Lavage salin pour l’échantillonnage du microenvironnement immunitaire nasal canin

Nous étudions les réponses immunitaires associées à la radiothérapie et aux chiens atteints de tumeurs nasales. Nous essayons de comprendre comment nous pouvons améliorer les résultats des patients atteints de cancer grâce à la radiothérapie en modulant le système immunitaire. Les changements dans le microenvironnement immunitaire peuvent être importants dans l’étude des effets du traitement. Par conséquent, l’analyse en série des cellules du microenvironnement est souhaitée. Cependant, il peut être difficile d’échantillonner les tissus de la cavité nasale avec des biopsies répétées en raison de l’anatomie complexe et de la propension de la muqueuse à saigner.

La technique de lavage nasal salin permet un échantillonnage en série du microenvironnement immunitaire de la cavité nasale avec une perturbation minimale des tissus. Les cellules et les protéines recueillies avec la technique de lavage nasal peuvent être analysées à l’aide de divers tests pour étudier l’état du microenvironnement immunitaire nasal au fil du temps.

Un jour avant l’intervention, remplissez des seringues de 520 millilitres avec une solution saline physiologique stérile. Fermez bien les seringues et placez-les dans un incubateur à 37 degrés Celsius pour les réchauffer pendant la nuit. Positionnez ensuite le gisant externe du chien anesthésié sur la table de traitement. Ajustez la tête du chien pour qu’elle soit inclinée vers le bas, naturellement et confortablement hors du bord de la table pour faciliter la collecte optimale des échantillons de lavage nasal. Gonflez le ballonnet de la sonde endotrachéale pour assurer une étanchéité des voies respiratoires. Pour le lavage nasal, coupez un cathéter en caoutchouc rouge stérile français à la base pour l’ajuster parfaitement à l’une des seringues préremplies de 20 millilitres contenant une solution saline chaude. À l’aide d’un marqueur permanent, marquez l’extrémité de la base du cathéter pour indiquer le point de départ à l’entrée de la narine. Confirmez que la longueur prédéterminée s’étend par voie intranasale avec la pointe positionnée à l’endroit souhaité. Ensuite, coupez l’extrémité du cathéter pour qu’elle corresponde à la longueur définie du cathéter intranasal, en vous assurant qu’elle atterrira à l’endroit approprié dans la cavité nasale. Pour effectuer la procédure de lavage nasal, désignez une personne pour introduire le cathéter dans la cavité nasale et l’administrer, et l’autre personne pour prélever l’échantillon à la sortie du nez. Placez une personne devant et en dessous de la tête du chien, avec des gants. Guidez doucement le cathéter en caoutchouc rouge dans la face médiale de la cavité nasale jusqu’à ce que la marque sur le cathéter s’aligne avec l’entrée de la narine. Simultanément, l’autre personne tient un tube conique de 50 millilitres sous la narine avec le cathéter en place. D’une main, occlure doucement la narine controlatérale. Commencez à infuser la solution saline dans la cavité nasale avec une pression lente et régulière ou avec une perfusion pulsée tout en maintenant la tête du chien à un angle vers le bas. Recueillez le liquide drainant dans un tube conique de 50 millilitres placé sous la narine. Après la procédure, laissez le chien se remettre de l’anesthésie tout en le gardant allongé à l’extérieur, la tête vers le bas. Enregistrez maintenant le volume total de liquide de lavage nasal recueilli par rapport à la quantité totale de solution saline perfusée. Pour traiter l’échantillon, utilisez un vortex ou une pipette pour les échantillons de lavage nasal à l’intérieur des tubes coniques afin de briser les amas de débris et de cellules. Faites passer les échantillons groupés à travers un filtre à cellules de 70 micromètres pour éliminer les gros débris dans le mucus. Centrifuger les échantillons filtrés à 300 G pendant cinq à 10 minutes pour former une pastille cellulaire. À l’aide d’une pipette, aspirez soigneusement le surnageant des échantillons de la centrifugeuse. Déposer le surnageant dans un tube propre pour une analyse ultérieure des protéines. Enfin, remettez en suspension les pastilles cellulaires dans du PBS ou la solution préférée pour les tests cellulaires d’intérêt.