Name: Lavage salin pour l’échantillonnage du microenvironnement immunitaire nasal canin (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 35 s
Description: Découvrez le lavage nasal salin pour échantillonner le microenvironnement immunitaire nasal chez le chien. Cette technique non invasive permet l'analyse sérielle des réponses immunitaires lors de la radiothérapie des tumeurs nasales.

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<ol><li>Cohn, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+nasal+disease%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Clin%3A+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Canine nasal disease: An update.</a> Vet Clin: Small Anim Pract. 50 (2), 359-374 (2020).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1,5 mL&nbsp ; Tubes</td><td>Eppendorf</td><td>05-402</td><td></td></tr><tr><td>1000 & micro ; L Pipette</td><td>VWR</td><td>89079-974</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>20 mL Seringues</td><td>VWR</td><td>BD302830</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Tubes coniques</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>70 &micro ; m Filtre cellulaire</td><td>Fisherbrand</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>8FR Cathéter stérile en caoutchouc rouge</td><td>Med Vet International</td><td>50-252-2428</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de lyse ACK Gibco</td><td></td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Beckman Coulter</td><td>366816</td><td></td></tr><tr><td>Saline physiologique (0,9 %)</td><td>Vetivex</td><td>17033-492-01</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td>Référence 10153-838</td><td></td></tr></tbody></table>

lavage salin pour l’échantillonnage du microenvironnement immunitaire nasal canin

Saline Lavage for Sampling of the Canine Nasal Immune Microenvironment

Avec cette méthode de lavage nasal, l’échantillon collecté apparaîtra légèrement trouble, éventuellement avec des morceaux visibles de débris cellulaires et de mucus lorsque le tube est tourbillonné. Un échantillon serait considéré comme contaminé par du sang périphérique si la procédure de lavage induit par inadvertance un saignement et que l’échantillon est teinté de rouge. Bien qu’une partie de la solution saline perfusée soit perdue pendant la procédure, un lavage négatif serait envisagé si la solution saline perfusion ne reflue pas hors de la narine et dans le tube ; Les causes potentielles pourraient être que la tête n’est pas suffisamment inclinée vers le bas pour permettre un reflux efficace, que l’échantillon s’est écoulé caudalement ou latéralement par la narine controlatérale, ou que le cathéter en caoutchouc rouge n’est pas solidement fixé à la seringue et que la solution saline s’est échappée vers l’extérieur à partir du point de connexion.
Lorsque des échantillons de lavage nasal ont été prélevés avec succès chez des chiens atteints d’un cancer du nez, on s’attend à ce que le nombre de cellules nucléées soit compris entre 1 × 10 6-200 × 10 6, avec 75 à 96 % de cellules vivantes. Alternativement, lorsque des échantillons de lavage nasal ont été collectés avec succès chez des chiens présentant des cavités nasales saines et non enflammées, le nombre de cellules a été compris entre 7 × 105-2 × 106, avec 6 à 16 % de cellules vivantes. Une image représentative d’échantillons cytologiques obtenus à partir d’un prélèvement par lavage nasal de chiens porteurs de tumeurs est présentée à la figure 2. De plus, l’évaluation par cytométrie en flux des populations cellulaires analysées à partir d’échantillons de lavage nasal de chiens sains et porteurs de tumeurs est présentée dans la figure 3. On s’attendrait à ce que le nombre de cellules et le pourcentage de viabilité inférieurs à ces fourchettes indiquent que la procédure de lavage nasal et le prélèvement d’échantillons ont échoué. Le tableau 1 résume les résultats de la technique de lavage nasal réalisée par les auteurs en ce qui concerne le nombre d’interventions effectuées, le nombre de chiens, l’état de la cavité nasale (saine ou porteuse d’une tumeur), le rendement du nombre de cellules nucléées, la viabilité des cellules obtenues pour l’intervention et si l’échantillon de lavage a été considéré comme un succès ou un échec pour l’analyse en aval. Aux fins des expériences réalisées avec les échantillons de lavage nasal inclus dans le tableau 1, un rendement minimal de 150 000 échantillons de lavage nasal a été considéré comme un prélèvement réussi d’échantillons de lavage nasal.
Avec cette technique de lavage nasal, une solution saline stérile à 0,9 % est utilisée pour collecter les cellules. Alternativement, la solution de Hartmann (solution de Ringer lactate) pourrait être envisagée ; cependant, les échantillons prélevés avec une solution saline ou une solution de Hartmann devraient être testés pour garantir une viabilité et des résultats comparables pour les cellules d’intérêt. De plus, une alternative à l’utilisation d’un cathéter en caoutchouc rouge chez les chiens non porteurs de tumeurs pourrait être d’effectuer le lavage nasal avec un cathéter de Foley. Bien qu’elle ne soit pas utilisée dans la technique de lavage nasal présentée ici, l’utilisation d’un cathéter de Foley permettrait de gonfler le ballonnet à l’extrémité du cathéter, obstruant la cavité nasale et empêchant la perte de liquide caudalement. De plus, bien qu’elle n’ait pas été testée dans l’approche de traitement du lavage nasal présentée ici, l’ajout de hyaluronidase à l’échantillon de lavage nasal pourrait être envisagé pour briser le mucus recueilli dans l’échantillon de lavage nasal et libérer plus de cellules pour l’analyse. Cela devrait également être optimisé pour s’assurer que les résultats ne sont pas altérés par l’ajout de hyaluronidase à la procédure de traitement du lavage nasal.
Les résultats publiés obtenus à partir de procédures de lavage nasal réussies effectuées chez des chiens inscrits à un essai clinique sur le cancer canin sont présentés à la figure 310. Les résultats présentés dans la figure 3 proviennent d’une étude portant sur l’impact de l’irradiation ganglionnaire élective sur le microenvironnement immunitaire local de chiens atteints de tumeurs sinuso-nasales dont les tumeurs ont été irradiées seules ou en combinaison avec une irradiation régionale des ganglions lymphatiques cervicaux. Grâce à un échantillonnage en série de la cavité nasale de chiens dans l’essai clinique avec lavage nasal, l’analyse cytométrique en flux des cellules collectées a révélé une diminution significative des populations de cellules T effectrices le dernier jour de la radiothérapie lorsque les ganglions lymphatiques régionaux ont été irradiés en même temps que la tumeur sinonasale par rapport aux chiens qui ont reçu une radiothérapie ciblée sur la tumeur et que les ganglions lymphatiques régionaux ont été épargnés. Cela démontre l’utilité de l’échantillonnage en série de la cavité nasale avec lavage pour étudier les changements dans les populations cellulaires à différents points et dans différentes conditions de traitement.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig01.jpg"> 
Figure 1 : Schéma de la méthode de lavage nasal. Une solution saline chaude et stérile est infusée dans la cavité nasale des chiens anesthésiés à l’aide d’un cathéter en caoutchouc rouge. Le liquide de lavage nasal est recueilli dans un tube lorsqu’il s’écoule du nez. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig02.jpg"> 
Figure 2 : Composition cellulaire d’un échantillon de lavage nasal prélevé sur un chien atteint d’une tumeur nasale. Image représentative d’échantillons cytologiques obtenus à partir d’un prélèvement par lavage nasal (grossissement de 500x, coloration Wright-Giemsa modifiée). Les neutrophiles (flèches) sont les cellules prédominantes, avec quelques cellules épithéliales squameuses (pointe de flèche) et de petits lymphocytes matures (mis en évidence dans l’encadré carré) également présents. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig3v2.jpg"> 
Graphique 3. Analyse par cytométrie en flux d’échantillons de lavage nasal prélevés sur des chiens sains et porteurs de tumeurs. Comparaison de l’abondance de cellules vivantes, de cellules immunitaires et de neutrophiles entre des chiens sains (bleu, n = 3) et des chiens porteurs de tumeurs atteints d’un carcinome sinonasal (rouge, n = 4). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig3v2large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig04.jpg"> 
Figure 4 : Analyse cytométrique en flux de cellules prélevées lors d’un lavage nasal chez des chiens inscrits à un essai clinique portant sur l’impact de l’irradiation ganglionnaire élective (IEN) sur le microenvironnement immunitaire local. Quantification des lymphocytes T CD4 (CD5+CD4+) et CD8 (CD5+CD8+) à partir d’échantillons de lavage nasal. Les chiens traités par ENI en même temps que l’irradiation tumorale (n = 3) présentaient une réduction significative des lymphocytes T effecteurs CD4 et CD8 le dernier jour de l’irradiation (jour 3) par rapport aux chiens traités par des radiations ciblant uniquement la tumeur (n = 3). Cette figure a été modifiée à partir de Darragh et al.10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Sain (n = 3)</td>
			<td>Porteur de tumeur (n = 19)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nombre d’interventions effectuées</td>
			<td>3</td>
			<td>80</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Numération cellulaire</td>
			<td>0,7 x 106 - 2,8 x 106</td>
			<td>1,6 x 106 - 210 x 106 ; médiane : 8,7 x 106</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viabilité cellulaire</td>
			<td>6.3 - 15.9%</td>
			<td>75% - 96%; médiane : 87 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taux de réussite</td>
			<td>100%</td>
			<td>98.80%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 1 : Résumé des procédures de lavage nasal effectuées et des caractéristiques cellulaires des échantillons obtenus.

Lavage salin pour l’échantillonnage du microenvironnement immunitaire nasal canin

Evaluating the local immune microenvironment of the canine nasal cavity can be important for investigating normal tissue health and disease conditions, ...

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