Name: Criblage de composés de médecine traditionnelle chinoise pour inhiber l’activité d’UCHL3 sur la base de la technologie des sondes enzymatiques d’amarrage moléculaire et de désubiquitination (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-22T14:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 25 s
Description: Découvrez le criblage d'inhibiteurs de UCHL3 à partir de la médecine traditionnelle chinoise par amarrage moléculaire et sondes enzymatiques. Cette méthode bioinformatique identifie le Danshensu comme agent thérapeutique potentiel.

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<meta charset="utf8"></head><body>Criblage virtuel et validation d’inhibiteurs d’UCHL3 à l’aide de l’amarrage moléculaire

<table><tbody><tr><td>30 % d’acrylamide</td><td>Beijing Lablead Biotech Co., Ltd</td><td>A3291</td><td></td></tr><tr><td>Persulfate d’ammonium</td><td>China National Medicines Corporation Ltd</td><td>10002616</td><td></td></tr><tr><td>IgG anti-lapin, anticorps liés à la HRP&nbsp ;#7074</td><td>Technologie de signalisation cellulaire</td><td>7074P2</td><td></td></tr><tr><td>BeyoECL Plus</td><td>Beyotime</td><td>P0018S</td><td></td></tr><tr><td>Kit de dosage</td> <td>des protéines BradfordBeyotime</td><td>P0006</td><td></td></tr><tr><td>ClonExpress Ultra One Step Cloning Kit</td><td>Vazyme</td><td>C115-01</td><td></td></tr><tr><td>Danshensu</td><td>Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd</td><td>B20254</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Ameresco, Inc.</td><td>21K2356571</td><td></td></tr><tr><td>Système d’électrophorèse</td><td>Liuyi Biotechnology</td><td>112-0630</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Kit de purification de protéines his-étiqueté (billes magnétiques d’agarose NTA-Ni)</td><td>Beyotime</td><td>P2247S</td><td></td></tr><tr><td>Membrane PVDF Immun-Blot, Rouleau, 26 cm x 3,3 m</td><td>Bio-Rad Laboratories (Shanghai) Co., Ltd</td><td>1620177</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyle alcool</td><td>Macklin</td><td>I811925</td><td></td></tr><tr><td>M5 Échelle de protéines précolorées</td><td>Mei5 Biotechnologie Co.Ltd</td><td>MF-212-01</td><td></td></tr><tr><td>Maestro</td><td>Schr&ouml ; dinger' s</td><td>https://www.schrodinger.com/platform/products/maestro/</td><td></td></tr> <tr><td>Alcool méthylique</td><td>China National Medicines Corporation Ltd</td><td>10014108</td><td></td></tr><tr><td>MF-Millipore</td><td>Millipore</td><td>HAWP04700</td><td></td></tr><tr><td>MyFug&nbsp ; mini centrifugeuse</td><td>Sigma</td><td>Z764183</td><td></td></tr><tr><td>Pierce Sans dilution Rapid Gold BCA Protein Assay</td><td>Thermo Scientific</td><td>A55860</td><td></td></tr><tr><td>PR-619</td><td>Technologie de signalisation cellulaire</td><td>26065S</td><td></td>Tampon de</tr><tr><td>dilution d’anticorps primaire pour Western Blot</td><td>Macklin</td><td>P917820</td><td></td></tr><tr><td>Protéine de vinyle-sulfone HA-Ubiquitine humaine recombinante, CF</td><td>R& D Systems</td><td>U-212-025</td><td></td></tr><tr><td>Protéine AMC d’ubiquitine humaine recombinante, CF</td><td>R& D Systems</td><td>U-550-050</td><td></td></tr><tr><td>Lait écrémé</td><td>Becton,Dickinson and Company</td><td>232100</td><td></td></tr><tr><td>Dodécylsulfate de sodium (SDS)</td><td>Ameresco, Inc.</td><td>205-788-1</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Ameresco, Inc.</td><td>2545C134</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Beijing Lablead Biotech Co., Ltd</td><td>0777-1</td><td></td></tr><tr><td>UCHL3 (D25E6) Technologie de signalisation cellulaire d’anticorps monoclonaux de lapin</td><td></td><td>8141T</td><td></td></tr></tbody></table>

criblage de composés de médecine traditionnelle chinoise pour inhiber l’activité d’uchl3 sur la base de la technologie des sondes enzymatiques d’amarrage moléculaire et de désubiquitination

Screening Traditional Chinese Medicine Compounds for Inhibiting UCHL3 Activity Based on Molecular Docking and Deubiquitinating Enzyme Probe Technology

Pour éliminer les petites molécules de Salvia miltiorrhiza Bge qui peuvent inhiber efficacement UCHL3, nous avons effectué un amarrage moléculaire entre les petites molécules obtenues sur le site Web TCMSP avec UCHL3. Les 30 premières petites molécules dans les résultats d’amarrage et leurs scores sont présentés dans le tableau 1. Les résultats d’amarrage pour toutes les petites molécules sont présentés dans le tableau supplémentaire 1. Nous avons sélectionné Danshensu comme pet...

Criblage de composés de médecine traditionnelle chinoise pour inhiber l’activité d’UCHL3 sur la base de la technologie des sondes enzymatiques d’amarrage moléculaire et de désubiquitination

Deubiquitinating enzymes&#160;(DUBs) play a pivotal role in modulating ubiquitination homeostasis, with UCHL3 being an archetypal cysteine DUB intricately ...

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Ici, nous décrivons un test de gène rapporteur basé sur des cellules comme un outil précieux pour cribler les bibliothèques chimiques à la recherche de composés modulant les mécanismes de contrôle post-transcriptionnel exercés par 3' UTR.

Haut-débit criblage de modulateurs chimique des gènes post-transcriptionnelle réglementées

Le protocole actuel détaille un procédé pour mesurer l'activité des enzymes fonctionnellement homologue désubiquitination. Sondes spécialisées modifier de manière covalente l'enzyme et permettent de détecter. Cette méthode a le potentiel d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques.

Méthode de mesure de l&#39;activité des enzymes de dé-ubiquitination dans des lignées cellulaires et des échantillons de tissus

L'interaction entre les canaux HCN et leur sous-unité auxiliaire a été identifié comme une cible thérapeutique dans le trouble dépressif majeur. Ici, une méthode basée sur la polarisation de fluorescence pour identifier les petites molécules inhibitrices de cette interaction protéine-protéine, est présentée.

Procédé pour l&#39;identification d&#39;inhibiteurs de petites molécules de l&#39;interaction protéine-protéine entre HCN1 et TRIP8b

Cet article utilise un écoulement cytometry-test aux bibliothèques d’écran d’inhibiteurs chimiques pour l’identification des inhibiteurs et leurs objectifs qui influent sur la signalisation de récepteur de T-cellule. Les méthodes décrites ici peuvent aussi être étendues pour des projections de haut débit.

Identification des médiateurs du récepteur des cellules T signalisation via la projection des bibliothèques inhibiteur chimique

La présente étude fournit des protocoles détaillés de dosage d’ubiquitylation in vitro pour l’analyse de l’activité catalytique de l’ubiquitine ligase E3. Les protéines recombinantes ont été exprimées à l’aide de systèmes procaryotes tels que la culture d’Escherichia coli.

In vitro Analyse de la fonction E3 Ubiquitin Ligase

Ce protocole explique comment mesurer l’effet de la variation génétique associée aux troubles neurodéveloppementaux sur l’activité de l’enzyme de désubiquitylation en combinant la purification des protéines recombinantes avec des tests de clivage de la chaîne d’ubiquitine.

Mesure de l’activité enzymatique d’enzymes désubiquitylantes associées à des troubles neurodéveloppementaux au moyen d’un test de clivage de la chaîne d’ubiquitine in vitro

Ce protocole introduit une méthodologie de dépistage fluorométrique optimisée pour identifier les inhibiteurs naturels de produits et petites molécules de la synthèse protéique. Sa praticité le rend adapté à la fois à l’enseignement de premier cycle en techniques de découverte de médicaments et à la mise en œuvre dans des campagnes de chimie médicinale.

Un protocole basé sur la fluorescence pour le dépistage préliminaire des inhibiteurs de synthèse protéique provenant de sources naturelles

Ce protocole décrit l’utilisation de la chromatographie liquide ultra-haute performance couplée à la spectrométrie de masse haute résolution quadrupole-Orbitrap (UHPLC-Q-Orbitrap HRMS), combinée à la pharmacologie en réseau et au docking moléculaire, afin de prédire et valider la base matérielle de la formule Yiqi Qingjie (YQQJ) pour le traitement de la néphropathie à IgA (IgAN).

Élucidation des bases matérielles de la formule de Yiqi Qingjie contre la néphropathie à IgA utilisant UHPLC-Q-Orbitrap HRMS intégrée à la pharmacologie en réseau

Un lavement est un type de thérapie de médecine traditionnelle chinoise (MTC) utilisé pour traiter la pancréatite aiguë sévère (PAS). La thérapie consiste à instiller un liquide de MTC dans le rectum et le côlon par l’anus pour garder le liquide dans l’intestin, absorbant par la muqueuse intestinale. Cette étude vise à normaliser la procédure de lavement pour les patients atteints de SAS.

Lavement de la médecine traditionnelle chinoise pour les patients atteints de pancréatite aiguë sévère

Dans cette étude, une série de méthodes sont présentées pour préparer des échantillons DESI-MSI provenant d’usines, et une procédure d’installation d’assemblage DESI, d’acquisition de données MSI et de traitement est décrite en détail. Ce protocole peut être appliqué dans plusieurs conditions d’acquisition d’informations de métabolome spatial chez les plantes.

Visualisation des métabolites identifiés dans le métabolome spatial de la médecine traditionnelle chinoise à l’aide de DESI-MSI

Découvrez le criblage d'inhibiteurs de UCHL3 à partir de la médecine traditionnelle chinoise par amarrage moléculaire et sondes enzymatiques. Cette méthode bioinformatique identifie le Danshensu comme agent thérapeutique potentiel.

Criblage de composés de médecine traditionnelle chinoise pour inhiber l’activité d’UCHL3 sur la base de la technologie des sondes enzymatiques d’amarrage moléculaire et de désubiquitination (Vidéo) | JoVE Journal

Criblage de composés de médecine traditionnelle chinoise pour inhiber l’activité d’UCHL3 sur la base de la technologie des sondes enzymatiques d’amarrage moléculaire et de désubiquitination

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