Name: Séparation et fractionnement des protéines de filtrat de culture (CFP) de Mycobacterium tuberculosis (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T12:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Découvrez la séparation des protéines de filtrat de culture de Mycobacterium tuberculosis par électrophorèse. Cette méthode permet d'identifier les fractions immunogènes pour le développement de diagnostics et vaccins améliorés.

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<ol><li>Gomez, M., Johnson, S., Gennaro, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+secreted+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis+by+a+bioinformatic+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Identification of secreted proteins of Mycobacterium tuberculosis by a bioinformatic approach.</a> Infect Immun. 68 (4), 2323-2327 (2000).</li>
<li>de Souza, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-accuracy+mass+spectrometry+analysis+as+a+tool+to+verify+and+improve+gene+annotation+using+Mycobacterium+tuberculosis+as+an+example%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">High-accuracy mass spectrometry analysis as a tool to verify and improve gene annotation using Mycobacterium tuberculosis as an example.</a> BMC Genomics. 9, 316(2008).</li>
<li>Lim, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+new+T-cell-stimulating+antigens+from+Mycobacterium+tuberculosis+culture+filtrate%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol+Lett%22%5BJournal%5D)">Identification of the new T-cell-stimulating antigens from Mycobacterium tuberculosis culture filtrate.</a> FEMS Microbiol Lett. 232 (1), 51-59 (2004).</li>
<li>Covert, B. A., Spencer, J. S., Orme, I. M., Belisle, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+proteomics+in+defining+the+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">The application of proteomics in defining the T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Proteomics. 1 (5), 574-586 (2001).</li>
<li>Tucci, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+proteomic+and+glycoproteomic+profiling+of+Mycobacterium+tuberculosis+culture+filtrate%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Integrative proteomic and glycoproteomic profiling of Mycobacterium tuberculosis culture filtrate.</a> PLoS One. 15 (3), e0221837(2020).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoproteomic+identification+of+human+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis+that+differentiate+healthy+contacts+from+tuberculosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Immunoproteomic identification of human T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis that differentiate healthy contacts from tuberculosis patients.</a> Mol Cell Proteomics. 9 (3), 538-549 (2010).</li>
<li>Yasuda, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+cytokine+profiles+related+to+Mycobacterium+tuberculosis+latent+antigens+using+a+whole-blood+assay+in+the+Philippines%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of cytokine profiles related to Mycobacterium tuberculosis latent antigens using a whole-blood assay in the Philippines.</a> Front Immunol. 15, 1330796(2024).</li>
<li>Målen, H., Søfteland, T., Wiker, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+analysis+of+Mycobacterium+tuberculosis+H37Rv+culture+filtrate+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antigen analysis of Mycobacterium tuberculosis H37Rv culture filtrate proteins.</a> Scand J Immunol. 67 (3), 245-252 (2008).</li>
<li>Bekmurzayeva, A., Sypabekova, M., Kanayeva, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuberculosis+diagnosis+using+immunodominant%2C+secreted+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Tuberculosis diagnosis using immunodominant, secreted antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Tuberculosis (Edinb). 93 (4), 381-388 (2013).</li>
<li>Rodríguez-Hernández, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+antigenic+biomarkers+for+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Zhejiang+Univ+Sci+B%22%5BJournal%5D)">Application of antigenic biomarkers for Mycobacterium tuberculosis.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 21 (11), 856-870 (2020).</li>
<li>Mustafa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+biological+characterization+of+Mycobacterium+tuberculosis-specific+ESAT6-like+proteins+and+their+potentials+in+the+prevention+of+tuberculosis+and+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Princ+Pract%22%5BJournal%5D)">Chemical and biological characterization of Mycobacterium tuberculosis-specific ESAT6-like proteins and their potentials in the prevention of tuberculosis and asthma.</a> Med Princ Pract. 32 (4-5), 217-224 (2023).</li>
<li>Rosenkrands, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+the+proteome+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Towards the proteome of Mycobacterium tuberculosis.</a> Electrophoresis. 21 (17), 3740-3756 (2000).</li>
<li>Jungblut, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+proteome+analysis+of+Mycobacterium+tuberculosis+and+Mycobacterium+bovis+BCG+strains%3A+Towards+functional+genomics+of+microbial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative proteome analysis of Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis BCG strains: Towards functional genomics of microbial pathogens.</a> Mol Microbiol. 33 (6), 1103-1117 (1999).</li>
<li>Lim, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+new+T-cell-stimulating+antigens+from+Mycobacterium+tuberculosis+culture+filtrate%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol+Lett%22%5BJournal%5D)">Identification of the new T-cell-stimulating antigens from Mycobacterium tuberculosis culture filtrate.</a> FEMS Microbiol Lett. 232 (1), 51-59 (2004).</li>
<li>Rodríguez-Hernández, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+antigenic+biomarkers+for+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Zhejiang+Univ+Sci+B%22%5BJournal%5D)">Application of antigenic biomarkers for Mycobacterium tuberculosis.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 21 (11), 856-870 (2020).</li>
<li>Deenadayalan, A., Sundaramurthi, J. C., Raja, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+and+proteomic+analysis+of+preparative+isoelectric-focusing+separated+culture+filtrate+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological and proteomic analysis of preparative isoelectric-focusing separated culture filtrate antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Exp Mol Pathol. 88 (1), 156-162 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>&Auml ; Système de filtration à flux tangentiel KTA&nbsp ;</td><td>CYTIVA</td><td>29038437</td><td></td></tr><tr><td>Ampholytes (pH 3,0 à 10,0 )</td><td>BIO-RAD</td><td>1632094</td><td></td></tr><tr><td>Ampholytes (pH 4,0 à 6,0 )</td><td>BIO-RAD</td><td>1631143</td><td></td></tr><tr><td>Dosage des protéines BCA&nbsp ;</td><td>MERCK</td><td>71285-M</td><td></td></tr><tr><td>CASQUETTES</td><td>MERCK</td><td>Réf. C2632</td><td></td></tr><tr><td>Hydrolysat de caséine</td><td>MERCK</td><td>65072-00-6</td><td></td></tr><tr><td>Acide citrique</td><td>MERCK</td><td>C0759</td><td></td></tr><tr><td>Digitonine</td><td>MERCK</td><td>300410</td><td></td></tr><tr><td>La TNT</td><td>MERCK</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate d’ammonium ferrique</td><td>HIMEDIA</td><td>GRM10944</td><td></td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>MERCK</td><td>Référence G5516</td><td></td></tr><tr><td>Glycérol&nbsp ;</td><td>MERCK</td><td>252859</td><td></td></tr><tr><td>Lowenstein-Jensen slants&nbsp ;</td><td>HIMEDIA</td><td>Réf. SL001</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate de magnésium</td><td>MERCK</td><td>Référence M7506</td><td></td></tr><tr><td>Système de filtration sous vide à dégagement rapide Millipore Stericup</td><td>MERCK</td><td>S2HVU11RE</td><td></td></tr><tr><td>Acide phosphorique&nbsp ;</td><td>MERCK</td><td>695017</td><td></td></tr><tr><td>Dihydrogénophosphate de potassium</td><td>MERCK</td><td>Réf. P0662</td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de potassium</td><td>MERCK</td><td>484016</td><td></td></tr><tr><td>Cellule préparative IEF (Rotofor)&nbsp ;</td><td>BIO-RAD</td><td>170-2986&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Azoture de sodium&nbsp ;</td><td>MERCK</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Glutamate de sodium</td><td>MERCK</td><td>49621</td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de sodium</td><td>HIMEDIA</td><td>Référence MB095</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>MERCK</td><td>252859</td><td></td></tr><tr><td>Urée</td><td>MERCK</td><td>Référence U5128</td><td></td></tr><tr><td>Appareil à éluter en gel entier&nbsp ;</td><td>BIO-RAD</td><td>1651250</td><td></td></tr></tbody></table>

séparation et fractionnement des protéines de filtrat de culture (cfp) de mycobacterium tuberculosis

Separation and Fractionation of Culture Filtrate Proteins (CFPs) from Mycobacterium tuberculosis

La figure 1 illustre la complexité des protéines de filtrat de culture (CFP) préparées. Initialement, 100 μg de CFP ont été soumis à une analyse 2D-SDS PAGE pour évaluer sa complexité. Cette analyse a révélé la présence de près de 100 taches protéiques distinctes dans la CFP (Figure 1).
Les 20 fractions collectées lors de chaque passage ont été analysées par SDS-PAGE. Parmi celles-ci, trois fractions représentatives de trois séries di...

Séparation et fractionnement des protéines de filtrat de culture (CFP) de Mycobacterium tuberculosis

Secreted proteins of Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) play a crucial role in tuberculosis pathogenesis, immune modulation, and disease ...

separation-fractionation-culture-filtrate-proteins-cfps-from

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Source : Gupta, S., Marcela Rodriguez, G. Isolement et caractérisation des vésicules extracellulaires produites par des mycobactéries limitées en fer. J. Vis. Exp. (2019)Cette vidéo démontre l’isolement par étapes de vésicules extracellulaires (VE) de Mycobacterium tuberculosis cultivées dans des conditions limitant le fer qui imitent l’environnement de l’hôte. Il décrit l’utilisation de l’ultrafiltration, de la centrifugation différentielle et de la séparation par gradient de densité pour...

Isolement de vésicules extracellulaires contenant des sidérophores de Mycobacterium tuberculosis

Cette vidéo montre la séparation des acides mycoliques par chromatographie sur couche mince. Cette technique sépare les différents acides mycoliques – des lipides à longue chaîne présents dans la paroi cellulaire des mycobactéries – en fonction de leur polarité.

Séparation par chromatographie sur couche mince de variants d’acide mycolique : une méthode pour séparer les lipides de la paroi cellulaire mycobactérienne en fonction de la polarité

Cette vidéo montre l’isolement et la concentration de protéines de filtrat de culture bactérienne, qui comprennent des vésicules extracellulaires bactériennes, à l’aide de l’ultrafiltration. Les vésicules extracellulaires concentrées servent de marqueurs diagnostiques pour la détection des maladies.

Concentration de protéines de filtrat de culture bactérienne à l’aide d’un dispositif d’ultrafiltration

Cette vidéo montre la technique de chromatographie d’exclusion stérique (SEC) pour purifier les vésicules extracellulaires bactériennes (VE) du filtrat de culture de Mycobacterium tuberculosis (Mtb). La technique utilise une colonne poreuse remplie de résine pour obtenir des fractions purifiées de VE. Les particules poreuses permettent sélectivement aux protéines plus petites de pénétrer dans les pores, ce qui ralentit l’élution. Dans le même temps, les VE ne peuvent pas pénétrer dans les pores...

Une technique de chromatographie d’exclusion stérique pour purifier les vésicules extracellulaires mycobactériennes

L’objectif est de fractionner et d’isoler les petites molécules bioactives, les peptides d’un extrait de plante complexe et les protéines de microbes pathogènes en utilisant la méthode de mise au point isoélectrique (IEF) en phase liquide. En outre, les molécules séparées ont été identifiées et leur bioactivité confirmée.

Séparation des petites molécules bioactives, peptides des sources naturelles et des protéines des microbes par la méthode de mise au point isoélectrique préparative (IEF)

Une quantification rapide et efficace de la croissance intracellulaire de M. tuberculosis est cruciale pour poursuivre des thérapies améliorées contre la tuberculose (TB). Ce protocole décrit un test de détection colorimétrique à base de bouillon utilisant un système automatisé de culture liquide pour quantifier la croissance de Mtb dans les macrophages traités avec des thérapies candidates dirigées par l’hôte.

Système de culture automatisé destiné à être utilisé dans les essais précliniques de thérapies dirigées par l’hôte pour la tuberculose

Les bactéries sécrètent des vésicules extracellulaires (VE) de taille nanométrique transportant des molécules biologiques bioactives. La recherche sur les véhicules électriques se concentre sur la compréhension de leur biogenèse, de leur rôle dans les interactions microbes-microbes et hôte-microbe et des maladies, ainsi que de leurs applications thérapeutiques potentielles. Un flux de travail pour l’isolation évolutive des véhicules électriques de diverses bactéries est présenté pour faciliter...

Isolement et purification évolutifs de vésicules extracellulaires à partir d’Escherichia coli et d’autres bactéries

Ce protocole décrit la chromatographie d’exclusion de taille, une technique facile et reproductible pour enrichir les vésicules extracellulaires de Mycobacterium tuberculosis à partir de surnageants de culture.

Mycobacterium tuberculosis Enrichissement extracellulaire des vésicules par chromatographie d’exclusion de taille

Ce protocole détaille l’enrichissement des vésicules extracellulaires mycobactériennes natives (mEVs) à partir de cultures axéniques de Mycobacterium smegmatis (Msm) et comment les MsmEVs recombinants contenant mCherry (un rapporteur fluorescent rouge) peuvent être conçus et enrichis. Enfin, il vérifie la nouvelle approche avec l’enrichissement de MsmEVs contenant la protéine EsxA de Mycobacterium tuberculosis.

Enrichissement des vésicules extracellulaires natives et recombinantes de mycobactéries

Ici, nous démontrons la préparation du filtrat de culture Mtb (CF), qui est le milieu de croissance bactérienne composé de protéines sécrétées par les bactéries. Mtb sécrète des protéines pour moduler la signalisation de l’hôte et la réponse immunitaire, qui sont cruciales pour la pathogenèse. Les FC préparés sont analysés par spectrométrie de masse afin d’identifier tous les facteurs sécrétoires.

Préparation du filtrat de culture de Mycobacterium tuberculosis pour comprendre la pathogenèse de la tuberculose

Ce protocole sépare les protéines insolubles de la paroi cellulaire et de la membrane en fractions simples (1 à 5 protéines) à l’aide d’une focalisation isoélectrique préparative (IEF) basée sur un point isoélectrique, suivie d’une séparation en fonction de la masse moléculaire. Les fractions résultantes peuvent être utilisées directement pour l’analyse immunologique et protéomique sans purification supplémentaire.

Séparation et fractionnement de protéines de paroi cellulaire et de membrane cellulaire de Mycobacterium tuberculosis pour l’analyse des protéines en aval

Découvrez la séparation des protéines de filtrat de culture de Mycobacterium tuberculosis par électrophorèse. Cette méthode permet d'identifier les fractions immunogènes pour le développement de diagnostics et vaccins améliorés.

Séparation et fractionnement des protéines de filtrat de culture (CFP) de Mycobacterium tuberculosis

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