Name: Extraction et clarification tissulaire Préparation d’échantillons de cerveau-moelle épinière de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Apprenez un protocole de clarification tissulaire pour préparer des échantillons intacts de cerveau et de moelle épinière de souris. Cette méthode préserve les signaux fluorescents pour l'imagerie neuronale détaillée.

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<ol><li>Ueda, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+its+applications+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and its applications in neuroscience.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (2), 61-79 (2020).</li>
<li>Tainaka, K., Kuno, A., Kubota, S. I., Murakami, T., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+principles+in+tissue+clearing+and+staining+protocols+for+whole-body+cell+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemical principles in tissue clearing and staining protocols for whole-body cell profiling.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 32, 713-741 (2016).</li>
<li>Susaki, E. A., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-body+and+whole-organ+clearing+and+imaging+techniques+with+single-cell+resolution%3A+Toward+organism-level+systems+biology+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Whole-body and whole-organ clearing and imaging techniques with single-cell resolution: Toward organism-level systems biology in mammals.</a> Cell Chem Biol. 23 (1), 137-157 (2016).</li>
<li>Wu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+of+nociceptor+neurons+in+the+spleen+promotes+germinal+center+responses+and+humoral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Innervation of nociceptor neurons in the spleen promotes germinal center responses and humoral immunity.</a> Cell. 187 (12), 2935-2951.e19 (2024).</li>
<li>Liu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+sympathetic+innervations+modulate+the+lung+innate+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Local sympathetic innervations modulate the lung innate immune responses.</a> Sci Adv. 6 (20), eaay1497(2020).</li>
<li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDISCO%3A+Advanced+solvent-based+clearing+method+for+imaging+whole+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">FDISCO: Advanced solvent-based clearing method for imaging whole organs.</a> Sci Adv. 5 (1), eaau8355(2019).</li>
<li>Bagnoli, S., Terzibasi Tozzini, E., Cellerino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-Brain+clearing+and+immunofluorescence+in+Nothobranchius+furzeri%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Whole-Brain clearing and immunofluorescence in Nothobranchius furzeri.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2023 (9), 698-704 (2023).</li>
<li>Lu, T., Shinozaki, M., Nagoshi, N., Nakamura, M., Okano, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+imaging+of+supraspinal+inputs+to+the+thoracic+and+lumbar+spinal+cord+mapped+by+retrograde+tracing+and+light-sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">3D imaging of supraspinal inputs to the thoracic and lumbar spinal cord mapped by retrograde tracing and light-sheet microscopy.</a> J Neurochem. 162 (4), 352-370 (2022).</li>
<li>Saritas, T., Puelles, V. G., Su, X. T., Ellison, D. H., Kramann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+clearing+and+imaging+of+immunolabeled+kidney+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optical clearing and imaging of immunolabeled kidney tissue.</a> J Vis Exp. (149), e60002(2019).</li>
<li>Song, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+mapping+of+single+neurons+by+calibrated+3D+reconstruction+of+brain+slices+reveals+topographic+projection+in+mouse+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Precise mapping of single neurons by calibrated 3D reconstruction of brain slices reveals topographic projection in mouse visual cortex.</a> Cell Rep. 31 (8), 107682(2020).</li>
<li>Fournel, R., Veruki, M. L., Hartveit, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+reconstruction+and+quantitative+morphometric+analysis+of+bipolar+cells+in+live+rat+retinal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Digital reconstruction and quantitative morphometric analysis of bipolar cells in live rat retinal slices.</a> J Comp Neurol. 530 (10), 1700-1728 (2022).</li>
<li>Lin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-type-specific+and+projection-specific+brain-wide+reconstruction+of+single+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Cell-type-specific and projection-specific brain-wide reconstruction of single neurons.</a> Nat Methods. 15 (12), 1033-1036 (2018).</li>
<li>Peng, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+histological+assessment+of+prostate+specimens+in+the+three-dimensional+space+by+hydrophilic+tissue+clearing+and+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Rapid histological assessment of prostate specimens in the three-dimensional space by hydrophilic tissue clearing and confocal microscopy.</a> J Histochem Cytochem. 70 (8), 597-608 (2022).</li>
<li>Singhal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+histomorphometric+changes+in+tissue+architecture+in+relation+to+alteration+in+fixation+protocol+-+An+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Diagn+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of histomorphometric changes in tissue architecture in relation to alteration in fixation protocol - An in vitro study.</a> J Clin Diagn Res. 10 (8), ZC28-ZC32 (2016).</li>
<li>Tainaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+landscape+for+tissue+clearing+based+on+hydrophilic+reagents%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Chemical landscape for tissue clearing based on hydrophilic reagents.</a> Cell Rep. 24 (8), 2196-2210.e9 (2018).</li>
<li>Lee, S. H., Son, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+wave%2C+late-stage+neuroinflammation+in+cleared+brains+of+aged+5xFAD+Alzheimer%27s+mice+detected+by+macrolaser+light+sheet+microscopy+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Second wave, late-stage neuroinflammation in cleared brains of aged 5xFAD Alzheimer's mice detected by macrolaser light sheet microscopy imaging.</a> Int J Mol Sci. 24 (23), 242317058(2023).</li>
<li>Zhao, J., Lai, H. M., Qi, Y., He, D., Sun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+of+tissue+clearing+and+the+path+forward+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Current status of tissue clearing and the path forward in neuroscience.</a> ACS Chem Neurosci. 12 (1), 5-29 (2021).</li>
<li>Ou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Achieving+optical+transparency+in+live+animals+with+absorbing+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Achieving optical transparency in live animals with absorbing molecules.</a> Science. 385 (6713), eadm6869(2024).</li>
<li>Ou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Achieving+optical+transparency+in+live+animals+with+absorbing+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Achieving optical transparency in live animals with absorbing molecules.</a> Science. 385, eadm6869(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Seringue de 1 ml</td><td>Shandong Weigao Group Medical Polymer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>502 colle</td><td>Deli Group</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD seringue à insuline</td><td>Becton,Dickinson et&nbsp ; Entreprise</td><td>328421</td><td></td></tr><tr><td>Pince à dissection dentée Bend</td><td>Jinzhong</td><td>JD1050</td><td></td></tr><tr><td>Pince circulaire en acier</td><td>Weili</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux fins</td><td>Jinzhong</td><td>y00030</td><td></td></tr><tr><td>Pince hémostatique pliée avec dent</td><td>Jinzhong</td><td>J31020</td><td></td></tr><tr><td>Pince hémostatique droite avec dent</td><td>Jinzhong</td><td>J31010</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille à perfusion 0,7 mm</td><td>Kindly Group</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Light box scale line</td><td>Nuohai Life Science</td><td>NH210901</td><td></td></tr><tr><td>Microdissection pince droite</td><td>Jinzhong</td><td>WA3020</td><td></td></tr><tr><td>NobeliumSoftware</td><td>Nuohai Life Science</td><td>Logiciel</td><td></td>de balayage</tr><tr><td>paraformaldéhyde</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>Pompes péristaltiques</td><td>Nuohai Life Science</td><td>NH1000</td><td></td></tr><tr><td>Tête de pompe péristaltique</td><td>Nuohai Life Science</td><td>NH-15</td><td></td></tr><tr><td>Saline tamponnée au phosphate</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>Héparine de sodium</td><td>Shanghai Pharma</td><td>H31022051</td><td></td></tr><tr><td>STOCK Tg (Thy1-EGFP) MJrs/J souris de souche</td><td>Jackson Laboratory</td><td>007788</td><td></td></tr><tr><td>Pince de dissection à dents droites</td><td>Jinzhong</td><td>JD1060</td><td></td></tr><tr><td>Kit de nettoyage des tissus (hyrophile)</td><td>Nuohai Life Science</td><td>NH-CR-210701</td><td></td></tr><tr><td>Traiteur de culture tissulaire 100mm x 20mm</td><td>NEST</td><td>704001</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux tissulaires</td><td>Jinzhong</td><td>J21040</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux Vénus</td><td>Jinzhong</td><td>YBC010</td><td></td></tr></tbody></table>

extraction et clarification tissulaire préparation d’échantillons de cerveau-moelle épinière de souris

Extraction and Tissue Clearing Preparation of Mouse Brain-Spinal Cord Samples

Ce protocole permet d’isoler avec succès l’ensemble du cerveau connecté à la moelle épinière chez les souris mâles de la souche MJrs/J de STOCK Tg (Thy1-EGFP). Il rend également les échantillons transparents, garantissant que les signaux fluorescents sont entièrement préservés et capturés, fournissant des images claires et détaillées qui maintiennent l’intégrité de la fluorescence d’origine.
La figure 1</str...

Extraction et clarification tissulaire Préparation d’échantillons de cerveau-moelle épinière de souris

Neuroscience research focused on the central nervous system necessitates a thorough understanding of various factors, including cell distribution, ...

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Nous décrivons un protocole pour perfusion transcardiaque de souris, l'enlèvement et la coupe du cerveau, ainsi que la coloration immunoperoxydase, résine d'enrobage, et ultraminces de sectionnement des sections du cerveau. A l'issue de ces procédures, le matériel est prêt pour immunocolorés examen par microscopie électronique à transmission.

Préparation du tissu cérébral de souris pour microscopie électronique

Le profilage de l'expression de l'ARN de régions cérébrales murines discrètes nécessite une stratégie de collecte de tissus précise et reproductible. Un protocole utilisant à la fois la section coronale du cerveau et la microdissection assistée par un carottier tissulaire est décrit ici. Le rendement et la qualité de l'ARN total obtenu à partir des échantillons résultants confirment l'utilité de la méthode décrite.

Approche non-Laser Microscopie Capture pour la microdissection des régions discrètes du cerveau de souris pour l&#39;ARN isolement total et en aval séquençage de nouvelle génération et de profil d&#39;expression génique

Une méthode pour préparer translation active, synaptoneurosomes intacte (SNS) de la souris cortex cérébral est décrite. La méthode utilise un gradient de densité discontinu de Percoll-sucrose permettant la préparation rapide de SNS active.

Préparation de Synaptoneurosomes de Mouse Cortex en utilisant un gradient de densité discontinu de Percoll-sucrose

Microscopie multiphotonique des organes de souris entiers est possible par compensation optiquement l'organe avant l'imagerie, mais pas tous les protocoles de préserver le signal de fluorescence des protéines fluorescentes. En utilisant une méthode de compensation optique avec de l'éthanol à base de déshydratation et d'alcool benzylique: benzoate de benzyle compensation, nous montrons des images haute résolution multiphotoniques de cerveau de souris exprimant toute la YFP.

Microscopie multiphotonique de cerveau de souris Effacé Exprimant YFP

Cette vidéo présente un protocole détaillé, étape par étape, pour la préparation de coupes de tissus cérébraux de souris congelés pour des analyses en aval.

Traitement du cerveau d’une souris pour l’analyse en aval

Source : Pekarek, B. T., et. al., Imagerie et quantification des dendrites neuronales intactes via le nettoyage tissulaire CLARITY. J. Vis. Exp. (2021)Dans cette vidéo, nous démontrons la préparation, l’imagerie et l’analyse d’un cerveau de souris dégagé pour examiner les arborescences dendritiques, la morphologie de la colonne vertébrale et la distribution neuronale à l’aide de techniques de microscopie confocale et de reconstruction 3D.

Imagerie par microscopie confocale d’arborescences dendritiques intactes et de la morphologie de la colonne vertébrale dans le cerveau d’une souris dégagée

Dans cet article, nous décrivons la procédure expérimentale complète de reconstruire, avec une haute résolution, le cerveau anatomie amende de cerveaux de souris marqués par fluorescence. Le protocole décrit comprend la préparation de l'échantillon et de la compensation, spécimen de montage pour l'imagerie, les données de post-traitement et de visualisation multi-échelle.

Résolution tomographie optique de cerveaux de souris entières avec Feuille confocale microscopie optique Micron-échelle de

Ici, nous présentons un protocole pour l’extrusion hydraulique de la moelle épinière ainsi que l’identification et l’isolement de ganglions spécifiques de la racine dorsale (DRG) chez le même rongeur. Par rapport aux méthodes standard d’isolement de la moelle épinière, cette méthode est nettement plus rapide et réduit le risque de lésions tissulaires.

Extrusion hydraulique de la moelle épinière et isolement de ganglions rachidiens en Rongeurs

Cet article présente deux protocoles optimisés pour l’examen des cellules immunitaires résidentes et dérivées périphériques du système nerveux central, y compris le cerveau, la moelle épinière et les méninges. Chacun de ces protocoles permet de déterminer la fonction et la composition des cellules occupant ces compartiments dans des conditions d’équilibre et inflammatoires.

Isolement des tissus du système nerveux central et des méninges associées pour l’analyse en aval des cellules immunitaires

La morphologie dendritique neuronale sous-tend souvent la fonction. En effet, de nombreux processus pathologiques qui affectent le développement des neurones se manifestent par un phénotype morphologique. Ce protocole décrit une méthode simple et puissante pour analyser les tonnelles dendritiques intactes et leurs épines associées.

Imagerie et quantification de dendrites neuronales intactes via CLARITY Tissue Clearing

Ce protocole décrit une approche efficace et reproductible pour les études histologiques du cerveau de souris, y compris la perfusion, la section du cerveau, l’immunocoloration flottante, le montage tissulaire et l’imagerie.

Immunocoloration flottante libre du cerveau des souris

Apprenez un protocole de clarification tissulaire pour préparer des échantillons intacts de cerveau et de moelle épinière de souris. Cette méthode préserve les signaux fluorescents pour l'imagerie neuronale détaillée.

Extraction et clarification tissulaire Préparation d’échantillons de cerveau-moelle épinière de souris

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