Méthodologie améliorée pour l’étude de l’ostéogenèse postnatale par ossification intramembraneuse dans un modèle de lésion de la moelle osseuse murine

Notre recherche est axée sur la compréhension des mécanismes de réparation osseuse à l’aide du modèle de lésion de la moelle osseuse. Notre objectif est de découvrir comment l’ossification intramembraneuse est régulée pendant la cicatrisation et d’explorer des approches thérapeutiques qui peuvent être exploitées pour améliorer la régénération osseuse. Des études récentes dans le domaine ont établi des marqueurs de surface définissant les cellules souches squelettiques et progénitrices, révélant leur rôle essentiel dans le développement et la réparation des os.

Notre protocole permet d’étudier les contributions de ces cellules lors de l’ossification intramembraneuse, ce qui nous permet d’explorer leur régulation et leur potentiel de ciblage thérapeutique lors de la réparation osseuse. Notre protocole comble l’écart dans la compréhension de la réparation osseuse uniquement par ossification intramembraneuse dans un contexte postnatal, en utilisant un modèle cliniquement pertinent. Contrairement à d’autres modèles de lésions utilisés pour étudier l’ossification intramembraneuse, notre protocole fournit un environnement plus contrôlé et des réponses reproductibles aux blessures, en particulier dans les os longs.

À l’avenir, notre laboratoire utilisera le modèle de lésion de la moelle osseuse ainsi que des approches pharmacologiques localisées pour moduler transitoirement les régulateurs épigénétiques de l’ostéogenèse. Notre objectif est d’améliorer la régénération osseuse et la guérison grâce à de nouvelles approches thérapeutiques. Pour commencer, préparez et désinfectez toutes les surfaces de travail avec un nettoyant désinfectant de qualité clinique.

Couvrez la plate-forme chauffante avec un tampon chirurgical stérile. Rassemblez et disposez tous les instruments stériles ainsi que les réactifs. Maintenant, pesez la souris à l’aide d’une balance de précision.

Sur la base de la formulation disponible de buprénorphine, calculer le volume requis pour l’administration d’analgésiques. Après avoir anesthésié la souris, retirez-la délicatement de la chambre d’induction. Placez l’animal sur le coussin chirurgical stérile en position couchée et placez le cône nasal sur la tête de la souris.

Retirez brièvement la souris du cône nasal et injectez la dose calculée d’analgésique buprénorphine à libération prolongée par voie sous-cutanée. Ensuite, replacez soigneusement la souris dans l’unité d’anesthésie du cône nasal. Remplissez une seringue de trois millilitres équipée d’une aiguille de calibre 26 avec une solution saline stérile et placez-la sur le côté.

Retirez la fourrure du membre postérieur où la procédure sera effectuée à l’aide d’une tondeuse électrique ou à piles. À l’aide d’applicateurs stériles à embout de coton, appliquez un gommage à 10 % de povidone iodé sur le site chirurgical, suivi de l’application d’un gommage à l’alcool isopropylique à 70 % et laissez la zone sécher complètement. Placez maintenant la souris sur son dos et fléchissez le genou de la jambe opérationnelle.

Tenez la jambe avec la main non dominante de manière à ce que le genou soit plié sur le majeur. Le deuxième doigt repose sur le fémur et le pouce repose sur le tibia. À l’aide d’un scalpel, faites une petite incision horizontale peu profonde juste en dessous de la rotule.

Localisez l’espace articulaire avec l’aiguille placée horizontalement sur le genou plié et sentez l’espace entre le fémur et le tibia. Utilisez ce guide anatomique pour percer manuellement le fémur distal du genou vers le côté proximal avec une aiguille de calibre 25. Insérez l’aiguille à travers ou autour de la rotule.

Confirmez le bon placement de l’aiguille dans la cavité médullaire à l’aide d’une radiographie, en vous assurant qu’elle est aussi proche que possible du centre. Après avoir retiré l’aiguille de calibre 25, insérez immédiatement une aiguille de calibre 26 dans le même trou à l’intérieur de la cavité de la moelle. Alésez les côtés de la cavité médullaire dans un mouvement circulaire au moins cinq fois jusqu’à ce qu’elle soit lisse.

Retirez ensuite l’aiguille de calibre 26 et rincez la cavité avec 1,5 à 2 millilitres de solution saline jusqu’à ce que le refoulement soit dégagé. Jetez en toute sécurité la seringue et l’aiguille dans un contenant désigné. Ensuite, fermez la plaie cutanée à l’aide d’une suture adhésive topique.

Immédiatement après la chirurgie, administrez la dose restante de buprénorphine à libération prolongée comme calculé précédemment. Surveillez l’animal sur le coussin chauffant pour détecter des signes de respiration normale et non obstruée.