Name: Inoculation intradermique de Mycobacterium avium dans l’oreille de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: Découvrez l'inoculation intradermique de Mycobacterium avium dans l'oreille de souris pour modéliser les infections par mycobactéries non tuberculeuses. Cette méthode permet d'étudier les réponses immunitaires in vivo de manière reproductible et contrôlée.

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<ol><li>Abdelaal, H. F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+It%27s+Complex%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: It's Complex.</a> Microorganisms. 10 (7), (2022).</li>
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<li>Dutt, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+exposure+to+non-tuberculous+mycobacteria+elicits+B+cell-mediated+immunity+against+pulmonary+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Mucosal exposure to non-tuberculous mycobacteria elicits B cell-mediated immunity against pulmonary tuberculosis.</a> Cell Rep. 41 (11), 111783(2022).</li>
<li>Kupz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+of+Latent+Tuberculosis+Infection+to+Study+Intervention+Strategies+to+Prevent+Reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model of Latent Tuberculosis Infection to Study Intervention Strategies to Prevent Reactivation.</a> PLoS One. 11 (7), e0158849(2016).</li>
<li>Reece, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+protease+activity+contributes+to+control+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+hypoxic+lung+granulomas+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Serine protease activity contributes to control of Mycobacterium tuberculosis in hypoxic lung granulomas in mice.</a> J Clin Invest. 120 (9), 3365-3376 (2010).</li>
<li>Nemeth, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contained+Mycobacterium+tuberculosis+infection+induces+concomitant+and+heterologous+protection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Contained Mycobacterium tuberculosis infection induces concomitant and heterologous protection.</a> PLoS Pathogens. 16 (7), e1008655(2020).</li>
<li>Jarchow-MacDonald, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+Incidence+and+Characteristics+of+Nontuberculous+Mycobacterial+Infections+in+Scotland+and+Comparison+With+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+Incidence+%282011+to+2019%29%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Forum+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Changing Incidence and Characteristics of Nontuberculous Mycobacterial Infections in Scotland and Comparison With Mycobacterium tuberculosis Complex Incidence (2011 to 2019).</a> Open Forum Infect Dis. 10 (1), ofac665(2023).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0.05 % Tween80</td><td>Sigma</td><td>P6224</td><td></td></tr><tr><td>Seringue 1mL</td><td>Fisher</td><td>15-823-434</td><td></td></tr><tr><td>7H10 gélose triplaques</td><td>Moltox</td><td>21-40S234</td><td></td></tr><tr><td>26G aiguille émoussée</td><td>Fisher</td><td>NC0981254</td><td></td></tr><tr><td>Armoire de biosécurité</td><td>Nuaire</td><td>NU-543-400</td><td></td></tr><tr><td>CO2 incubateur</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-103-0513</td><td></td></tr><tr><td>Ruban adhésif double face</td><td>Scotch</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton 701N seringue d’un microlitre</td><td>Fisher</td><td>14-824-16</td><td></td></tr><tr><td>Omni tips en tissus durs</td><td>Fisher</td><td>15-340-102</td><td></td></tr><tr><td>Coussin chauffant</td><td>Kent Scientific</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille à insuline</td><td>Fisher</td><td>NC1551333</td><td></td></tr><tr><td>Kétamine</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-890-8598</td><td></td></tr><tr><td>Loupe lumineuse</td><td>Brightech</td><td>B07MMZ27QK</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher</td><td>10010072</td><td></td></tr><tr><td>Homogénéisateur de tissus</td><td>Omni</td><td>TH115</td><td></td></tr><tr><td>Support d’homogénéisateur de tissus</td><td>Omni</td><td>S1000</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-808-1947</td><td></td></tr></tbody></table>

inoculation intradermique de mycobacterium avium dans l’oreille de souris

Intradermal Inoculation of Mycobacterium avium in the Mouse Ear

Nous avons utilisé le protocole détaillé ci-dessus pour déterminer si un modèle de provocation MNT reproductible utilisant le derme de l’oreille comme voie d’infection ou d’exposition pouvait être établi. Les oreilles ont été prélevées sur deux animaux à 28 jours après la provocation, homogénéisées et plaquées comme décrit sur le milieu sélectif des mycobactéries 7H10. Nous avons observé que M. avium persistait jusqu’à 28 jours dans les oreilles qui étaient sollicitées par voie intradermique et une absence de M. avium dans l’oreille non contestée (Figure 2).
Bien que nous n’ayons pas observé de dissémination vers l’oreille non contestée dans les 28 jours suivant l’infection, d’autres utilisateurs de ce modèle de derme de l’oreille pour la modélisation de la tuberculose latente ont observé une dissémination vers d’autres sites d’organes distaux14. Nous avons émis l’hypothèse qu’une dose plus faible de provocation et l’utilisation d’isolat de M. avium pourraient réduire la dissémination à des moments ultérieurs qui pourraient mieux refléter l’exposition par rapport à l’infection chronique. Par conséquent, l’euthanasie a été pratiquée sur des cohortes de souris n=5 ayant été proutées par M. avium 28, 56, 90 et 132 jours après l’infection. Les organes suivants ont été homogénéisés selon le même protocole que celui décrit pour les tissus de l’oreille : poumon, rate, ganglion lymphatique drainant (DLN) et cerveau. Cette voie de provocation a entraîné une dissémination sporadique au fil du temps, où moins de la moitié des animaux présentaient des UFC dénombrables dans les organes analysés 56 ou 90 jours après l’infection (tableau 1). 132 jours après la provocation, toutes les souris avaient des bactéries M . avium détectables dans leur rate (n = 5/5 des animaux évalués), mais semblaient héberger des bactéries minimes (n = 1/5 dans le DLN) ou aucune bactérie (n = 0/5 dans les poumons ou le cerveau) dans d’autres organes à ce moment-là (tableau 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig1.jpg"> 
Figure 1 : Orientation d’une aiguille avec le biseau vers le haut. Avant l’insertion de l’aiguille, le côté biseauté doit être orienté vers le haut pour administrer correctement l’inoculum. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig1large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig2.jpg"> 
Figure 2 : Colonisation du tissu de l’oreille par M. avium 28 jours après la provocation. Des souris femelles C57BL/6 ont été testées dans l’oreille avec 102 UFC de Mycobacterium avium. L’oreille déficiente (+) a été comparée à l’oreille non défiée (-) à 28 jours, n = 2 animaux individuels d’une seule expérience montrée, chaque animal portant une couleur et un symbole différents. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig2large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Heure (jour)</td>
			<td colspan="4">OrgueLog 10 CFU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poumon</td>
			<td>Rate</td>
			<td>RAD</td>
			<td>Cerveau</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28</td>
			<td>3.08, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>2.81, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0,78, 0,90, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>56</td>
			<td>2.30, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1.53, 3.43, ND, ND, ND</td>
			<td>2.78, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>1.20, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0,60, 3,35, 3,26, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0,60, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>132</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>4.03, 3.58, 3.58, 4.03, 3.69</td>
			<td>2.41, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="5">DLN = ganglion lymphatique drainant, ND = non détecté</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 1 : Dissémination de M. avium à partir de l’oreille au fil du temps après la provocation. Les poumons, la rate, les ganglions lymphatiques drainants (DLN) et le cerveau ont été prélevés sur n = 5 souris par point de provocation post-test. Les tissus homogénéisés ont été plaqués et évalués pour la croissance bactérienne. Les UFC pour les organes se présentaient sous forme de valeurs transformées en log10 où les bactéries ont été comptées et non détectées (ND) où aucune UFC n’a été observée à aucune plaque de concentration. Données sur l’évolution temporelle représentatives d’une expérience.

Inoculation intradermique de Mycobacterium avium dans l’oreille de souris

In contrast to natural nontuberculous mycobacterial (NTM) exposures or infections whose pathology is founded on a slow-replicating organism, the aerosol ...

intradermal-inoculation-of-mycobacterium-avium-in-the-mouse-ear

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JoVE Journal

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