Name: Modèle de cicatrisation des brûlures en forme d’échiquier de souris basé sur un dispositif de chauffage numérique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: Découvrez un protocole de modèle de cicatrisation des brûlures chez la souris utilisant un dispositif de chauffage numérique. Cette méthode reproduit des brûlures épidermiques et dermiques complètes pour évaluer l'efficacité des traitements.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modèle cohérent de brûlures chez la souris pour l’évaluation des pansements thérapeutiques

<ol><li>Mofazzal Jahromi, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanomedicine+and+advanced+technologies+for+burns%3A+Preventing+infection+and+facilitating+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Nanomedicine and advanced technologies for burns: Preventing infection and facilitating wound healing.</a> Adv Drug Deliv Rev. 123, 33-64 (2018).</li>
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<li>Tavares Pereira, D. D. S., Lima-Ribeiro, M. H. M., De Pontes-Filho, N. T., Carneiro-Leão, A. M. D. A., Correia, M. T. D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+animal+model+for+studying+deep+second-degree+thermal+burns%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Development of animal model for studying deep second-degree thermal burns.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 460841(2012).</li>
<li>Gong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exudate+absorbing+and+antimicrobial+hydrogel+integrated+with+multifunctional+curcumin-loaded+magnesium+polyphenol+network+for+facilitating+burn+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Exudate absorbing and antimicrobial hydrogel integrated with multifunctional curcumin-loaded magnesium polyphenol network for facilitating burn wound healing.</a> ACS Nano. 17 (22), 22355-22370 (2023).</li>
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<li>Lou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+self-assembling+peptide+nanofiber+hydrogel+as+a+bioactive+3D+platform+to+promote+chronic+wound+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Injectable self-assembling peptide nanofiber hydrogel as a bioactive 3D platform to promote chronic wound tissue regeneration.</a> Acta Biomater. 135, 100-112 (2021).</li>
<li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).</li>
<li>Bielefeld, K. A., Amini-Nik, S., Alman, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutaneous+wound+healing%3A+Recruiting+developmental+pathways+for+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Cutaneous wound healing: Recruiting developmental pathways for regeneration.</a> Cell Mol Life Sci. 70 (12), 2059-2081 (2013).</li>
<li>Yildiz, S. C., Demir, C., Ayhanci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examination+of+the+effects+of+kefir+on+healing+factors+in+a+mice+burn+model+infected+with+E.+coli%2C+S.+aureus+and+P.+aeruginosa+using+qRT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%22%5BJournal%5D)">Examination of the effects of kefir on healing factors in a mice burn model infected with E. coli, S. aureus and P. aeruginosa using qRT-PCR.</a> Burns. 49 (2), 425-431 (2023).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burn+injury%3A+Challenges+and+advances+in+burn+wound+healing%2C+infection%2C+pain+and+scarring%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Burn injury: Challenges and advances in burn wound healing, infection, pain and scarring.</a> Adv Drug Deliv Rev. 123, 3-17 (2018).</li>
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<li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+in+the+hair+follicle+bulge+contribute+to+wound+repair+but+not+to+homeostasis+of+the+epidermis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Stem cells in the hair follicle bulge contribute to wound repair but not to homeostasis of the epidermis.</a> Nat Med. 11 (12), 1351-1354 (2005).</li>
<li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt-dependent+de+novo+hair+follicle+regeneration+in+adult+mouse+skin+after+wounding%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wnt-dependent de novo hair follicle regeneration in adult mouse skin after wounding.</a> Nature. 447 (7142), 316-320 (2007).</li>
<li>Chen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pullulan-collagen+hydrogel+wound+dressing+promotes+dermal+remodeling+and+wound+healing+compared+to+commercially+available+collagen+dressings%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Pullulan-collagen hydrogel wound dressing promotes dermal remodeling and wound healing compared to commercially available collagen dressings.</a> Wound Repair Regen. 30 (3), 397-408 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Pointe de pipette de 1 mL</td><td>KIRGEN, USA</td><td>KG1333</td><td>Utilisé pour localiser les sites de brûlure</td></tr><tr><td>3 M Tegaderm film</td><td>3M, USA</td><td>1624WCN 6 cm x 7 cm</td><td>Pour le recouvrement de la plaie après l’induction de la brûlure</td></tr><tr><td>4 % de paraformaldéhyde (PFA)</td><td>Biosharp, Chine</td><td>BL539A</td><td>Utilisé pour fixer les échantillons de peau</td></tr><tr><td>Buprénorphine Sigma-Aldrich</td><td>, USA</td><td>PHR8955-50MG</td><td>Pour la gestion de la douleur des souris</td></tr><tr><td>C57BL/6 souris</td><td>Chengdu Dashuo entreprise d’animaux expérimentaux, Chine</td><td>aucun</td><td>Pour l’établissement du modèle de brûlure</td></tr><tr><td>Crème dépilatoire</td><td>Veet, Chine</td><td>&mdash ;</td><td>Pour l’épilation du dos des souris</td></tr><tr><td>Appareil de chauffage numérique</td><td>Shenzhen Kapper Technology Company, Chine</td><td>No.936D</td><td>Pour l’induction de brûlure des souris</td></tr><tr><td>Rasoir électrique</td><td>AUX, Chine</td><td>AUX-A5</td><td>Pour l’épilation du dos des souris</td></tr><tr><td>Papier filtre</td><td>&mdash ;</td><td>&mdash ;</td><td>Utilisé pour déplier les échantillons de peau</td></tr><tr><td>Logiciel GraphPad</td><td>&mdash ;</td><td>Prisme GraphPad 9.5.0</td><td>Pour l’analyse de la zone de brûlure</td></tr><tr><td>Gants résistants à la chaleur</td><td>&mdash ;</td><td>&mdash ;</td><td>Utilisé pour tenir l’embout de l’appareil de chauffage numérique</td></tr><tr><td>Kit de coloration à l’hématoxyline et à l’éosine</td><td>Solarbio, Chine</td><td>G1120</td><td>Pour l’analyse histologique des lames</td></tr><tr><td>ImageJ software</td><td>&mdash ;</td><td>ImageJ 1.54f</td><td>Pour l’analyse de la zone de brûlure</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD, Chine</td><td>R510-22-10</td><td>Pour l’anesthésie des souris</td></tr><tr><td>Masson’s Trichrome Stain Kit</td><td>Solarbio, Chine</td><td>G1340</td><td>Pour l’analyse histologique des lames</td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Olympus, Japon&nbsp ;</td><td>VS200 ASW</td><td>Utilisé pour scanner le H& Lames colorées E et Masson Cassette tissulaire</td></tr><tr><td></td><td>CITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD, Chine</td><td>31050102W</td><td>Pour la déshydratation et l’enrobage de paraffine tissulaire</td></tr></tbody></table>

modèle de cicatrisation des brûlures en forme d’échiquier de souris basé sur un dispositif de chauffage numérique

Chessboard-like Burn Wound Healing Model of Mice Based on Digital Heating Device

Dans ce protocole, des brûlures semblables à celles d’un échiquier ont été créées avec une durée de combustion de 10 s à 97 °C par le dispositif de chauffage numérique (Figure 1). L’embout de l’appareil est en cuivre pur, connu pour son excellente conduction thermique et ses capacités de chauffage rapide. La poignée tenue par l’expérimentateur est en polycarbonate, qui offre une résistance à la chaleur et une ininflammabilité. Par rapport aux méthodes préchauffées à une seule plaque ou barre métallique ou à l’eau bouillante ou chaude, ce dispositif démontre des performances de sécurité supérieures et réduit le temps d’anesthésie chez la souris, raccourcissant ainsi la durée globale de l’expérience.
Le processus général d’induction et d’analyse des brûlures est illustré à la figure 2. Chaque animal présentait six brûlures sur le dos, disposées comme le montre la figure 2E. La taille de la plaie chez ces animaux a été évaluée et des échantillons de peau ont été prélevés pour l’analyse histologique, y compris la coloration H&amp;E et Masson trichrome aux jours 1, 3, 7, 10 et 14 après la brûlure, respectivement.
Chaque brûlure était de forme circulaire avec une surface égale ainsi qu’une profondeur uniforme après l’induction de la brûlure. La couleur du bord de la brûlure est passée du blanc cireux au rouge, accompagnée d’une zone hyperémique due à la réponse inflammatoire immédiate à la blessure. De plus, la taille de la brûlure a légèrement augmenté au cours des 72 heures qui ont suivi la brûlure (figure 4A).
L’analyse microscopique des coupes des plaies colorées en trichrome H&amp;E et Masson (figure 4B) a révélé une destruction complète de la couche épidermique et des dommages à toute l’épaisseur du derme, affectant à la fois la graisse sous-cutanée et le muscle. L’examen histologique a indiqué que le processus de cicatrisation de la plaie était au stade inflammatoire au jour 3, caractérisé par une vasodilatation et une infiltration importante de cellules inflammatoires. Une réduction notable de la surface de la plaie a été observée le jour 7 post-brûlure par rapport au jour 3, comme le montrent les images microscopiques des échantillons. Du tissu de granulation et cardiovasculaire se sont formés, et les fibres de collagène se déposent densément au 14e jour, ce qui signifie que la cicatrisation des plaies entre dans la phase de remodelage. Les plaies se sont rétablies sans infection évidente tout au long du processus de guérison.
De plus, les capacités de cicatrisation des plaies ont été évaluées en quantifiant les données de cicatrisation des plaies et en analysant les tracés des plaies (Figure 5). On a observé que la récupération de la plaie était améliorée dans les plaies traitées avec l’hydrogel peptidiqueTKH 12,14, comme en témoignent des zones de plaie significativement plus petites aux jours 7, 10 et 14.
L’intervalle entre les plaies adjacentes (figure 6), transversal ou longitudinale, n’a confirmé aucune différence par rapport à la peau non brûlée. L’épiderme, le derme et les tissus sous-cutanés étaient intacts, et il n’y avait pas d’infiltration de lymphocytes ni de vasodilatation. Le processus de cicatrisation des deux plaies n’interfère pas l’une avec l’autre. Par conséquent, différents médicaments ou pansements peuvent être appliqués au traitement des plaies sur la base du modèle pour évaluer l’effet in vivo.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig01.jpg"> 
Figure 1 : Appareil de chauffage numérique pour l’induction de la brûlure. L’appareil de chauffage numérique utilisé pour induire des brûlures. (a) Le régulateur de température permet des réglages de température allant de 50 à 450 °C. (b) La base du support est utilisée pour maintenir la pointe de combustion. (c) L’embout de l’appareil peut être commuté à différentes tailles. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig02.jpg"> 
Figure 2 : Schéma du modèle à enroulement en forme d’échiquier. Un schéma étape par étape pour reproduire le modèle de bobinage en forme d’échiquier décrit dans l’article. (A) Une souris de 8 semaines est utilisée comme modèle pour les expériences de cicatrisation des plaies. (B) Les poils sont retirés de la zone de blessure désignée. (C) Les six sites de plaie sont marqués à l’aide d’une pointe de pipette de 1 ml. (D) Un dispositif de chauffage numérique est utilisé pour créer six brûlures au centre de chaque site marqué (E). (F) Une image en gros plan du dos après l’induction de la brûlure. (G) Des échantillons de peau (environ 1 cm × 1 cm) sont prélevés les jours 3, 7, 10 et 14. (H) Les échantillons de peau sont aplatis à l’aide de papier filt et transférés dans des cassettes d’enrobage. (I) La déshydratation de la paraffine est effectuée, et (J) les échantillons sont sectionnés à une épaisseur de 5 μm. (K) Les sections sont colorées à l’aide d’hématoxyline et d’éosine (H&amp;E), ainsi que du trichrome de Masson. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig03.jpg"> 
Figure 3 : Procédé d’induction des brûlures sur toute l’épaisseur. (A) Le diamètre d’une pointe de pipette de 1 mL et (B) la pointe de l’appareil de chauffage numérique sont respectivement de 9 mm et 4 mm. (C) La zone dorsale de la souris est rasée avec un rasoir électrique. (D) La crème dépilatoire est appliquée pendant 3 min. (E) La zone rasée est nettoyée et séchée, et les points de blessure sont marqués à l’aide d’une pointe de pipette stérilisée de 1 ml. (F) Le dispositif de chauffage numérique est appliqué à 97 °C pendant 10 s pour créer six brûlures. (G) De la glace est appliquée sur les brûlures pour gérer la douleur. (H) Tout le dos de la souris montre les six brûlures de pleine épaisseur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig04.jpg"> 
Figure 4 : Images représentatives de brûlures et analyse histologique. (A) Images de brûlures aux jours 3, 7, 10 et 14, montrant la progression de la cicatrisation. (B) Les images histologiques colorées au H&amp;E et au trichrome de Masson démontrent la cicatrisation des plaies et la régénération de la peau. Barres d’échelle = 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig05.jpg"> 
Figure 5 : Variation de la taille de la plaie au fil du temps. (A) La variation de la taille de la plaie chez les animaux témoins et traités à l’hydrogel TKH au fil du temps, analysée à l’aide du logiciel ImageJ. (B) Les données correspondantes sur le tracé de la plaie sont présentées. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig06.jpg"> 
Figure 6 : Brûlures adjacentes et analyse histologique. (A) Images représentatives des brûlures adjacentes au jour 1. (B) Échantillons de plaies adjacentes prélevés pour l’analyse histologique le jour 3 (entourés en rouge). (C) Le papier filtre est utilisé pour aplatir les échantillons de tissus avant la déshydratation de la paraffine. (D) H&amp;E et l’analyse trichrome des plaies adjacentes par H&amp;E et Masson. Barres d’échelle : 1 mm et 200 μm (agrandies). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig06large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Modèle de cicatrisation des brûlures en forme d’échiquier de souris basé sur un dispositif de chauffage numérique

Severe burn injuries are among the most traumatic and physically debilitating conditions, impacting nearly every organ system and resulting in ...

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Biology

Biologie

Source : Wang, Y., et al. In Vivo Étude de la thérapie antimicrobienne par lumière bleue pour les infections multi-résistantes aux brûlures d’Acinetobacter baumannii à l’aide d’imagerie par bioluminescence. J. Vis. Exp. (2017)Cette vidéo montre comment établir une infection par brûlure dans un modèle murin en appliquant un bloc en laiton chauffé suivi d’un inoculum bactérien pathogène. Les bactéries colonisent la matrice extracellulaire exposée et forment un biofilm, permettant des études in...

Établir un modèle murin des infections aux brûlures avec des bactéries pathogènes

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Le rat, en raison de sa taille, la disponibilité et le comportement plutôt docile, a été utilisé comme un modèle de recherche depuis de nombreuses années. L'objectif de ce protocole est d'utiliser le rat comme un modèle de cicatrisation de la peau de la plaie ischémique de fournir de précieux renseignements sur la physiopathologie des plaies chroniques.

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Cet article présente des méthodes de fabrication et de caractérisation d’un système électronique conforme, semblable à la peau, et des protocoles pour une utilisation dans des applications cliniques, en particulier sur la gestion des plaies cutanées.

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Le but de cette étude était de développer un modèle murin de la cicatrisation des brûlures. Une brûlure thermique a été induite sur la peau dorsale des souris à l’aide d’un modèle de laiton préchauffé. Le tissu brûlé a été débrided et recouvert d’une greffe de peau récoltée à partir de la queue d’une souris de donneur génétiquement similaire.

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Un modèle imitant le scénario clinique des brûlures et des infections est nécessaire pour faire avancer la recherche sur les brûlures. Le présent protocole démontre un modèle simple et reproductible d’infection par brûlure chez le rat, comparable à celui de l’homme. Cela facilite l’étude des brûlures et des infections après brûlure pour le développement de nouveaux traitements antibiotiques topiques.

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Les plaies chroniques résistantes aux antibiotiques constituent une menace majeure pour le système de santé. Les infections par biofilm sont tenaces et hostiles et peuvent entraîner une fermeture fonctionnelle déficiente de la plaie. Nous rapportons un modèle porcin cliniquement pertinent de plaies chroniques de pleine épaisseur infectées par un biofilm. Ce modèle est puissant pour les études mécanistiques ainsi que pour tester des interventions.

Modèle porcin d’infection par biofilm et de plaies invisibles

Ce protocole décrit un modèle reproductible de brûlure multi-profondeur chez un miniporc du Yucatan.

Un modèle de brûlure porcine pour étudier le processus de cicatrisation dans plusieurs brûlures profondes

Les plaies représentent un défi de santé mondial. Cette étude a mis au point un photomaton standardisé utilisant la planimétrie numérique pour minimiser la variabilité des mesures des plaies. Le suivi des plaies chez la souris pendant 14 jours a révélé une augmentation initiale de la surface et du périmètre de la plaie, suivie d’une fermeture progressive. Cette méthodologie peut aider à évaluer la cinétique de fermeture des plaies dans des modèles précliniques.

Planimétrie numérique pour l’évaluation de la cinétique de fermeture des plaies dans un modèle murin

Découvrez un protocole de modèle de cicatrisation des brûlures chez la souris utilisant un dispositif de chauffage numérique. Cette méthode reproduit des brûlures épidermiques et dermiques complètes pour évaluer l'efficacité des traitements.

Modèle de cicatrisation des brûlures en forme d’échiquier de souris basé sur un dispositif de chauffage numérique

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