Planimétrie numérique pour l’évaluation de la cinétique de fermeture des plaies dans un modèle murin

Notre recherche se concentre sur une mesure macroscopique standardisée des plaies à l’aide d’un dispositif d’imagerie contrôlé mis en place en assurant la cohérence et la position et la distance de la lumière ou des protocoles visant à minimiser la variabilité et à améliorer l’actualité de la mesure de proximité de la plaie dans les modèles précliniques. Nous remédions au manque de normalisation dans les mesures microscopiques des plaies. Les méthodologies actuelles manquent souvent de conditions de contrôle, ce qui conduit à des données incohérentes.

Notre protocole offre notre configuration applicable qui assure un éclairage, un positionnement et une distance uniformes, réduisant la probabilité et améliorant la reproductibilité. Notre protocole élimine les sources courantes de biais de mesure en normalisant les conditions d’imagerie. Contrairement aux méthodes manuelles, il assure la cohérence entre les expériences, ce qui permet des comparaisons précises et réduit la variabilité des mesures de surface et de périmètre des plaies.

Notre résultat permet d’obtenir des données de mesure des plaies plus précises et reproductibles en fournissant une méthodologie standardisée. C’est la base de l’évaluation des interventions thérapeutiques et de la recherche préclinique sur les plaies. Pour commencer, fixez un profilé en aluminium fendu sur la zone intérieure du bord latéral du toit.

Placez deux plaques d’aluminium rectangulaires avec des centres en polyéthylène dans les rainures des profilés de toit pour permettre le glissement à travers les deux profilés. Montez un tube LED RVB de 20 centimètres à un angle de 45 degrés sur le bord inférieur du premier panneau à l’aide de ruban adhésif double face. Ensuite, montez un panneau de mousse rectangulaire avec une découpe circulaire centrale de 7,82 centimètres sur chaque panneau de toit pour permettre l’installation de l’objectif de la caméra.

Pour la construction de sols, coupez d’abord des carrés de 2,54 centimètres de chaque coin du panneau de mousse blanche de 40 x 40 centimètres. Cette étape permet de s’assurer que le panneau de mousse s’adapte correctement aux profilés de la surface de sol. Après avoir coupé les coins, placez le panneau de mousse sur les profilés de la surface de sol.

Fixez des bandes de fixation auto-agrippantes aux profilés en aluminium A et B pour manipuler facilement les éléments internes du photomaton. Une attache adhésive fixe à un centimètre du bord de deux carrés de carton mousse d’un côté et les positionne sur les parois avant et arrière. À l’aide de silicone, collez deux panneaux sur les côtés C et D pour former les parois latérales gauche et droite.

Placez un masque imprimé en 3D à 11,5 centimètres du bord d’un rectangle prédécoupé de 40 x 28 centimètres en carton mousse blanc pour maintenir les souris sous anesthésie par inhalation. Ensuite, collez-le au centre de la base de référence. Fixez le bloc de règle imprimé en 3D à un centimètre du côté gauche de la base de la souris pour accueillir l’élément de référence de mesure pour le traitement d’image numérique.

Ensuite, fixez une règle graduée en acier inoxydable de 15 centimètres au bloc de règle et installez la base de référence complète à l’intérieur de la cabine pour la mise à l’échelle de l’image. Après avoir anesthésié la souris, utilisez un poinçon de biopsie stérile de cinq millimètres pour appliquer une pression avec des mouvements circulaires afin de créer une incision dermo-épidermique au niveau de l’omoplate. Retirez le rabat à l’aide d’une pince dentelée et coupez-le avec des ciseaux à pointe d’iris.

À l’aide d’une pince de bijoutier, placez un film dermique circulaire d’un centimètre de diamètre sur la plaie pour éviter la contamination et la contraction. Pour capturer des images des blessures, positionnez la base de référence au centre du sol du photomaton. Ensuite, positionnez la souris anesthésiée en position couchée sur la plate-forme de la souris.

Installez la paroi avant du photomaton et capturez des images macroscopiques. Pour ouvrir l’image de sauvegarde créée dans imagej, accédez à Fichier, Ouvrir et Rechercher. Cliquez ensuite sur Ouvrir.

Agrandissez maintenant l’image, sélectionnez l’outil Ligne droite, puis à l’aide de la touche plus, zoomez sur la règle à côté de la souris. Tracez une ligne droite de 10 millimètres sur l’image de la règle. Allez dans analyser et définir l’échelle.

Entrez 10 comme distance connue. Définissez l’unité de longueur en millimètres et cliquez sur OK. Ensuite, utilisez l’outil rectangle pour sélectionner la zone autour de la plaie d’une largeur et d’une hauteur de 150 et enregistrez les valeurs X et Y.

Ensuite, faites un clic droit sur le rectangle et sélectionnez dupliquer. Nommez l’image dupliquée et appuyez sur Entrée. Dans la nouvelle image, appuyez deux fois sur plus pour effectuer un zoom avant.

Pour séparer l’image en couches de couleur, accédez à Image, Type et Pile RVB. Dans l’image du canal rouge, faites un clic droit sur l’image, sélectionnez Dupliquer et appuyez sur OK dans la fenêtre de duplication. Ensuite, cliquez sur l’image du canal rouge, sélectionnez l’image, ajustez et seuilz pour la segmenter.

Choisissez Par défaut et cliquez sur Appliquer pour appliquer le seuillage. Rectifiez la région d’intérêt ou le retour sur investissement pour assurer une couverture complète de la plaie et éviter les distorsions de segmentation. Pour définir le périmètre de la zone d’intérêt, sélectionnez Modifier, puis accédez à la sélection et choisissez Créer une sélection.

Après cela, sélectionnez Modifier, puis Sélection et cliquez sur Ajouter au gestionnaire pour l’ajouter au gestionnaire de retour sur investissement. Pour valider la segmentation, ouvrez la fenêtre du gestionnaire de ROI et sélectionnez le ROI à examiner. Cliquez sur Plus, Traduire, entrez les valeurs X et Y enregistrées et appuyez sur OK.

Maximisez l’image d’origine, puis sélectionnez le retour sur investissement dans le gestionnaire de retour sur investissement. Utilisez les touches fléchées pour ajuster le retour sur investissement jusqu’à ce qu’il s’aligne avec la plaie. Une fois la segmentation confirmée, obtenez les mesures de la plaie en sélectionnant Analyser et mesurer.

Le pourcentage de fermeture de la plaie a d’abord augmenté à 138,04 % le deuxième jour en raison de processus inflammatoires avant de diminuer et de progresser vers des phases de réparation et de consolidation, avec une fermeture constante observée après le septième jour. La distance de rétraction du bord de la plaie a augmenté initialement pendant la phase inflammatoire, mais a commencé à diminuer après le troisième jour, comme le montre l’équation de Gilman indiquant une contraction progressive de la plaie.