Name: Évaluation de gènes anormaux liés à la croissance de cellules souches et progénitrices hématopoïétiques en combinant la technologie CRISPR/Cas9 avec le comptage cellulaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Découvrez une méthode combinant CRISPR/Cas9 et le test CCK-8 pour identifier les gènes régulant la prolifération anormale des cellules souches hématopoïétiques. Cette approche révèle des cibles thérapeutiques potentielles contre la leucémie.

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<ol><li>Wilkinson, A. C., Igarashi, K. J., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cell+self-renewal+in+vivo+and+ex+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cell self-renewal in vivo and ex vivo.</a> Nat Rev Genet. 21 (9), 541-554 (2020).</li>
<li>Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cells%3A+Concepts%2C+definitions%2C+and+the+new+reality%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cells: Concepts, definitions, and the new reality.</a> Blood. 125 (17), 2605-2613 (2015).</li>
<li>Seita, J., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cell%3A+Self-renewal+versus+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Syst+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cell: Self-renewal versus differentiation.</a> Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 2 (6), 640-653 (2010).</li>
<li>Vetrie, D., Helgason, G. V., Copland, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+leukaemia+stem+cell%3A+Similarities%2C+differences+and+clinical+prospects+in+cml+and+aml%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The leukaemia stem cell: Similarities, differences and clinical prospects in cml and aml.</a> Nat Rev Cancer. 20 (3), 158-173 (2020).</li>
<li>Chopra, M., Bohlander, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+of+origin+and+the+leukemia+stem+cell+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Chromosomes+Cancer%22%5BJournal%5D)">The cell of origin and the leukemia stem cell in acute myeloid leukemia.</a> Genes Chromosomes Cancer. 58 (12), 850-858 (2019).</li>
<li>Cox, C. V., Diamanti, P., Evely, R. S., Kearns, P. R., Blair, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+CD133+on+leukemia-initiating+cells+in+childhood+all%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Expression of CD133 on leukemia-initiating cells in childhood all.</a> Blood. 113 (14), 3287-3296 (2009).</li>
<li>González-García, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-7R+is+essential+for+leukemia-initiating+cell+activity+of+T-cell+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">IL-7R is essential for leukemia-initiating cell activity of T-cell acute lymphoblastic leukemia.</a> Blood. 134 (24), 2171-2182 (2019).</li>
<li>Jinek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+programmable+dual-rna-guided+DNA+endonuclease+in+adaptive+bacterial+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A programmable dual-rna-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity.</a> Science. 337 (6096), 816-821 (2012).</li>
<li>Porteus, M. H., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+nucleases+stimulate+gene+targeting+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Chimeric nucleases stimulate gene targeting in human cells.</a> Science. 300 (5620), 763-763 (2003).</li>
<li>Wang, S. -W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+applications+and+future+perspective+of+CRISPR%2FCas9+gene+editing+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Current applications and future perspective of CRISPR/Cas9 gene editing in cancer.</a> Mol Cancer. 21 (1), (2022).</li>
<li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIT-Cas9%3A+A+CRISPR%2Fcas9+genome-editing+device+under+tight+and+effective+drug+control%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Nucleic+Acids%22%5BJournal%5D)">HIT-Cas9: A CRISPR/cas9 genome-editing device under tight and effective drug control.</a> Mol Ther Nucleic Acids. 13, 208-219 (2018).</li>
<li>Joung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+CRISPR-Cas9+knockout+and+transcriptional+activation+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening.</a> Nat Protoc. 12 (4), 828-863 (2017).</li>
<li>Kühn, R., Schwenk, F., Aguet, M., Rajewsky, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+gene+targeting+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Inducible gene targeting in mice.</a> Science. 269 (5229), 1427-1429 (1995).</li>
<li>Arnheiter, H., Skuntz, S., Noteborn, M., Chang, S., Meier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+with+intracellular+immunity+to+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice with intracellular immunity to influenza virus.</a> Cell. 62 (1), 51-61 (1990).</li>
<li>Randall, T. D., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+functional+changes+induced+at+the+clonal+level+in+hematopoietic+stem+cells+after+5-fluorouracil+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and functional changes induced at the clonal level in hematopoietic stem cells after 5-fluorouracil treatment.</a> Blood. 89 (10), 3596-3606 (1997).</li>
<li>Gavrilescu, L. C., Van Etten, R. A. Murine retroviral bone marrow transplantation models for the study of human myeloproliferative disorders. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGavrilescu%2C+LC+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22">Curr Protoc Pharmacol</a>. Chapter 14 (Unit 14.10), (2008).</li>
<li>Pinello, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+CRISPR+genome-editing+experiments+with+CRISPResso%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Analyzing CRISPR genome-editing experiments with CRISPResso.</a> Nat Biotechnol. 34 (7), 695-697 (2016).</li>
<li>Cai, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+long+noncoding+RNA+CRISPRi+screen+identifies+PRANCR+as+a+novel+regulator+of+epidermal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">A genome-wide long noncoding RNA CRISPRi screen identifies PRANCR as a novel regulator of epidermal homeostasis.</a> Genome Res. 30 (1), 22-34 (2020).</li>
<li>Ng, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-mediated+modeling+and+functional+validation+of+candidate+tumor+suppressor+genes+in+small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">CRISPR-mediated modeling and functional validation of candidate tumor suppressor genes in small cell lung cancer.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 117 (1), 513-521 (2020).</li>
<li>Crowther, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR-Cas9+screening+reveals+ubiquitous+T+cell+cancer+targeting+via+the+monomorphic+MHC+class+i-related+protein+MR1%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR-Cas9 screening reveals ubiquitous T cell cancer targeting via the monomorphic MHC class i-related protein MR1.</a> Nat Immunol. 21 (2), 178-185 (2020).</li>
<li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+labeling+of+genomic+loci+with+dCas9+and+engineered+sgRNAs+using+CRISPRainbow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multiplexed labeling of genomic loci with dCas9 and engineered sgRNAs using CRISPRainbow.</a> Nat Biotechnol. 34 (5), 528-530 (2016).</li>
<li>Szlachta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+knockout+screening+identifies+combinatorial+drug+targets+in+pancreatic+cancer+and+models+cellular+drug+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">CRISPR knockout screening identifies combinatorial drug targets in pancreatic cancer and models cellular drug response.</a> Nat Commun. 9 (1), 4275(2018).</li>
<li>Baeten, J. T., Liu, W., Preddy, I. C., Zhou, N., Mcnerney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crispr+screening+in+human+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+reveals+an+enrichment+for+tumor+suppressor+genes+within+chromosome+7+commonly+deleted+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Crispr screening in human hematopoietic stem and progenitor cells reveals an enrichment for tumor suppressor genes within chromosome 7 commonly deleted regions.</a> Leukemia. 36 (5), 1421-1425 (2022).</li>
<li>Korkmaz, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genetic+screens+for+enhancer+elements+in+the+human+genome+using+crispr-cas9%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Functional genetic screens for enhancer elements in the human genome using crispr-cas9.</a> Nat Biotechnol. 34 (2), 192-198 (2016).</li>
<li>Heckl, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+mouse+models+of+myeloid+malignancy+with+combinatorial+genetic+lesions+using+CRISPR-Cas9+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Generation of mouse models of myeloid malignancy with combinatorial genetic lesions using CRISPR-Cas9 genome editing.</a> Nat Biotechnol. 32 (9), 941-946 (2014).</li>
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<table><tbody><tr><td>0,45 &mu ; m membrane de microfiltration</td><td>Sartoriu</td><td>16533K-1</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL Tube EP</td><td>LABLEAD</td><td>MCT-150-CLD-1</td><td></td></tr><tr><td>Antenne parabolique de 10 cm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Seringue</td><td></td><td></td> stérile LABLEAD LXG1500 <td></td></tr><tr><td>1 mL</td> 2x Accurate Taq Master Mix (colorant plus)Accurate Biology AG11010 Pour PCR de colonie <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tube de 50 mL</td><td>LABLEAD</td><td>LXG5000</td><td></td></tr><tr><td>5-Fluorouracile</td><td>Sigma</td><td>F6627-1</td><td></td></tr><tr><td>Plaque 6 puits</td><td>Corning</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>70 &micro ; Tamis à cellules m</td><td>Falcon&reg ;</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Plaques à 96 puits</td><td>Corning</td><td>3599</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de lyse ACK</td><td>Leagene</td><td>CS0001</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>BIODEE</td><td>DE0010</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilline</td><td>Solarbio</td><td>A8180</td><td></td></tr><tr><td>Applied Biosystems Thermocycleurs pour PCR</td><td>Thermofisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit de comptage de cellules-8</td><td>Bimake</td><td>B34304</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>eppendorf</td><td>Centrifugeuse 5810R</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Incubateur</td><td>Thermo SCIENTIFIC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td></td></tr><tr><td>DNA Clean& Concentrateur-5</td><td>ZYMO</td><td>D4014</td><td></td></tr><tr><td>Dneasy Blood & Tissure Kit</td><td>Qiagen</td><td>69504</td><td></td></tr><tr><td>ESP3I (BSMBI)</td><td>NEB</td><td>R0580L</td><td></td></tr><tr><td>Sérum de veau fœtal</td><td>ExCell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 9.3</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEK-293T</td><td>ATCC ; Virginie, États-Unis</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEPEs</td><td>Sigma</td><td>V900477</td><td></td></tr><tr><td>KOD-Plus-Neo</td><td>TOYOBO</td><td>KOD-401</td><td></td></tr><tr><td>lentiGuide-Puro</td><td>Addgene</td><td>52963</td><td>vecteur de squelette</td></tr><tr><td>LSL-Cas9 souris</td><td>Modèle Animal Centre de recherche of NANJING UNIVERSITY&nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>T002249 spectrophotomètre d’absorbance de microplaques</td><td>BIO-RAD</td><td>xMark&trade ;</td><td></td></tr><tr><td>Nacl</td><td>Rhawn</td><td>R019772</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Solarbio</td><td>P1003</td><td></td></tr><tr><td>PEI</td><td>Proteintech</td><td>B600070</td><td></td></tr><tr><td>solution de pénicilline-streptomycine, 100x</td><td>Solarbio</td><td>P1400</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G plasmide</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>polybrene</td><td>Beyotime</td><td>C0351</td><td></td></tr><tr><td>Sel de sodium d’acide polyinosinique-polycytidylique</td><td>Sigma</td><td>P1530</td><td></td></tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene</td><td>12260</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick PCR Purification Kit&nbsp ;</td><td>Qiagen</td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>RecombinantMurineIL-3</td><td>Peprotech</td><td>213-13-10ug</td><td></td></tr><tr><td>RecombinantMurineIL-6</td><td>Peprotech</td><td>216-16-2ug</td><td></td></tr><tr><td>RecombinantMurineSCF</td><td>Peprotech</td><td>250-03-10ug</td><td></td></tr><tr><td>Agarose régulière</td><td>BIOWEST</td><td>BY-R0100</td><td></td></tr><tr><td>Crevette Phosphatase Alcaline (rSAP)</td><td>NEB</td><td>M0371S</td><td></td></tr><tr><td>Spectrophotomètre SpectraMax QuickDrop Ultra-Micro MOLECULAR</td><td>DIVICES</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stbl3 Cellules compétentes</td><td>BioMed</td><td>BC108-01&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>T4 Polynucléotide Kinase</td><td>NEB</td><td>M0201L</td><td></td></tr><tr><td>T4-Ligase</td><td>Takara</td><td>2011B</td><td></td></tr><tr><td>TIANprep Rapid Mini Plasmide Kit</td><td>TIANGEN</td><td>DP105-03</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue solution</td><td>LABLEAD</td><td>C0040-100ml</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>OXOID</td><td>LP0042</td><td></td></tr><tr><td>WEHI-CM</td><td>Nanjing Fuksai Biotechnology&nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CBP50079 EXTRAIT DE LEVURE</td><td>OXOID</td><td>LP0021</td><td></td></tr></tbody></table>

Évaluation de gènes anormaux liés à la croissance de cellules souches et progénitrices hématopoïétiques en combinant la technologie crispr/cas9 avec le comptage cellulaire

Evaluation of Abnormal Growth-related Genes of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells by Combining CRISPR/Cas9 Technology with Cell Counting

Effet de l’inactivation de Trp53 sur la capacité proliférative des HSPC de souris Ici, nous avons utilisé l’inactivation Trp53 comme exemple pour démontrer ce protocole. Pour étudier l’effet de l’inactivation de Trp53 sur la capacité proliférative des HSPC de souris, nous avons utilisé la transfection lentivirale pour introduire l’ARNsg Trp53 dans des cellules de moelle osseuse exprimant Cas9 enrichies pour les HSPC après un traitem...

Évaluation de gènes anormaux liés à la croissance de cellules souches et progénitrices hématopoïétiques en combinant la technologie CRISPR/Cas9 avec le comptage cellulaire

Hematopoietic stem cells possess the ability for long-term self-renewal and the potential to differentiate into various types of mature blood cells. ...

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Gène ciblé d’édition à l’aide de CRISPR/Cas9 a grandement facilité la compréhension des fonctions biologiques des gènes. Ici, nous utilisons la méthodologie CRISPR/Cas9 à des mutations de la calréticuline modèle de cytokine-dépendante des cellules hématopoïétiques afin d’étudier leur activité oncogénique.

À l’aide de CRISPR/Cas9 gène édition pour étudier l’activité oncogénique de calréticuline mutante dans les cellules hématopoïétiques dépendant de Cytokine

Un protocole pour rapide CRISPR/Cas9-mediated disruption de génique chez la souris et des cellules hématopoïétiques humaines primaires est décrit dans cet article. Ribonucléoprotéines Cas9-sgRNA sont introduits par électroporation avec sgRNAs des vicitimes in vitro de transcription et commerciale Cas9. Édition de hautes efficacités sont réalisées avec peu de temps et de coût financier.

Perturbation de gène hautement efficace des cellules progénitrices hématopoïétiques murins et humains par CRISPR/Cas9

Ce manuscrit décrit une méthode de base CRISPR-Cas9 de groupés régulièrement entrecoupées court palindromique répète (CRISPR) pour une enquête rapide et simple du rôle de plusieurs gènes candidats à la prolifération des cellules de la leucémie myéloïde aiguë (AML) Parallèlement. Cette technique est évolutive et peut être appliquée dans les autres lignées cellulaires cancéreuses ainsi.

Enquête de dépendances génétiques utilisant la concurrence fondée sur les Cas9-CRISPR

Une bibliothèque CRISPR/sgRNA a été appliquée à interroger des gènes codant pour des protéines. Toutefois, la faisabilité d’une bibliothèque de sgRNA afin de découvrir la fonction d’une limite de la FCCT dans la régulation des gènes reste inexplorée. Nous décrivons ici une bibliothèque de sgRNA spécifiques de locus HOX afin d’élucider la fonction des limites de la FCCT dans loci HOX .

HOX Locus Focused CRISPR/sgRNA bibliothèque préalable identifier critique FCCT limites

Les protocoles décrits pour l'édition génomique très efficace des cellules hématopoïétiques et progénitrices hématopoïétiques (HSPC) par le système CRISPR/Cas9 pour développer rapidement des systèmes de modèle de souris avec des modifications génétiques hématopoïétiques spécifiques au système.

Modification du génome de Lentiviral CRISPR/Cas9-Mediated pour l'étude des cellules hématopoïétiques dans les modèles de maladie

La livraison directe des complexes préassemblés de ribonucleoprotein d'ARN de Cas9/guide est un moyen rapide et efficace pour l'édition de génome dans les cellules hématopoïétiques. Ici, nous utilisons cette approche pour supprimer un silencieux intronique RUNX1 et examiner les réponses transcriptionnelles dans les cellules leucémiques OCI-AML3.

Investigation of the Transcriptional Role of a RUNX1 Intronic Silencer par CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein in Acute Myeloid Leukemia Cells

Le présent protocole décrit une procédure optimisée de culture de cellules souches et progénitrices hématopoïétiques (HSPC) pour la greffe robuste de cellules génétiquement modifiées in vivo.

Édition génique CRISPR/Cas9 de cellules souches et progénitrices hématopoïétiques pour des applications de thérapie génique

De nouvelles stratégies pour modéliser fidèlement les mutations somatiques dans les cellules souches et progénitrices hématopoïétiques (HSPC) sont nécessaires pour mieux étudier la biologie des cellules souches hématopoïétiques et les hémopathies malignes. Ici, un protocole pour modéliser les mutations hétérozygotes de gain de fonction dans les HSPC en combinant l’utilisation de CRISPR / Cas9 et la double transduction du donneur rAAV est décrit.

Ingénierie des mutations hétérozygotes oncogéniques de gain de fonction dans les cellules souches et progénitrices hématopoïétiques humaines

La méthode présentée décrit la génération d’un gène knock-out médié par CRISPR dans la lignée H9 de cellules souches embryonnaires humaines (hESC), qui exprime de manière stable des sgRNA ciblant le gène L2HGDH à l’aide d’un système de distribution de gènes à médiation lentivirale très efficace.

Délétion de gène médiée par CRISPR-Cas9 dans des cellules souches pluripotentes humaines cultivées dans des conditions sans nourrisseur

Nous avons développé un protocole optimisé de dépistage CRISPR-Cas9 pour les cellules CAR T primaires. En réduisant la transmission d’ADNgDNA par la digestion enzymatique et le pulldown des cassettes d’ARNsg, cette approche minimise les artefacts PCR, assurant une détection précise des sgRNA et une identification robuste des cibles géniques fonctionnelles.

Améliorer les écrans CRISPR-Cas9 dans les cellules CAR T : une méthode affinée pour la préparation des bibliothèques

Découvrez une méthode combinant CRISPR/Cas9 et le test CCK-8 pour identifier les gènes régulant la prolifération anormale des cellules souches hématopoïétiques. Cette approche révèle des cibles thérapeutiques potentielles contre la leucémie.

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