Name: Séparation et fractionnement de protéines de paroi cellulaire et de membrane cellulaire de Mycobacterium tuberculosis pour l’analyse des protéines en aval (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Découvrez une méthode de séparation des protéines insolubles de paroi et de membrane de Mycobacterium tuberculosis par focalisation isoélectrique préparative et séparation par poids moléculaire. Ces fractions simplifiées permettent des analyses protéomiques et immunologiques directes pour le développement de diagnostics de la tuberculose.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Seshadri, C., Turner, M. T., Lewinsohn, D. M., Moody, D. B., Van Rhijn, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoproteins+are+major+targets+of+the+polyclonal+human+T+cell+response+to+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lipoproteins are major targets of the polyclonal human T cell response to Mycobacterium tuberculosis.</a> J Immunol. 190 (1), 278-284 (2013).</li>
<li>Kunnath-Velayudhan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+antibody+responses+to+the+Mycobacterium+tuberculosis+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Dynamic antibody responses to the Mycobacterium tuberculosis proteome.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14703-14708 (2010).</li>
<li>Drage, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR2+and+its+co-receptors+determine+responses+of+macrophages+and+dendritic+cells+to+lipoproteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR2 and its co-receptors determine responses of macrophages and dendritic cells to lipoproteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Cell Immunol. 258 (1), 29-37 (2009).</li>
<li>Wallin, E., von Heijne, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+analysis+of+integral+membrane+proteins+from+eubacterial%2C+archaean%2C+and+eukaryotic+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Genome-wide analysis of integral membrane proteins from eubacterial, archaean, and eukaryotic organisms.</a> Protein Sci. 7, 1029-1038 (1998).</li>
<li>Almeida, J. G., Preto, A. J., Koukos, P. I., Bonvin, A. M. J. J., Moreira, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+proteins+structures%3A+A+review+on+computational+modeling+tools%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Biomembr%22%5BJournal%5D)">Membrane proteins structures: A review on computational modeling tools.</a> Biochim Biophys Acta Biomembr. 1859 (10), 2021-2039 (2017).</li>
<li>Finkelstein, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structures+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structures of membrane proteins.</a> Nature. 511 ((Suppl 7509)), 21(2014).</li>
<li>Smith, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+the+purification+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Strategies for the purification of membrane proteins.</a> Methods Mol Biol. 1485, 389-400 (2017).</li>
<li>Von Jagow, G., Link, T., Schager, H. Purification Strategies for Membrane Proteins. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVon+Jagow%2C+G+%22A+Practical+Guide+to+Membrane+Protein+Purification%22">A Practical Guide to Membrane Protein Purification</a>. , Academic Press. San Diego, CA. (1994).</li>
<li>Raja, A., Uma Devi, K. R., Ramalingam, B., Brennan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoglobulin+G%2C+A%2C+and+M+responses+in+serum+and+circulating+immune+complexes+elicited+by+the+16-kilodalton+antigen+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunoglobulin G, A, and M responses in serum and circulating immune complexes elicited by the 16-kilodalton antigen of Mycobacterium tuberculosis.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 9 (2), 308-312 (2002).</li>
<li>Covert, B. A., Spencer, J. S., Orme, I. M., Belisle, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+proteomics+in+defining+the+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">The application of proteomics in defining the T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Proteomics. 1 (4), 574-586 (2001).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoproteomic+identification+of+human+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis+that+differentiate+healthy+contacts+from+tuberculosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Immunoproteomic identification of human T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis that differentiate healthy contacts from tuberculosis patients.</a> Mol Cell Proteomics. 9 (3), 538-549 (2010).</li>
<li>Sinha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenic+membrane-associated+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis+revealed+by+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Immunogenic membrane-associated proteins of Mycobacterium tuberculosis revealed by proteomics.</a> Microbiology. 151 (7), 2411-2419 (2005).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Integrated+approach+for+proteomic+and+immunological+analysis+of+cell+wall+and+cell+membrane+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Res+Arch%22%5BJournal%5D)">An Integrated approach for proteomic and immunological analysis of cell wall and cell membrane proteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Med Res Arch. 11 (11), (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7H9 bouillon&nbsp ;</td><td>Himedia&nbsp ;</td><td>M198</td><td></td></tr><tr><td>40 % Bio-Lyte 3/10 Ampholyte&nbsp ;</td><td>BIO-RAD</td><td>1631113</td><td></td></tr><tr><td>Dosage des protéines BCA&nbsp ;</td><td>MERCK</td><td>BCA1</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Lyte 5/7 Ampholyte&nbsp ;</td><td>BIO-RAD</td><td>1631152</td><td></td></tr><tr><td>concentrateurs centrifuges 3 kDa</td><td>MERCK</td><td>Z629456</td><td></td></tr><tr><td>Digitonine.</td><td>MERCK</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>Dnase</td><td>MERCK</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>La TNT</td><td>MERCK</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>MERCK</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>MERCK</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>MERCK</td><td>Référence G5516</td><td></td></tr><tr><td>Leupeptine</td><td>MERCK</td><td>E18</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatine A</td><td>MERCK</td><td>P5318</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>MERCK</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>Rnase</td><td>MERCK</td><td>10109134001</td><td></td></tr><tr><td>Rotofor&nbsp ;</td><td>BIO-RAD</td><td>170-2986</td><td>&nbsp ; appareil de focalisation isoélectrique (IEF)</td></tr><tr><td>Sonicateur</td><td>Vibra-cell, Soniques</td><td>VC 750</td><td></td></tr><tr><td>TLCK</td><td>MERCK</td><td>Réf. T7254</td><td></td></tr><tr><td>TPCK</td><td>MERCK</td><td>4376</td><td></td></tr><tr><td>urée</td><td>MERCK</td><td>Référence U5378</td><td></td></tr><tr><td>Appareil à éluter en gel entier&nbsp ;</td><td>BIO-RAD</td><td>1651250</td><td></td></tr></tbody></table>

séparation et fractionnement de protéines de paroi cellulaire et de membrane cellulaire de mycobacterium tuberculosis pour l’analyse des protéines en aval

Separation and Fractionation of Cell Wall and Cell Membrane Proteins from Mycobacterium tuberculosis for Downstream Protein Analysis

Isolement des protéines de la paroi cellulaire et de la membrane cellulaire par ultracentrifugation à grande vitesse Les protéines de la paroi cellulaire et de la membrane ont été isolées à partir de lysats de cellules entières par ultracentrifugation, comme indiqué dans le protocole. L’analyse SDS-PAGE des profils protéiques séparés des fractions subcellulaires, de la paroi cellulaire, de la membrane cellulaire et du cytosol de M. tuberculosis est illustrée à la figure 1...

Séparation et fractionnement de protéines de paroi cellulaire et de membrane cellulaire de Mycobacterium tuberculosis pour l’analyse des protéines en aval

Mycobacterium cell wall and membrane proteins, which play a central role in tuberculosis pathogenesis, were successfully separated using preparative ...

separation-fractionation-cell-wall-cell-membrane-proteins-from

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Source : Gupta, S., Marcela Rodriguez, G. Isolement et caractérisation des vésicules extracellulaires produites par des mycobactéries limitées en fer. J. Vis. Exp. (2019)Cette vidéo démontre l’isolement par étapes de vésicules extracellulaires (VE) de Mycobacterium tuberculosis cultivées dans des conditions limitant le fer qui imitent l’environnement de l’hôte. Il décrit l’utilisation de l’ultrafiltration, de la centrifugation différentielle et de la séparation par gradient de densité pour...

Isolement de vésicules extracellulaires contenant des sidérophores de Mycobacterium tuberculosis

Cette vidéo montre la séparation des acides mycoliques par chromatographie sur couche mince. Cette technique sépare les différents acides mycoliques – des lipides à longue chaîne présents dans la paroi cellulaire des mycobactéries – en fonction de leur polarité.

Séparation par chromatographie sur couche mince de variants d’acide mycolique : une méthode pour séparer les lipides de la paroi cellulaire mycobactérienne en fonction de la polarité

Cette vidéo montre la technique de chromatographie d’exclusion stérique (SEC) pour purifier les vésicules extracellulaires bactériennes (VE) du filtrat de culture de Mycobacterium tuberculosis (Mtb). La technique utilise une colonne poreuse remplie de résine pour obtenir des fractions purifiées de VE. Les particules poreuses permettent sélectivement aux protéines plus petites de pénétrer dans les pores, ce qui ralentit l’élution. Dans le même temps, les VE ne peuvent pas pénétrer dans les pores...

Une technique de chromatographie d’exclusion stérique pour purifier les vésicules extracellulaires mycobactériennes

La paroi cellulaire bactérienne est composée de peptidoglycane, un réseau macromoléculaire de brins de sucre réticulés par des peptides. La chromatographie liquide ultra-performante offre une résolution et un débit élevés pour de nouvelles découvertes de composition de peptidoglycane. Nous présentons un procédé pour l’isolement des murs de cellules (sacculi) et leur préparation suivante pour l’analyse par l’intermédiaire d’UPLC.

Isolement et préparation de parois cellulaires bactériennes pour l’analyse de composition par chromatographie liquide ultra-performante

Les bactéries gram-négatives produisent deux membranes spatialement séparées. La membrane externe est divisée de la membrane interne par un périplasme et une couche peptidoglycan. La capacité d’isoler les bilayers doubles de ces microbes a été critique pour comprendre leur physiologie et leur pathogénie.

Séparation de l’enveloppe cellulaire pour les bactéries Gram-négatives dans les fractions de membrane intérieure et extérieure avec des ajustements techniques pour Acinetobacter baumannii

Un protocole est présenté pour extraire la teneur totale en lipides de la paroi cellulaire d’un large éventail de mycobactéries. De plus, les protocoles d’extraction et d’analyse des différents types d’acides mycoliques sont présentés. Un protocole chromatographique sur couche mince pour surveiller ces composés mycobactériens est également fourni.

Analyse de la composition lipidique des mycobactéries par chromatographie sur couche mince

Les vésicules bactériennes jouent un rôle important dans la pathogenèse et ont des applications biotechnologiques prometteuses. L’hétérogénéité des vésicules complique l’analyse et l’utilisation; par conséquent, une méthode simple et reproductible pour séparer les différentes tailles de vésicules est nécessaire. Ici, nous démontrons l’utilisation de la chromatographie d’exclusion de taille pour séparer les vésicules hétérogènes produites par Aggregatibacter actinomycetemcomitans.

Chromatographie d’exclusion de taille pour analyser l’hétérogénéité des vésicules de la membrane externe bactérienne

Ce protocole décrit la chromatographie d’exclusion de taille, une technique facile et reproductible pour enrichir les vésicules extracellulaires de Mycobacterium tuberculosis à partir de surnageants de culture.

Mycobacterium tuberculosis Enrichissement extracellulaire des vésicules par chromatographie d’exclusion de taille

Ce protocole détaille l’enrichissement des vésicules extracellulaires mycobactériennes natives (mEVs) à partir de cultures axéniques de Mycobacterium smegmatis (Msm) et comment les MsmEVs recombinants contenant mCherry (un rapporteur fluorescent rouge) peuvent être conçus et enrichis. Enfin, il vérifie la nouvelle approche avec l’enrichissement de MsmEVs contenant la protéine EsxA de Mycobacterium tuberculosis.

Enrichissement des vésicules extracellulaires natives et recombinantes de mycobactéries

Bien que les procaryotes n’aient pas de système organellar, il existe des régions subcellulaires avec des protéines localisées. L’analyse quantitative et qualitative des enzymes et des protéines dans les régions subcellulaires est importante pour le développement de cibles médicamenteuses et vaccinales. Ici, nous illustrons le fractionnement subcellulaire des protéines Leptospirales à l’aide de Triton X-114 et son analyse.

Enrichissement des protéines subcellulaires chez Leptospira à l’aide d’une approche de fractionnement basée sur le Triton X-114

Ce protocole décrit la culture, la récolte et la concentration des protéines sécrétées par Mycobacterium tuberculosis. Les protéines de filtrat de culture (CFP) sont quantifiées, séparées en 20 fractions par focalisation isoélectrique, puis résolues en 30 fractions à l’aide d’un SDS-PAGE préparatif et d’un système d’électroélution.

Séparation et fractionnement des protéines de filtrat de culture (CFP) de Mycobacterium tuberculosis

Découvrez une méthode de séparation des protéines insolubles de paroi et de membrane de Mycobacterium tuberculosis par focalisation isoélectrique préparative et séparation par poids moléculaire. Ces fractions simplifiées permettent des analyses protéomiques et immunologiques directes pour le développement de diagnostics de la tuberculose.

Séparation et fractionnement de protéines de paroi cellulaire et de membrane cellulaire de Mycobacterium tuberculosis pour l’analyse des protéines en aval (Vidéo) | JoVE Journal

Séparation et fractionnement de protéines de paroi cellulaire et de membrane cellulaire de Mycobacterium tuberculosis pour l’analyse des protéines en aval

Explorer plus de vidéos