leur greffe augmente avec le temps, remplissant la calvaria aux stades avancés de la maladie.
La figure 4 montre comment les images obtenues avec ce protocole peuvent fournir des données quantitatives, qui peuvent être analysées avec des méthodes statistiques. Nous montrons comment segmenter les vaisseaux à l’aide de l’outil à filament IMARIS et mesurer la longueur et le diamètre des fragments vasculaires, ainsi que leur rectitude. La corrélation de ces paramètres peut également être évaluée.
La figure 5 montre l’acquisition d’une imagerie longitudinale de deux positions différentes de la BM calvaire au cours de la progression de la LMA aux jours 4, 7 et 10, le jour 10 étant associé à une greffe de ~50 % de la BM avec des cellules leucémiques, mesurée par cytométrie en flux (non illustrée). On peut observer un remodelage important de la taille des vaisseaux préexistants, ainsi que la formation de nouveaux vaisseaux dans des zones spécifiques associées à une perte osseuse locale.
Enfin, dans la figure 6, nous montrons comment la perméabilité vasculaire peut être mesurée en tant que paramètre dynamique avec l’imagerie en accéléré montrant la capacité de différentes barrières vasculaires à retenir un colorant fluorescent au fil du temps.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig01.jpg"> 
Figure 1 : Conception et production d’un support de tête biocompatible à base de titane. (A) Parties de l’implant in situ : 1 anneau d’observation, 2 éléments de cimentation, 3 ancrages stabilisateurs, 4 queues, 5 queues d’aronde, 6 trous filetés, 7 Bregma. (B) Connexion de l’implant de tête au support : 8 corps de fixation, 9 pinces, 10 leviers excentriques, 11 structure, 12 objectifs de microscope. (C) Déformation de l’implant contre charge par simulation FEM où le déplacement maximal est de 0,23 μm contre une force de 0,04 N. (D) Couvercle de protection et sa vis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig02.jpg"> 
Figure 2 : Préparation de la souris pour l’imagerie intravitale. (A) Vue de l’implant crânien et de la zone d’imagerie exposée chirurgicalement avant l’imagerie. (B) Implant de tête fermement fixé au crâne de la souris. (C) Souris réveillée dans la cage de récupération avec le couvercle fermé sur l’implant de tête. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig03.jpg"> 
Figure 3 : Imagerie intravitale du système vasculaire de la calvarie. (A) Projection z de la vue du balayage de la tuile du système vasculaire de la calvaria marquée par cdh5-DSRED. (B) Zoomez sur les zones représentées pour décrire différents types de vaisseaux représentés par des flèches, les artérioles par des flèches rouges, les capillaires de transition par des flèches orange, les sinusoïdes par des flèches jaunes. (i) et (ii) projections z de tissu X μm ; (iii) tranche unique. (C) Coupes uniques de plusieurs champs de vision de vaisseaux BM, montrant la surface osseuse (SHG), les cellules périvasculaires (nes-GFP+) et la lumière vasculaire (dextran-TRITC). (D) Niche vasculaire associée à la progression de la LAM. Tranches représentatives des premiers (en haut) et des derniers (en bas) du développement de la lutte contre le blanchiment d’argent. La leucémie MLL-AF9 est marquée avec tdTOMATO (flèches rouges), tandis que les vaisseaux sont marqués avec pdgfb-GFP (flèches vertes), la surface osseuse avec SHG et les macrophages en jaune (autofluorescence, astérisque jaune). Barres d’échelle = 200 μm (A), 40 μm (B, D-panneau inférieur), 50 μm (C). Abréviations : BM = moelle osseuse ; GFP = protéine fluorescente verte ; LMA = leucémie myéloïde aiguë ; EC= Cellules endothéliales. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig04.jpg"> 
Figure 4 : Quantification des paramètres vasculaires. (A) Mesure des paramètres vasculaires à l’aide de l’outil de filament IMARIS dans une projection z représentative des vaisseaux de la moelle osseuse marqués avec TRITC-dextran. Des représentations linéaires et coniques sont présentées. (B) Quantification des paramètres du récipient dans l’image illustrée en A. (C) Corrélation entre les paramètres vasculaires montrant une corrélation opposée entre la rectitude et la longueur des vaisseaux (négative, Spearman r = -3523 ; p &lt; 0,0001 ; R2 = 0,2102) en fonction du diamètre (positif ; Spearman r = 0,4110 ; p &lt; 0,0001 ; R2 = 0,1299). Barres d’échelle = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig05.jpg"> 
Figure 5 : Imagerie longitudinale de deux positions différentes de la calvaria BM au cours du développement de la LAM. Les cellules endothéliales qui tapissent les vaisseaux sont marquées avec du cdh5-GFP, la surface osseuse avec SHG et les macrophages en jaune (autofluorescence). Le remodelage des vaisseaux préexistants (flèches rouges) et la formation de nouveaux vaisseaux (flèches jaunes) sont illustrés. Barres d’échelle = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig06.jpg"> 
Figure 6 : Perméabilité vasculaire. (A) Schémas de mesure de la perméabilité vasculaire à l’aide de l’outil de surface IMARIS. (B) Projection Z de la même zone imagée longitudinalement sur 1 h. (C) Quantification de la perméabilité vasculaire à l’intérieur des aires comme illustré en A. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig06large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Figure supplémentaire S1 : Crâne préparé. Dans le plan médian, créez un axe tangent à la calvariose, puis enregistrez le crâne préparé. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_1_JoVE67332R1_screenfile5_prepared_skull.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>
Figure supplémentaire S2 : Plans espacés de 2 mm. Comment créer un ensemble de plans équidistants (espacement de 2 mm) sur le crâne. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_2_JoVE67332R1_screenfile4_plans_2mm_spaced.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>
Figure supplémentaire S3 : Contour de surface observable. Créez une esquisse dans le plan calvaire et créez une cannelure en forme de poire de AP +6,5 à -2, largeur de 6 mm à AP 0,0. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_3_JoVE67332R1_screenfile3_Observable_Surface_Contour.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>
Figure supplémentaire S4 : Observation vindow. Créez un croquis dans le plan calvaire et dessinez une forme en C de 0,5 mm d’épaisseur en vous connectant à la fenêtre d’observation . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_4_JoVE67332R1_screenfile1_1.4.1.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>
Figure supplémentaire S5 : Cliquez sur Nouvelle étude. Accédez à l’onglet Simulation (s’il est visible) ou accédez à Simulation | Étudier. Dans la boîte de dialogue Etude , choisissez Statique comme type d’étude. Cliquez sur OK pour créer l’étude. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_5_JoVE67332R1_screenfile2_clic_new_study.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>
Figure supplémentaire S6 : Clic droit pour créer un maillage. Affinez le maillage dans les zones où une contrainte ou une déformation élevée est attendue. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_6_JoVE67332R1_screenfile6_right_clic_create_mesh.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>

Imagerie longitudinale intravitale de la dynamique vasculaire dans la moelle osseuse calvaire

Intravital longitudinal fluorescence microscopy imaging has emerged as a crucial technique for studying dynamic biological processes, notably in the ...

intravital-longitudinal-imaging-vascular-dynamics-calvarial-bone

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Microscopie intravitale à suivre spatiale et temporelle des événements hémodynamiques et inflammatoires dans la microcirculation piales.

Microscopie intravitale de la microcirculation cérébrale souris en utilisant une fenêtre fermée crânienne

Dans cet article, nous présentons une technique simple, pratique pour la coulée vasculaire cérébral qui est facile à réaliser et peut être utilisé à l'image de l'arbre vasculaire du cerveau de souris adulte.

Moulage cérébrovasculaire de la souris adulte pour l&#39;imagerie 3D et l&#39;analyse morphologique

La nature des interactions entre les cellules souches hématopoïétiques et progénitrices (HSPCs) et les niches de la moelle osseuse est mal comprise. Mesure des modifications de matériel et un protocole d'acquisition en plusieurs étapes permettent l'utilisation de deux photons et la microscopie confocale à l'image ex vivo des HSPCs marqués hébergés dans les zones de la moelle osseuse, les interactions de suivi et mouvement.

In Vivo suivi 4-Dimensional de hématopoïétiques cellules souches et progénitrices adultes dans la voûte du crâne de souris de moelle osseuse

Les monocytes sont des régulateurs clés de l’immunité innée et jouent un rôle critique dans le renouvellement du système phagocytaire mononucléaire périphérique et en cas d’inflammation. Ce manuscrit décrit la procédure d’imagerie en temps réel de la moelle osseuse de la calvaria de souris pour étudier le mécanisme de mobilisation des monocytes.

Suivi moelle osseuse de souris monocytes<em&gt; In Vivo</em

Implantation de greffons osseux autologues et allogéniques constituent accepté approches pour traiter importante perte osseuse cranio-facial. Pourtant, l'effet de la composition de greffe sur l'interaction entre la néovascularisation, la différenciation cellulaire et la formation osseuse est claire. Nous présentons un protocole d'imagerie multimodale visant à élucider l'interdépendance angiogenèse ostéogenèse à la proximité de la greffe.

Tomodensitométrie et l&#39;imagerie optique du couplage de l&#39;ostéogenèse-angiogenèse à évaluer l&#39;intégration des crâniens autogreffes et allogreffes

Cet article décrit une méthode par laquelle l’architecture vasculaire du cerveau peut être quantifiée à l’aide de la microscopie à deux photons in vivo et ex vivo.

Quantification de l&#39;architecture vasculaire cérébral en utilisant la microscopie à deux photons dans un modèle de souris de la neuro-inflammation induite par le VIH

Ce manuscrit décrit une procédure pour suivre le remodelage de la cerebrovasculature pendant amyloïde accumulation de plaque in vivo en utilisant longitudinale microscopie à deux photons. Préparation-crâne aminci permet la visualisation des colorants fluorescents pour évaluer la progression des lésions vasculaires cérébrales dans un modèle de souris de la maladie d'Alzheimer.

Longitudinal<em&gt; In Vivo</em&gt; Imagerie du Cerebrovasculature: Pertinence pour les maladies du système nerveux central

Le but de cet article est de présenter une méthode qui permet une reconstruction en 3 dimensions de l’arbre vasculaire cérébrale chez la souris après que micro calculé tomographie et détermination des volumes de segments de tout navire qui peuvent être utilisés pour quantifier le vasospasme cérébral dans modèles murins de l’hémorragie sous-arachnoïdienne.

Une méthode volumétrique pour la Quantification du vasospasme cérébral dans un modèle murin d’hémorragie sous-arachnoïdienne

Nous décrivons ici la méthode d’imagerie des mégacaryocytes et des proplaquettaires dans la moelle de l’os du crâne de souris vivantes en utilisant la microscopie à deux photons.

In Vivo Imagerie à deux photons de mégacaryocytes et de proplaquettaires dans la moelle osseuse du crâne de souris

Ce protocole présente des étapes pour acquérir et analyser des images fluorescentes de calcium à partir de péricytes ensanglant le cerveau et des données de flux sanguin provenant de vaisseaux sanguins voisins chez des souris anesthésiées. Ces techniques sont utiles pour l’étude de la physiologie cellulaire murale et peuvent être adaptées pour étudier les transitoires de calcium dans n’importe quel type de cellule.

Calcium péricyte cérébral et imagerie hémodynamique chez des souris transgéniques in vivo

Le recrutement des leucocytes et des plaquettes constitue un composant essentiel nécessaire à la croissance efficace des artères collatérales au cours de l’artériogenèse. La microscopie multiphotonique est un outil efficace pour suivre la dynamique cellulaire avec une résolution spatio-temporelle élevée in vivo et moins photo-toxicité pour étudier le recrutement et l’extravasation des leucocytes au cours de l’artériogenèse.

Imagerie intravitale multiphotonique pour la surveillance du recrutement leucocytaire au cours de l’artériogenèse dans un modèle murin de membre postérieur

Découvrez la microscopie intravitale à deux photons pour étudier la dynamique vasculaire dans la moelle osseuse calvaire. Cette méthode permet de visualiser les réponses des vaisseaux sanguins à l'hématopoïèse normale et pathologique chez les modèles transgéniques.

Imagerie longitudinale intravitale de la dynamique vasculaire dans la moelle osseuse calvaire

Explorer plus de vidéos