Name: Cryosectionnement et immunomarquage du tissu de l’oreille interne de souris : du stade embryonnaire au stade adulte (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T13:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Apprenez le cryosectionnement et l'immunomarquage du tissu de l'oreille interne de souris, du stade embryonnaire à l'adulte. Cette méthode guide les chercheurs débutants en sciences auditives vers des résultats fiables.

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<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericytes+control+vascular+stability+and+auditory+spiral+ganglion+neuron+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Pericytes control vascular stability and auditory spiral ganglion neuron survival.</a> Elife. 12, e83486(2023).</li>
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<li>Donadieu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+cryosections+and+specific+immunohistochemical+methods+for+detecting+hypoxia+in+mouse+and+rat+cochleae%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">Improved cryosections and specific immunohistochemical methods for detecting hypoxia in mouse and rat cochleae.</a> Acta Histochem. 109 (3), 177-184 (2007).</li>
<li>Rio, C., Dikkes, P., Liberman, M. C., Corfas, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+fibrillary+acidic+protein+expression+and+promoter+activity+in+the+inner+ear+of+developing+and+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Glial fibrillary acidic protein expression and promoter activity in the inner ear of developing and adult mice.</a> J Comp Neurol. 442 (2), 156-162 (2002).</li>
<li>Ahmad, S., Chen, S., Sun, J., Lin, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexins+26+and+30+are+co-assembled+to+form+gap+junctions+in+the+cochlea+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Connexins 26 and 30 are co-assembled to form gap junctions in the cochlea of mice.</a> Biochem Biophys Res Commun. 307 (2), 362-368 (2003).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spag6+mutant+mice+have+defects+in+development+and+function+of+spiral+ganglion+neurons%2C+apoptosis%2C+and+higher+sensitivity+to+paclitaxel%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Spag6 mutant mice have defects in development and function of spiral ganglion neurons, apoptosis, and higher sensitivity to paclitaxel.</a> Sci Rep. 7 (1), 8638(2017).</li>
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<li>Goodyear, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+age-related+degradation+of+the+tectorial+membrane+in+the+Ceacam16%CE%B2gal%2F%CE%B2gal+null+mutant+mouse%2C+a+model+for+late-onset+human+hereditary+deafness+DFNB113%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Accelerated age-related degradation of the tectorial membrane in the Ceacam16βgal/βgal null mutant mouse, a model for late-onset human hereditary deafness DFNB113.</a> Front Mol Neurosci. 12, 147(2019).</li>
<li>Zupančič, D., Terčelj, M., Štrus, B., Veranič, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+obtain+good+morphology+and+antigen+detection+in+the+same+tissue+section%5BTitle%5D)+AND+%22Protoplasma%22%5BJournal%5D)">How to obtain good morphology and antigen detection in the same tissue section.</a> Protoplasma. 254 (5), 1931-1939 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Chemicals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>BP151-500</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning, Inc.</td><td>46-013-CM</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich, LLC.</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose&nbsp ;</td><td>VWR International, Inc.</td><td>97061-432</td><td></td></tr><tr><td>Azoture de sodium</td><td>Amresco, Inc.</td><td>0639-250G</td><td></td></tr><tr><td>Microscopie électronique au</td><td>paraformaldéhyde</td> Sciences <td>15714</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon labs, Inc.</td><td>v1001</td><td></td></tr><tr><td>Diméthylbutane&nbsp ;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>19387-AP</td><td></td></tr><tr><td>Composé à température de coupe optimale (OCT)</td><td>VWR International, Inc.</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>Équipement spécifique</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>14-071-459</td><td></td></tr><tr><td>Pince à disection</td><td>Microscopie électronique Sciences</td><td>72700-DZ</td><td></td></tr><tr><td>Barrière hydrophobe Peroxydase-Antiperoxydase Stylo (PAP)&nbsp ;</td><td>Laboratoires Vector, Inc.</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>Microscope confocal</td><td>Carl Zeiss Microscopy, LLC.</td>Micropipette <td>LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>P20</td><td>Gilson, Inc.</td><td></td><td></td>F144056M</tr><tr><td>Ciseaux de dissection</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>08-951-20</td><td></td></tr><tr><td>Antenne Sylgard</td><td>Sciences de microscopie électronique</td><td>24236-10</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Eppendorf</td><td>5424R</td><td></td></tr><tr><td>Matériaux de montage</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount</td><td>Microscopie électronique Sciences</td><td>17984-25</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost plus lames</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>1255015</td><td></td></tr><tr><td>Immunomarking Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal Donkey Serum</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Fragments de FAB anti-souris&nbsp ;</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>715-007-003</td><td></td></tr><tr><td>BlokHen</td><td>Aves labs, Inc.</td><td>BH-1001</td><td></td></tr><tr><td>Tuj1 (bêta-III-tubuline) anticorps monoclonal de souris</td><td>Biolegend, Inc.</td><td>MMS-435P</td><td></td></tr><tr><td>Sox2 anticorps polyclonal de chèvre</td><td>R& D Systems, Inc.</td><td>AF2018</td><td></td></tr><tr><td>Myo6 anticorps polyclonal de lapin</td><td>Proteus Biosciences</td><td>25&ndash ; 6791</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps polyclonal de lapin Myo7A</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>PA1-936</td><td></td></tr><tr><td>Plexin-B1 chèvre anticorps polyclonal</td><td>R& D Systems, Inc.</td><td>AF3749</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps secondaires (fabriqués chez l’âne ; Alexa-488, Cy3, Cy5)</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>Voir le catalogue</td><td></td></tr></tbody></table>

cryosectionnement et immunomarquage du tissu de l’oreille interne de souris : du stade embryonnaire au stade adulte

Cryosectioning and Immunostaining Mouse Inner Ear Tissue: From Embryonic to Adult Stages

Nous présentons des exemples de notre propre laboratoire de l’apex et du tour basal d’une cochlée embryonnaire de souris au jour 16.5 (E16.5) et du tour basal des cochlées postnatales au jour 0 (P0) et au jour P30. Ces échantillons ont été sectionnés et immunomarqués à l’aide de marqueurs pour les cellules ciliées (Myo7A et Myo6), les neurones ganglionnaires spiralés (SGN ; Tuj1), les cellules gliales et de soutien (Sox2), et la plexine-B1, qui marque la membrane basale autour du canal cochléaire et des SGN. Les coupes t...

Cryosectionnement et immunomarquage du tissu de l’oreille interne de souris : du stade embryonnaire au stade adulte

This protocol details general histology methods for preparing inner ear samples from embryonic, neonatal, and adult mice. The purpose of this protocol is ...

cryosectioning-immunostaining-mouse-inner-ear-tissue-from-embryonic

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JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

Une procédure simple de vibratome sectionner l'organe de Corti, suivie par microscopie confocale immunohistochimie et est décrit. Cette procédure permet une meilleure conservation de l'cytoarchitecture amende de l'organe de Corti des mammifères, et permet par conséquent d'une quantification précise des types de cellules.

Vibratome sectionnement pour la préservation accrue de la cytoarchitecture de l&#39;Organe de Corti des mammifères

Nous présentons une méthode qui décrit l’isolement et la culture d’explants cochléaires à partir d’oreilles internes embryonnaires de souris.  Nous démontrons également une méthode de transfert de gènes dans des explants cochléaires par électroporation à ondes carrées. La culture d’explants in vitro couplée à la technique de transfert de gènes permet aux chercheurs d’étudier les effets de la modification de l’expression des gènes au cours du développement.

Culture de souris embryonnaires cochléaires explants et Gene Transfer par électroporation

Nous présentons une méthode pour isoler l'organe de Corti adulte que trois tours intactes cochléaires (APEX, milieu, et de la base). Nous démontrons également une procédure pour immunocoloration avec des anticorps marqués par fluorescence. Ensemble, ces techniques permettent l'étude des cellules ciliées, cellules de soutien, et d'autres types de cellules trouvées dans la cochlée.

Mont entiers Dissection et immunofluorescence de la cochlée de souris adultes

Nous présentons un protocole pour isoler la bulle auditive, la capsule et les osselets de souris postnatales pour une analyse histologique et de montage entier.

Dissection de l&#39;Auditory Bulla chez les souris postnatale: Isolation des os de l&#39;oreille moyenne et l&#39;analyse histologique

Ici, nous présentons un protocole détaillé pour détecter et quantifier des niveaux de protéine pendant la morphogénèse/pathogénie craniofacial par immunostaining utilisant des tissus craniofacial de souris comme exemples. En outre, nous décrivons une méthode pour la préparation et la cryosectioning des tissus durs non décalcifiés des jeunes souris pour immunostaining.

Préparation des tissus et immunostaining des tissus craniofacial de souris et de l'os non décalcifié

Ce manuscrit décrit un protocole expérimental pour évaluer les caractéristiques morphologiques et l'état fonctionnel des synapses de ruban chez les souris normales. Le modèle actuel convient également aux modèles à synaptopathie cochléaire induits par le bruit et liés à l'âge. Les résultats corrélatifs des études précédentes de souris sont également discutés.

Évaluation morphologique et fonctionnelle des synapses de ruban aux régions spécifiques de fréquence de la Cochlea de souris

Cet article présente une méthode modifiée de préparation de surface cochléaire qui exige la décalcification et l'utilisation d'un adhésif de cellules et de tissu pour adhérer aux morceaux d'épithélium cochléaire aux feuillets ronds de couverture de 10 mm pour l'immunohistochimie dans les cochléées adultes de souris.

Préparation de surface cochléaire dans la souris adulte

Cette étude décrit comment disséquer le sac endolymphatique de l’oreille interne de la souris à différents âges. Le résultat d’une dissection similaire est montré dans un modèle murin Slc26a4-null d’élargissement du sac endolymphatique. Une souris transgénique avec un rapporteur fluorescent exprimé dans le sac endolymphatique est présentée comme un modèle permettant de visualiser facilement le sac endolymphatique, et un outil éducatif.

Dissection du sac endolymphatique de souris

Ici, nous présentons un protocole pour un modèle murin de perte auditive induite par le bruit (NIHL). Pour induire le NIHL, nous avons développé un nouveau dispositif simple utilisant du plastique ondulé, une cage de piège à rats et un haut-parleur. La réponse auditive du tronc cérébral et l’imagerie par immunofluorescence ont été utilisées pour évaluer la fonction auditive et les dommages aux cellules ciliées externes, respectivement.

Conditions expérimentales modifiées pour la perte auditive induite par le bruit chez la souris et évaluation de la fonction auditive et des lésions des cellules ciliées externes

La strie vasculaire est vitale pour la génération du potentiel endocochléaire. Ici, nous présentons la dissection de la strie vasculaire de la souris adulte pour le séquençage mononucléaire ou l’immunomarquage.

Dissection de la strie vasculaire de souris adulte pour le séquençage mononucléaire ou l’immunomarquage

Un protocole pour la préparation de cryocoupes rétiniennes de souris et la réalisation d’immunomarquage sur les photorécepteurs est décrit. Cet article permet aux chercheurs de produire de manière cohérente des coupes rétiniennes congelées de souris avec une morphologie bien préservée et des résultats d’immunomarquage de haute qualité.

Cryosectionnement et immunomarquage de la rétine de souris

Apprenez le cryosectionnement et l'immunomarquage du tissu de l'oreille interne de souris, du stade embryonnaire à l'adulte. Cette méthode guide les chercheurs débutants en sciences auditives vers des résultats fiables.

Cryosectionnement et immunomarquage du tissu de l’oreille interne de souris : du stade embryonnaire au stade adulte

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