Name: Une approche non virale pour générer des lymphocytes T récepteurs antigéniques chimériques transitoires à l’aide de l’ARNm pour l’immunothérapie du cancer (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Découvrez une approche non virale pour générer des lymphocytes T CAR transitoires à l'aide d'ARNm pour l'immunothérapie du cancer. Cette méthode électroporation offre une solution sécurisée et économique.

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<table><tbody><tr><td>Colorant de viabilité 7-AAD&nbsp ;</td><td>Biolegend</td><td>420404</td><td></td></tr><tr><td>ACEA Novocyte Cytomètre en flux</td><td>Agilent</td><td>NovoCyte 3000</td><td></td></tr><tr><td>AIM-V moyen</td><td>Gibco</td><td>12055083</td><td></td></tr><tr><td>APC chèvre anti-humain IgG F(ab')2</td><td>anticorps Jackson ImmunoResearch Laboratories</td><td>109-136-097</td><td></td></tr><tr><td>BglII Restriction Enzyme</td><td>New England BioLabs (NEB)</td><td>R0144L</td><td></td></tr><tr><td>3&acute ;-O-Me-m7G(5')ppp(5')G Structure du capuchon d’ARN Analogique</td><td>NEB</td><td>S1411S</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, haute teneur en glucose</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads Activateur humain CD3/CD28</td><td>billes Gibco</td><td>11131D</td><td></td></tr><tr><td>E-Plate 96</td><td>Agilent</td><td>5232376001</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma</td><td>459844-4L</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Lonza.com</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>HiScribe SP6 Kit de synthèse d’ARN</td><td>New England BioLabs (NEB)</td><td>E2070S</td><td></td></tr><tr><td>Protéine recombinante humaine IL-2</td><td>Marqueurs</td><td></td> d’ARN Gibco 15140122 <td></td></tr><tr><td>Millennium</td><td>Invitrogen</td><td>AM7150</td><td></td></tr><tr><td>Monarch Kit de nettoyage de l’ARN (500 &mu ; g)</td><td>NEB</td><td>T2050L</td><td></td></tr><tr><td>N1-Methylpseudo-UTP</td><td>Trilink</td><td>N-1081-10</td><td></td></tr><tr><td>Instrument de transfection au néon</td><td>Invitrogen</td><td>MPK5000</td><td></td></tr><tr><td>Système de transfection au néon 100-&mu ; L Kit</td><td>Invitrogen</td><td>MPK10096</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine (10000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Moyen</td><td>Gibco</td><td>11875135</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA (0,05 %), rouge de phénol</td><td>Gibco</td><td>25300120</td><td></td></tr><tr><td>Phénol UltraPure Phénol :Chloroforme :Alcool isoamylique (25:24:1, v/v)</td><td>Invitrogen</td><td>15593049</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence Instrument d’analyse cellulaire en temps réel (RTCA)</td><td>Agilent</td><td>RTCA MP</td><td></td></tr><tr><td>ZymoPURE II Plasmide Midiprep Kit</td><td>Zymo Research</td><td>D4201</td><td></td></tr></tbody></table>

une approche non virale pour générer des lymphocytes t récepteurs antigéniques chimériques transitoires à l’aide de l’arnm pour l’immunothérapie du cancer

A Nonviral Approach to Generate Transient Chimeric Antigen Receptor T Cells Using mRNA for Cancer Immunotherapy

Nous avons construit un CAR de deuxième génération ciblant HER2 contenant un scFv dérivé de l’anticorps monoclonal (mAb) de souris anti-HER2 humanisé 4D547, une région transmembranaire et un domaine de costimulation intracellulaire 4-1BB suivi du domaine d’activation CD3ζ (Figure 1A). La séquence d’ADN codant pour le CAR contenait un promoteur 5' SP6 pour piloter la transcription de l’ARNm du CAR in vitro (Figure 1B). L’ARNm du C...

Une approche non virale pour générer des lymphocytes T récepteurs antigéniques chimériques transitoires à l’aide de l’ARNm pour l’immunothérapie du cancer

Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy has emerged as a pioneering cancer treatment, achieving unprecedented success in treating certain ...

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Cette vidéo présente une technique de fabrication ex vivo de lymphocytes T à récepteur antigénique chimérique (CAR). Les lymphocytes T humains sont incubés avec des billes magnétiques recouvertes d’anticorps anti-CD3 et anti-CD28, ainsi qu’un milieu complété par l’interleukine-2 (IL-2), conduisant à l’activation et à la prolifération des lymphocytes T. Des vecteurs lentiviraux transgéniques sont introduits, ce qui permet à l’ARN transgénique de s’intégrer dans le génome de l’hôte et d’exprimer...

Une technique ex vivo pour fabriquer des lymphocytes T à récepteur antigénique chimérique

Cette vidéo présente une technique de génération ex vivo de lymphocytes T à récepteur antigénique chimérique (CAR) spécifique de l’antigène tumoral. Des vecteurs rétroviraux porteurs d’ARN transgénique sont mélangés à des cellules de la rate dans un milieu complété par de l’interleukine-2 pour favoriser la survie et la prolifération des lymphocytes T. Le mélange est ensuite transféré sur une plaque recouverte de fragments de fibronectine humaine recombinante et centrifugée pour faciliter la...

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Cette vidéo présente une technique permettant de générer des lymphocytes T à récepteur antigénique chimérique (CAR) spécifiques de l’antigène par transduction rétrovirale. Des lymphocytes T CD8+ murins activés sont ajoutés à une plaque de micropuits recouverte de fragments de fibronectine recombinante. Des vecteurs rétroviraux contenant de l’ARN transgénique codant pour un récepteur d’antigène chimérique (CAR) spécifique de l’antigène sont ensuite introduits, et la plaque est centrifugée pour...

Technique de génération de cellules CAR-T spécifiques de l’antigène

Le cours combine protocole unicellulaire jumelé humain séquençage de TCR alpha et bêta de chaîne avec simplifié génération des vecteurs rétroviraux compatibles avec l’expression de TCR in vitro et in vivo .

Rationalisé unicellulaire TCR isolement et génération des vecteurs rétroviraux pour In Vitro et In Vivo Expression de TCRs humaines

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Fabrication de cellules T de récepteur d'antigène chimérique (CAR) pour l'immunothérapie adoptive

Ce protocole décrit la méthodologie de suivi non invasif des lymphocytes T génétiquement modifiés pour exprimer les récepteurs d’antigènes chimériques in vivo avec une plate-forme cliniquement disponible.

Imagerie dynamique des lymphocytes T récepteurs de l’antigène chimérique avec [18F]Tomographie par émission de positons tétrafluoroborates/Tomodensitométrie

Cet article détaille le processus de fabrication des lymphocytes T à récepteurs antigéniques chimériques à usage clinique, en particulier à l’aide d’un processeur cellulaire automatisé capable d’effectuer la transduction virale et la culture de lymphocytes T. Nous formulons des recommandations et décrivons les pièges à éviter qui doivent être pris en compte lors de l’élaboration du processus et de la mise en œuvre d’un essai clinique de phase précoce.

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Ce protocole rationalise la production de vecteurs rétroviraux et la transduction des lymphocytes T murins, facilitant ainsi la génération efficace de cellules CAR-T chez la souris.

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Ce protocole fournit un flux de travail rationalisé pour générer et tester des cellules T régulatrices du récepteur antigénique chimérique humain (CAR Tregs).

Génération de lymphocytes T régulateurs du récepteur de l’antigène chimérique humain

Un protocole détaillé est fourni pour l’utilisation de la technologie CRISPR/Cas9 afin d’obtenir un knock-in ciblé très efficace de grandes constructions multicistroniques dans les cellules T humaines primaires via la voie de réparation de l’ADN HMEJ (Homology-Mediated End Joindre). Les lymphocytes T conçus avec ce protocole adaptable à la GMPc maintiennent une excellente expansion cellulaire, une cytotoxicité et une production de cytokines.

Ingénierie non virale de lymphocytes T humains primaires via l’intégration ciblée de grandes matrices d’ADN

Ce protocole décrit les étapes essentielles pour la culture des lymphocytes T primaires, y compris leur isolement, leur activation, leur expansion et leur transfection transitoire par électroporation d’ARNm. De plus, un flux de travail et un panel d’anticorps pour l’analyse cytométrique en flux du phénotype, des marqueurs d’activation, de la viabilité et de l’expression du récepteur antigénique chimérique (CAR) sont proposés.

Isolement, culture et transfection transitoire des lymphocytes T humains primaires pour générer les lymphocytes T du récepteur chimérique de l’antigène (CAR)

Découvrez une approche non virale pour générer des lymphocytes T CAR transitoires à l'aide d'ARNm pour l'immunothérapie du cancer. Cette méthode électroporation offre une solution sécurisée et économique.

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