Name: Inactivation efficace d’un gène dans le foie par injection intrasplénique d’un petit ARN en épingle à cheveux délivré par le virus adéno-associé de sérotype 8 (AAV8) (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-01T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 29 s
Description: Découvrez l'inactivation génique in vivo par injection intrasplénique d'ARN en épingle à cheveux délivré par AAV8 dans le foie. Cette méthode simple réduit les complications chirurgicales tout en maintenant une efficacité équivalente à l'injection portale.

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<meta charset="utf8"></head><body>Injection intrasplénique d’AAV8-shRNA pour une neutralisation efficace et sûre des gènes hépatiques

<ol><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenome-wide+analysis+of+aging+effects+on+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Epigenome-wide analysis of aging effects on liver regeneration.</a> BMC Biol. 21 (1), 30(2023).</li>
<li>Jindal, A., Jagdish, R. K., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+regeneration+in+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Exp+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatic regeneration in cirrhosis.</a> J Clin Exp Hepatol. 12 (2), 603-616 (2022).</li>
<li>Meng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+deletion+reveals+an+essential+mechanism+that+maintains+the+genomic+stability+of+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin deletion reveals an essential mechanism that maintains the genomic stability of stem and progenitor cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (28), 11415-11420 (2013).</li>
<li>Sands, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aav-mediated+liver-directed+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Aav-mediated liver-directed gene therapy.</a> Methods Mol Biol. 807, 141-157 (2011).</li>
<li>Tenney, R. M., Bell, C. L., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV8+capsid+variable+regions+at+the+two-fold+symmetry+axis+contribute+to+high+liver+transduction+by+mediating+nuclear+entry+and+capsid+uncoating%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">AAV8 capsid variable regions at the two-fold symmetry axis contribute to high liver transduction by mediating nuclear entry and capsid uncoating.</a> Virology. 454-455, 227-236 (2014).</li>
<li>Tsai, R. Y., Mckay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nucleolar+mechanism+controlling+cell+proliferation+in+stem+cells+and+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A nucleolar mechanism controlling cell proliferation in stem cells and cancer cells.</a> Genes Dev. 16 (23), 2991-3003 (2002).</li>
<li>Tsai, R. Y., Meng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin%3A+A+latecomer+with+new+tricks%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin: A latecomer with new tricks.</a> Int J Biochem Cell Biol. 41 (11), 2122-2124 (2009).</li>
<li>Zhu, Q., Yasumoto, H., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+delays+cellular+senescence+and+negatively+regulates+trf1+protein+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin delays cellular senescence and negatively regulates trf1 protein stability.</a> Mol Cell Biol. 26 (24), 9279-9290 (2006).</li>
<li>Qu, J., Bishop, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+maintains+self-renewal+of+embryonic+stem+cells+and+promotes+reprogramming+of+somatic+cells+to+pluripotency%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin maintains self-renewal of embryonic stem cells and promotes reprogramming of somatic cells to pluripotency.</a> J Cell Biol. 197 (6), 731-745 (2012).</li>
<li>Lin, T., Meng, L., Li, Y., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-initiating+function+of+nucleostemin-enriched+mammary+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor-initiating function of nucleostemin-enriched mammary tumor cells.</a> Cancer Res. 70 (22), 9444-9452 (2010).</li>
<li>Maki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+accumulation+of+nucleostemin+in+nucleolus+during+newt+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Rapid accumulation of nucleostemin in nucleolus during newt regeneration.</a> Dev Dyn. 236 (4), 941-950 (2007).</li>
<li>Siddiqi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+induction+of+nucleostemin+in+response+to+postnatal+growth+and+pathological+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Myocardial induction of nucleostemin in response to postnatal growth and pathological challenge.</a> Circ Res. 103 (1), 89-97 (2008).</li>
<li>Lin, T., Ibrahim, W., Peng, C. -Y., Finegold, M. J., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+role+of+nucleostemin+in+maintaining+the+genome+integrity+of+dividing+hepatocytes+during+mouse+liver+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">A novel role of nucleostemin in maintaining the genome integrity of dividing hepatocytes during mouse liver development and regeneration.</a> Hepatology. 58 (6), 2176-2187 (2013).</li>
<li>Shugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+in+injury-induced+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin in injury-induced liver regeneration.</a> Stem Cells Dev. 21 (16), 3044-3054 (2012).</li>
<li>Lin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+reveals+a+dichotomous+nature+of+genome+maintenance+in+mammary+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin reveals a dichotomous nature of genome maintenance in mammary tumor progression.</a> Oncogene. 38 (20), 3919-3931 (2019).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+modulates+outcomes+of+hepatocellular+carcinoma+via+a+tumor+adaptive+mechanism+to+genomic+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin modulates outcomes of hepatocellular carcinoma via a tumor adaptive mechanism to genomic stress.</a> Mol Cancer Res. 18 (5), 723-734 (2020).</li>
<li>Crawford, M., Liu, X., Cheng, Y. L., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+upregulation+and+stat3+activation+as+early+events+in+oral+epithelial+dysplasia+progression+to+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin upregulation and stat3 activation as early events in oral epithelial dysplasia progression to squamous cell carcinoma.</a> Neoplasia. 23 (12), 1289-1299 (2021).</li>
<li>Lin, T., Meng, L., Wu, L. J., Pederson, T., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+and+gnl3l+exercise+distinct+functions+in+genome+protection+and+ribosome+synthesis%2C+respectively%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin and gnl3l exercise distinct functions in genome protection and ribosome synthesis, respectively.</a> J Cell Sci. 127 (10), 2302-2312 (2014).</li>
<li>Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balancing+self-renewal+against+genome+preservation+in+stem+cells%3A+How+do+they+manage+to+have+the+cake+and+eat+it+too%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Balancing self-renewal against genome preservation in stem cells: How do they manage to have the cake and eat it too.</a> Cell Mol Life Sci. 73 (9), 1803-1823 (2016).</li>
<li>Meng, L., Hsu, J. K., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gnl3l+depletion+destabilizes+mdm2+and+induces+p53-dependent+G2%2Fm+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Gnl3l depletion destabilizes mdm2 and induces p53-dependent G2/m arrest.</a> Oncogene. 30 (14), 1716-1726 (2011).</li>
<li>Huang, G., Meng, L., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P53+configures+the+G2%2Fm+arrest+response+of+nucleostemin-deficient+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">P53 configures the G2/m arrest response of nucleostemin-deficient cells.</a> Cell Death Discov. 1, e15060(2015).</li>
<li>Liu, X., Wang, J., Wu, L. J., Trinh, B., Tsai, R. Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IMPDH+inhibition+decreases+TERT+expression+and+synergizes+the+cytotoxic+effect+of+chemotherapeutic+agents+in+glioblastoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">IMPDH inhibition decreases TERT expression and synergizes the cytotoxic effect of chemotherapeutic agents in glioblastoma cells.</a> Int J Mol Sci. 25 (11), 5992(2024).</li>
<li>Liu, X., Wang, J., Li, F., Timchenko, N., Tsai, R. Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+control+of+a+stem+cell+factor+nucleostemin+in+liver+regeneration+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Transcriptional control of a stem cell factor nucleostemin in liver regeneration and aging.</a> PLoS One. 19 (9), e0310219(2024).</li>
<li>Mayra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+AAV9-shRNA+inhibits+target+expression+in+neonatal+skeletal+and+cardiac+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal AAV9-shRNA inhibits target expression in neonatal skeletal and cardiac muscles.</a> Biochem Biophys Res Commun. 405 (2), 204-209 (2011).</li>
<li>Cohen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus-mediated+shRNA+knockdown+of+prodynorphin+in+the+rat+nucleus+accumbens+attenuates+depression-like+behavior+and+cocaine+locomotor+sensitization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Virus-mediated shRNA knockdown of prodynorphin in the rat nucleus accumbens attenuates depression-like behavior and cocaine locomotor sensitization.</a> PLoS One. 9 (5), e97216(2014).</li>
<li>Jeon, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topbp1+deficiency+causes+early+embryonic+lethality+and+induces+cellular+senescence+in+primary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Topbp1 deficiency causes early embryonic lethality and induces cellular senescence in primary cells.</a> J Biol Chem. 286 (7), 5414-5422 (2011).</li>
<li>Smith, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+expression+of+therapeutic+plasma+levels+of+human+factor+IX+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated expression of therapeutic plasma levels of human factor IX in mice.</a> Nat Genet. 5 (4), 397-402 (1993).</li>
<li>Nakai, H., Iwaki, Y., Kay, M. A., Couto, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+recombinant+adeno-associated+virus+vector-cellular+DNA+junctions+from+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Isolation of recombinant adeno-associated virus vector-cellular DNA junctions from mouse liver.</a> J Virol. 73 (7), 5438-5447 (1999).</li>
<li>Jung, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+viral+vector-mediated+gene+transfer+results+in+long-term+enzymatic+and+functional+correction+in+multiple+organs+of+Fabry+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated viral vector-mediated gene transfer results in long-term enzymatic and functional correction in multiple organs of Fabry mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (5), 2676-2681 (2001).</li>
<li>Hurford, R. K., Dranoff, G., Mulligan, R. C., Tepper, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+of+metastatic+cancer+by+in+vivo+retroviral+gene+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Gene therapy of metastatic cancer by in vivo retroviral gene targeting.</a> Nat Genet. 10 (4), 430-435 (1995).</li>
<li>Sarkar, R., Xiao, W., Kazazian, H. H. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+adeno-associated+virus+%28AAV%29-murine+factor+viii+vector+partially+corrects+the+hemophilia+a+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">A single adeno-associated virus (AAV)-murine factor viii vector partially corrects the hemophilia a phenotype.</a> J Thromb Haemost. 1 (2), 220-226 (2003).</li>
<li>Czekaj, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+methods+for+intrasplenic+administration+of+human+amniotic+epithelial+cells+in+order+to+perform+safe+and+effective+cell-based+therapy+for+liver+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev+Rep%22%5BJournal%5D)">Optimization of methods for intrasplenic administration of human amniotic epithelial cells in order to perform safe and effective cell-based therapy for liver diseases.</a> Stem Cell Rev Rep. 20 (6), 1599-1617 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Unités de centrifugation par filtre Amicon</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC9100</td><td>Ultrafiltration rapide</td></tr><tr><td>AV5-siRNA-GFP&nbsp ;</td><td>Addgene&nbsp ;</td><td>#124972</td><td>Plasmide</td></tr><tr><td>Compétent DH5&alpha ; bactéries&nbsp ;</td><td>Invitrogen</td><td>#18265-017</td><td>Souche chimiquement compétente pour le clonage&nbsp ;</td></tr><tr><td>HpaI&nbsp ;</td><td>New England Biolabs</td><td>R0105</td><td>Enzyme de restriction</td></tr><tr><td>iMFectine réactif de transfection&nbsp ;</td><td>GenDepot</td><td>I7100-101</td><td></td></tr><tr><td>M-MLV transcriptase inverse&nbsp ;</td><td>Promega</td><td>M1708</td><td>ADN polymérase dépendante de l’ARN²</td></tr><tr><td>Système de détection PCR monochrome en temps réel MyiQ&nbsp ;</td><td>Bio-Rad</td><td>BUN9740RAD</td><td>qRT-PCR</td></tr><tr><td>Kit sans endotoxines oméga</td><td>Bioteck</td><td>D6915-03</td><td>Préparation midi de l’ADN plasmidique&nbsp ;</td></tr><tr><td>Hexamères aléatoires&nbsp ;</td><td>Invitrogen</td><td>48190-011</td><td></td></tr><tr><td>Supermix SYBR réactif vert&nbsp ;</td><td>Bio-Rad</td><td>1708882</td><td>Applications de PCR en temps réel</td></tr><tr><td>T4 ADN Ligase</td><td>Promega</td><td>M1801</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagent&nbsp ;</td><td>Life Technologies</td><td>15596-018</td><td>Isolement d’ARN total de haute qualité</td></tr><tr><td>XhoI</td><td>New England Biolabs</td><td>R0146</td><td>Enzyme de restriction</td></tr></tbody></table>

inactivation efficace d’un gène dans le foie par injection intrasplénique d’un petit arn en épingle à cheveux délivré par le virus adéno-associé de sérotype 8 (aav8)

Efficient Gene Knockdown in the Liver via Intrasplenic Injection of Adeno-Associated Virus Serotype 8 (AAV8)-Delivered Small Hairpin RNA

Efficacité du gène KD dans le foie par intrasplénique vs. injection dans la veine porte d’AAV8-shRNA Les stocks viraux d’AAV8 ont été dilués à une concentration de travail de 2E+12 copies du génome (gc) par millilitre (gc/mL). Des souris individuelles ont reçu une injection de 1E+11 gc d’AAV8-shNS1 ou d’AAV8-shScr (50 μL) par injection intrasplénique ou dans la veine porte. Deux semaines après l’injection, des tissus hépatiques ont été prélevés pour l’isolement de l’ARN, la synthèse de l’ADNc 1brin et l’analyse qPCR. Les résultats ont montré que la méthode d’injection intrasplénique a atteint statistiquement la même efficacité NSKD (20,8 % ± 4,4 %) que la méthode d’injection de la veine porte (16,3 % ± 3,6 %) en utilisant Rsp3 et Rplp0 comme référence interne (Figure 2). Plus particulièrement, la procédure d’injection intrasplénique pouvait être terminée en 15 minutes sans presque aucun décès causé par la procédure, alors que la méthode d’injection dans la veine porte nécessitait normalement 25 à 30 minutes avec beaucoup de pratique et était associée à un taux de mortalité plus élevé (~25 % à 30 % de taux de mortalité).
Réponse inflammatoire tissulaire Des tissus hépatiques ont été prélevés chez des souris recevant une injection dans la veine porte ou une injection intrasplénique d’AAV8-shScr (figure 3A) ou d’AAV8-shNS1 (figure 3B) et comparés à ceux de souris témoins (figure 3C). Les réactions inflammatoires ont été examinées par coloration H&amp;E4. Les résultats ont montré que ni AAV8-shScr ni AAV8-shNS1 n’ont provoqué de réactions inflammatoires notables dans le parenchyme hépatique par rapport au PBS injecté par la méthode d’injection intrasplénique (Spl) ou d’injection dans la veine porte (PV) (Figure 3A-C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig01.jpg"> 
Figure 1 : Illustrations de la conception de l’AAV8-shRNA et de la procédure d’injection intrasplénique. (A) (En haut) Schéma du plasmide AV5-siRNA-GFP conçu pour fabriquer le virus adéno-associé de sérotype 8 (AAV8) pour les expériences de knockdown in vivo. AV5-siRNA-GFP contient une séquence de shRNA pilotée par le promoteur CMV et EGFP. (En bas) Petites constructions d’ARNi en épingle à cheveux conçues pour cibler des séquences de 21 nucléotides sur un NS de souris (shNS1) ou une séquence de 21 nucléotides brouillée (Scr). (B) Un schéma du flux de travail dans la procédure d’injection intrasplénique d’AAV8. (C) Vues par étapes de l’intervention chirurgicale. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig02.jpg"> 
Figure 2 : Efficacité de l’inactivation de la nucléostémine (NS) médiée par AAV8-shRNA dans le foie par injection intrasplénique par rapport à l’injection dans la veine porte. Tests qRT-PCR de l’expression de NS dans des échantillons de foie prélevés sur des souris à 2 semaines après l’injection intrasplénique (Spl) ou veineuse porte (PV) d’AAV8-shScr ou d’AAV8-shNS1 (1E+11 gc). Les graphiques montrent les résultats en référence à deux contrôles internes, Rps3 (A) et Rplp0 (B). Les barres montrent la MEB moyenne ± quatre répétitions biologiques, chacune avec trois répétitions techniques de PCR ; *p &lt; 0,01 ; **p &lt; 0,001 ; p &lt; 0,0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig03.jpg"> 
Figure 3 : Histologie des tissus hépatiques après injection intrasplénique ou injection dans la veine porte de PBS, AAV8-shScr ou AAV8-shNS1. Coloration H&amp;E des tissus hépatiques à 2 semaines après l’injection intrasplénique (Spl) ou l’injection dans la veine porte (PV) d’AAV8-shScr (A) ou d’AAV8-shNS1 (B), par rapport à celle des échantillons témoins non injectés d’AAV8 (C). Barres d’échelle : 100 μm. Les panneaux de droite montrent des vues agrandies des inserts dans les panneaux de gauche. Barres d’échelle : 50 μm. Six à neuf coupes de deux animaux différents ont été examinées dans chaque groupe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Inactivation efficace d’un gène dans le foie par injection intrasplénique d’un petit ARN en épingle à cheveux délivré par le virus adéno-associé de sérotype 8 (AAV8)

The liver is a major organ that performs essential metabolic functions. Developing an efficient and safe method to knock down gene expression in the liver ...

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Dans cet article, nous décrivons l'identification du virus adéno-associé de sérotype 3 (AAV3) comme le vecteur le plus efficace pour cibler les cellules humaines de cancer du foie.

Haute-efficacité de la transduction des cellules cancéreuses du foie par recombinants sérotype virus adéno-associé 3 Vecteurs

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Vecteurs d&#39;ingénierie et de l&#39;évolution de la synthèse Adeno-Associated Virus (AAV) thérapie génique par la famille de réarrangement d&#39;ADN

L'interférence ARN (ARNi) possède de nombreux avantages sur inactivation du gène et a été largement utilisé comme un outil dans les études fonctionnelles de gènes. L'invention de l'ADN à base de vecteurs ARNi la technologie a fait à long terme et inactivation génique inductible possible, et a également augmenté la faisabilité de l'inactivation du...

ADN vecteur basé sur l&#39;interférence ARN pour étudier la fonction des gènes dans le cancer

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Dans cette vidéo, nous démontrons l’administration de gènes basés sur le virus associé à l’adéno-adéno-recombinant chez le petit de souris. Cette méthode aide à étudier l’expression des gènes dans les cellules ciblées.

Administration de gènes basée sur un virus adénologique recombinant : une technique de livraison de transgènes et d’expression spécifique au cancer dans un modèle de rongeur

Dans ce manuscrit, une méthode de préparation de vecteurs recombinants du virus adéno-associé 9 (rAAV9) pour manipuler l’expression génique dans le cœur de souris est décrite.

Préparation de rAAV9 à surexpriment ou Knockdown gènes dans les coeurs de souris

Nous décrivons ici la livraison des micro-ARN, à l’aide d’un sérotype de virus adeno-associé recombinant 9 dans un modèle murin d’une maladie neuromusculaire. Une seule administration périphérique chez les souris a entraîné surexpression de miRNA soutenue dans les muscles et les neurones moteurs, fournissant l’occasion de l’étude miRNA fonction et thérapeutiques potentiels in vivo.

Délivrance systémique des micro-ARN, à l’aide de Recombinant Adeno-associated Virus sérotype 9 pour traiter des maladies neuromusculaires chez les rongeurs

L’injection veineuse portale d’organoïdes du cancer colorectal (CCR) génère des métastases hépatiques riches en stroma. Ce modèle murin de métastases hépatiques du CCR représente un outil utile pour étudier les interactions tumeur-stroma et développer de nouvelles thérapies dirigées par le stroma telles que les thérapies géniques médiées par le virus adéno-associé.

Injection veineuse portale d’organoïdes du cancer colorectal pour étudier la métastase hépatique Stroma

Nous détaillons ici un protocole optimisé pour l’injection latérale de la veine caudale chez la souris afin d’administrer systématiquement le virus adéno-associé (AAV) chez les souris adultes. De plus, nous décrivons les protocoles des tests couramment utilisés pour évaluer la transduction des AAV.

Administration constante du virus adéno-associé par injection latérale dans la veine caudale chez des souris adultes

Ce rapport détaille la méthode d’injection localisée des vecteurs AAV via le bassinet du rein pour un transfert de gènes efficace et sûr dans le rein de souris.

Administration efficace et sûre de gènes dans le rein de souris par injection rétrograde lente de vecteurs viraux adéno-associés

Découvrez l'inactivation génique in vivo par injection intrasplénique d'ARN en épingle à cheveux délivré par AAV8 dans le foie. Cette méthode simple réduit les complications chirurgicales tout en maintenant une efficacité équivalente à l'injection portale.

Inactivation efficace d’un gène dans le foie par injection intrasplénique d’un petit ARN en épingle à cheveux délivré par le virus adéno-associé de sérotype 8 (AAV8) (Vidéo) | JoVE Journal

Inactivation efficace d’un gène dans le foie par injection intrasplénique d’un petit ARN en épingle à cheveux délivré par le virus adéno-associé de sérotype 8 (AAV8)

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