Name: Administration efficace et sûre de gènes dans le rein de souris par injection rétrograde lente de vecteurs viraux adéno-associés (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Découvrez une méthode d'injection rétrograde lente dans le pelvis rénal pour délivrer efficacement des gènes aux tubules proximaux du rein de souris sans dommage tissulaire. Cette approche utilise des vecteurs AAV et s'applique à la recherche en néphrologie et à la thérapie génique.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>0.45 &mu;m PVDF syringe filter</td><td>MilliporeSigma</td><td>SLHVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL microcentrifuge tube&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>15 mL polypropylene tube</td><td>Corning</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>16% paraformaldehyde (PFA)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>250 mL centrifuge bottle</td><td>Fisher Scientific</td><td>055641S24</td><td></td></tr><tr><td>2F Silicone tubing</td><td>Sai Infusion Technologies</td><td>SIL-2-50&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>25G butterfly needle</td><td>Medex Supply</td><td>26708</td><td></td></tr><tr><td>2-methylbutane</td><td>MilliporeSigma</td><td>MX0760</td><td></td></tr><tr><td>2x qPCR reaction buffer</td><td>Fisher Scientific</td><td>43-676-59</td><td>Power SYBR Green PCR Master Mix</td></tr><tr><td>30G needle</td><td>Becton-Dickinson &amp; Co</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>50 mL polypropylene tube</td><td>Corning</td><td>430291</td><td></td></tr><tr><td>5-0 monofilament suture</td><td>Ethicon</td><td>Y463G</td><td></td></tr><tr><td>5 M NaCl</td><td>Lonza</td><td>51202</td><td></td></tr><tr><td>6-0 absorbable suture</td><td>Ethicon</td><td>J489G</td><td></td></tr><tr><td>7.5% Mini-PROTEAN TGX Precast Protein Gels, 10-well, 30 &micro;L</td><td>Bio-Rad</td><td>4561023</td><td></td></tr><tr><td>Amersham ImageQuant 800 Western Blot Imaging System (Cytiva)</td><td>Cytiva</td><td>29459405</td><td></td></tr><tr><td>Amicon 100 kDa MWCO, 15 mL tube</td><td>Millipore Sigma</td><td>UFC910024</td><td></td></tr><tr><td>Anti-aquaporin 2 (AQP2) antibody</td><td>Abcam</td><td>ab199975</td><td>A marker for collecting duct cells</td></tr><tr><td>Anti-Na-K-2Cl cotransporter 2 (NKCC2) antibody</td><td>StressMarq Biosciences</td><td>SPC-401</td><td>A marker for thick ascending limb cells</td></tr><tr><td>Anti-rabbit IgG Alexa Fluor 647 antibody</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>111-605-144</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Wilms Tumor 1 (WT1) antibody</td><td>Abcam</td><td>ab89901</td><td>A marker for podocytes</td></tr><tr><td>Beckman Coulter OptiSeal Tube, Polypropylene, 29.9 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9691210</td><td></td></tr><tr><td>Beckman Coulter OPTISEAL TUBES</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9611575</td><td></td></tr><tr><td>Benzonase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1016970001</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5470</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugal ultrafiltration tube</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC9100</td><td>Amicon 100 kDa MWCO, 15 mL</td></tr><tr><td>Ceramic bead tube</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-340-154</td><td></td></tr><tr><td>Cesium chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3032-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Clamp applying forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>00071-14</td><td></td></tr><tr><td>Closed-loop heat pad</td><td>Stryker Medical</td><td>8002-062-012</td><td></td></tr><tr><td>Cotton-tipped applicator</td><td>Puritan</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>Cover glass</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541B</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat microtome</td><td>Tanner Scientific</td><td>TN50</td><td></td></tr><tr><td>Curved forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Curved-type micro vessel clip</td><td>Kleinert-Kutz</td><td>65145</td><td>Clamp for the renal artery and renal vein</td></tr><tr><td>Dialysis cassette</td><td>Fisher Scientific</td><td>PIA52976</td><td></td></tr><tr><td>DNA extraction kit</td><td>Qiagen</td><td>57704</td><td>QIAamp MinElute Virus Spin Kit</td></tr><tr><td>D-Sorbitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6021-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium- high glucose</td><td>Corning</td><td>15-013-CV</td><td>DMEM-high glucose (4.5 g/L)</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-575-020</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>2716GEA</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum (FBS)</td><td>VWR</td><td>89510-186</td><td></td></tr><tr><td>Gas-tight glass syringe</td><td>Hamilton</td><td>1710 TLL</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyde solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6257</td><td></td></tr><tr><td>Heat therapy pump</td><td>Kent Scientific</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H4034-100G</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Invitrogen</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>Homogenizer</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-340-163</td><td></td></tr><tr><td>Human embryonic kidney (HEK) 293 cells</td><td>Agilent</td><td>240073</td><td></td></tr><tr><td>Ice bucket</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-210-104</td><td></td></tr><tr><td>Infusion syringe pump</td><td>Harvard Apparatus</td><td>70-4507</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Critical Care</td><td>NDC 66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Fisher Scientific</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Liquid blocker pen</td><td>Ted Pella</td><td>22309</td><td></td></tr><tr><td>Lotus tetragonolobus lectin (LTL)- Fluorescein</td><td>Vector Laboratories</td><td>FL-1321-2</td><td>A marker for proximal tubules</td></tr><tr><td>Magnesium chloride (MgCl2)</td><td>MilliporeSigma</td><td>M1028</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>VetOne</td><td>NDC 86136-012-10</td><td>Analgesic</td></tr><tr><td>Microscope glass slide</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Mounting medium</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12501-13</td><td></td></tr><tr><td>OCT compound</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Ophthalmic ointment</td><td>Bausch &amp; Lomb</td><td>NDC 24208-313-34</td><td></td></tr><tr><td>PE-10 polyethylene tube</td><td>BD</td><td>427401</td><td>Inner diameter: 0.28 mm</td></tr><tr><td>Penicillin &amp; Streptomycin Mix</td><td>Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10010-049</td><td></td></tr><tr><td>Plastic cryomold</td><td>Sakura Finetek</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td>Poloxamer 188 Non-ionic Surfactant (10%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>24-040-032</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylene Glycol 800

administration efficace et sûre de gènes dans le rein de souris par injection rétrograde lente de vecteurs viraux adéno-associés

Effective and Safe Gene Delivery to the Mouse Kidney via Slow Retrograde Renal Pelvis Injection of Adeno-Associated Virus Vectors

Administration efficace et sûre de gènes dans le rein de souris par injection rétrograde lente de vecteurs viraux adéno-associés

The development of effective in vivo tools and methods for gene delivery to the kidney is crucial for advancing basic kidney research and gene therapy for ...

effective-safe-gene-delivery-to-mouse-kidney-via-slow-retrograde

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dans cette vidéo, nous démontrons l’administration de gènes basés sur le virus associé à l’adéno-adéno-recombinant chez le petit de souris. Cette méthode aide à étudier l’expression des gènes dans les cellules ciblées.

Administration de gènes basée sur un virus adénologique recombinant : une technique de livraison de transgènes et d’expression spécifique au cancer dans un modèle de rongeur

Source :Pourshafie, N., et al. Administration systémique de microARN à l’aide d’un virus adéno-associé recombinant de sérotype 9 pour traiter les maladies neuromusculaires chez les rongeurs. J. Vis. Exp. (2018).Dans cette vidéo, une souris atteinte d’amyotrophie spinale et bulbaire ou atteinte de SBMA subit une injection dans la veine de la queue de vecteurs AAV (vecteurs adéno-associés) recombinants porteurs d’un plasmide codant pour un microARN thérapeutique. Le vecteur produit des microARN...

Injection de vecteurs adéno-associés recombinants dans un modèle murin d’atrophie musculaire spinale et bulbaire

L'implantation de cellules cancéreuses dans l'organe d'origine peut servir de modèle préclinique utile pour évaluer de nouvelles thérapies. Des cellules de carcinome de la vessie MB49 peuvent être cultivées à l'intérieur de la vessie après l'instillation intravésicale. Ce protocole illustre le cathétérisme de la vessie de la souris dans le but d'implantation de la tumeur et la livraison adénoviral.

Un modèle de cancer de la vessie orthotopique d&#39;études livraison Gene

L’approche chirurgicale post-auriculaire décrite permet une administration rapide et directe dans la rampe tympanique cochléaire de souris tout en minimisant la perte de sang et la mortalité animale. Cette méthode peut être utilisée pour la thérapie cochléaire en utilisant l’administration moléculaire, pharmacologique et virale à des souris postnatales à travers la membrane de la fenêtre ronde.

Méthode chirurgicale pour Virally Mediated Gene livraison à l&#39;oreille de la souris intérieure à travers la membrane de fenêtre ronde

Dans ce manuscrit, une méthode de préparation de vecteurs recombinants du virus adéno-associé 9 (rAAV9) pour manipuler l’expression génique dans le cœur de souris est décrite.

Préparation de rAAV9 à surexpriment ou Knockdown gènes dans les coeurs de souris

Nous décrivons ici la livraison des micro-ARN, à l’aide d’un sérotype de virus adeno-associé recombinant 9 dans un modèle murin d’une maladie neuromusculaire. Une seule administration périphérique chez les souris a entraîné surexpression de miRNA soutenue dans les muscles et les neurones moteurs, fournissant l’occasion de l’étude miRNA fonction et thérapeutiques potentiels in vivo.

Délivrance systémique des micro-ARN, à l’aide de Recombinant Adeno-associated Virus sérotype 9 pour traiter des maladies neuromusculaires chez les rongeurs

L'objectif de la présente étude était de développer et de valider la puissance et la sécurité de la délivrance de gènes médiés par le virus 9 associé à l'adéno-lésion spinale (AAV9) en utilisant une nouvelle technique de délivrance de gène subpial chez des souris adultes.

La livraison de vecteur 9 (AAV9) associée au virus Adeno-Associé Subpial (AAV9) chez les souris adultes

Ce protocole décrit une méthode pour injecter de l’ADN de plasmide dans le rein de souris via le bassinet pour produire l’expression du transgène spécifiquement dans le rein.

Injection hydrodynamique bassinet non-virale expression des protéines dans le rein

Nous décrivons une nouvelle méthode pour la livraison de plasmides d’ADN dans les cellules urothéliales de souris la vessie in vivo par cathétérisme de l’urètre et électroporation. Il offre un moyen rapide et pratique pour générer des modèles autochtones murins de maladies de la vessie.

Nouvelle méthode de livraison ADN plasmidique aux souris vessie urothélium par électroporation

Nous détaillons ici un protocole optimisé pour l’injection latérale de la veine caudale chez la souris afin d’administrer systématiquement le virus adéno-associé (AAV) chez les souris adultes. De plus, nous décrivons les protocoles des tests couramment utilisés pour évaluer la transduction des AAV.

Administration constante du virus adéno-associé par injection latérale dans la veine caudale chez des souris adultes

Ce protocole décrit comment l’injection intrasplénique de petits ARN en épingle à cheveux délivrés par AAV8 atteint la même efficacité d’inactivation génique dans le foie que l’injection dans la veine porte, représentant une procédure plus simple avec une mortalité et des complications périopératoires et postopératoires beaucoup plus faibles.

Inactivation efficace d’un gène dans le foie par injection intrasplénique d’un petit ARN en épingle à cheveux délivré par le virus adéno-associé de sérotype 8 (AAV8)

Découvrez une méthode d'injection rétrograde lente dans le pelvis rénal pour délivrer efficacement des gènes aux tubules proximaux du rein de souris sans dommage tissulaire. Cette approche utilise des vecteurs AAV et s'applique à la recherche en néphrologie et à la thérapie génique.

Administration efficace et sûre de gènes dans le rein de souris par injection rétrograde lente de vecteurs viraux adéno-associés (Vidéo) | JoVE Journal

Administration efficace et sûre de gènes dans le rein de souris par injection rétrograde lente de vecteurs viraux adéno-associés

Explorer plus de vidéos