Name: Application d’un nouvel hydrogel d’hyaluronane pour la culture tridimensionnelle de follicules et méthodologie pour la cryoconservation de follicules ovariens de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T13:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: Découvrez la culture tridimensionnelle de follicules ovariens de souris à l'aide d'un hydrogel d'hyaluronane tyramine-lié. Cette méthode préserve l'architecture folliculaire native et permet la maturation de l'ovocyte in vitro.

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<ol><li>Telfer, E. E., Andersen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+growth+and+maturation+of+primordial+follicles+and+immature+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">In vitro growth and maturation of primordial follicles and immature oocytes.</a> Fertil Steril. 115 (5), 1116-1125 (2021).</li>
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<li>Carabatsos, M. J., Sellitto, C., Goodenough, D. A., Albertini, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte-granulosa+cell+heterologous+gap+junctions+are+required+for+the+coordination+of+nuclear+and+cytoplasmic+meiotic+competence%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Oocyte-granulosa cell heterologous gap junctions are required for the coordination of nuclear and cytoplasmic meiotic competence.</a> Dev Biol. 226 (2), 167-179 (2000).</li>
<li>Diaz, F. J., Wigglesworth, K., Eppig, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocytes+are+required+for+the+preantral+granulosa+cell+to+cumulus+cell+transition+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Oocytes are required for the preantral granulosa cell to cumulus cell transition in mice.</a> Dev Biol. 305 (1), 300-311 (2007).</li>
<li>Eppig, J. J., Pendola, F. L., Wigglesworth, K., Pendola, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+oocytes+regulate+metabolic+cooperativity+between+granulosa+cells+and+oocytes%3A+amino+acid+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Mouse oocytes regulate metabolic cooperativity between granulosa cells and oocytes: amino acid transport.</a> Biol Reprod. 73 (2), 351-357 (2005).</li>
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<li>Joo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+collagen+hydrogel+on+3D+culture+of+ovarian+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Mater%22%5BJournal%5D)">The effect of collagen hydrogel on 3D culture of ovarian follicles.</a> Biomed Mater. 11 (6), 065009(2016).</li>
<li>Telfer, E., Torrance, C., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+study+of+cultured+preantral+ovarian+follicles+of+mice+after+transplantation+under+the+kidney+capsule%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Morphological study of cultured preantral ovarian follicles of mice after transplantation under the kidney capsule.</a> J Reprod Fertil. 89 (2), 565-571 (1990).</li>
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<li>Zaniker, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensionally+printed+agarose+Micromold+supports+scaffold-free+mouse+ex+vivo+follicle+growth%2C+ovulation%2C+and+luteinization%5BTitle%5D)+AND+%22Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Three-dimensionally printed agarose Micromold supports scaffold-free mouse ex vivo follicle growth, ovulation, and luteinization.</a> Bioengineering. 11 (7), 719(2024).</li>
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<li>Wu, J., Nayudu, P. L., Kiesel, P. S., Michelmann, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luteinizing+hormone+has+a+stage-limited+effect+on+preantral+follicle+development+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Luteinizing hormone has a stage-limited effect on preantral follicle development in vitro.</a> Biol Reprod. 63 (1), 320-327 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Marquage anti-alpha tubuline-FITC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Réf. F2168</td><td></td></tr><tr><td>Marquage anti-tubuline-FITC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Réf. F2043</td><td></td></tr><tr><td>BZ-X700</td><td>Cléence</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrer le plat</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-12</td><td></td></tr><tr><td>Collagénase de type I</td><td>Société biochimique Worthington</td><td>LS004196</td><td></td></tr><tr><td>Crycap à flacon-ventilé</td><td>Recherche Hampton</td><td>Réf. HR4-904</td><td></td></tr><tr><td>Cryoloop</td><td>Recherche Hampton</td><td>Réf. HR4-974</td><td></td></tr><tr><td>Capuchon en cristal</td><td>Recherche Hampton</td><td>Réf. HR4-733</td><td></td></tr><tr><td>Plat de culture 60mm</td><td>Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>Référence 08-772B</td><td></td></tr><tr><td>Diméthylsulfoxyde (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Facteur de croissance épidermique (EGF)</td><td>R & D Systèmes</td><td>236-EG</td><td></td></tr><tr><td>Éthylène glycol (EG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>293237</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin - Chaleur inactivée</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10082-147</td><td></td></tr><tr><td>Hormone folliculostimulante (FSH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Réf. F4021</td><td></td></tr><tr><td>Global-Hepes&nbsp ; Douleur moyenne</td><td>CooperChirurgical</td><td>LGGH-100</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Réf. B2261</td><td></td></tr><tr><td>Gonadotrophine chorionique humaine (hCG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CG10</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique humaine</td><td>CooperChirurgical</td><td>GHSA-125</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>CooperChirurgical</td><td>ART-4007-A</td><td></td></tr><tr><td>Peroxyde d’hydrogène</td><td>CVS Pharmacie Inc.</td><td>372441</td><td></td></tr><tr><td>Insuline-transfertrine-sélénium (ITS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>41400-045</td><td></td></tr><tr><td>Leibovitz moyen (L-15)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11415-064</td><td></td></tr><tr><td>Hormone lutéinisante</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N° L9773</td><td></td></tr><tr><td>Baguette magnétique</td><td>Recherche Hampton</td><td>Réf. HR4-729</td><td></td></tr><tr><td>Micropipettes (1000 &micro ; m)</td><td>Minitube</td><td>19025/0050</td><td></td></tr><tr><td>Micropipettes (175, 200 et 275&micro ; m)</td><td>CooperChirurgical</td><td>MXL3-175, MXL3-200, MXL3-275</td><td></td></tr><tr><td>Filtre Millex GV 0.22 & micro ; m</td><td>Millipore</td><td>SLGU033RS</td><td></td></tr><tr><td>Huile minérale</td><td>CooperChirurgical</td><td>LGOL-500</td><td></td></tr><tr><td>Minimum Essential Medium alpha (MEM)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>32561-037</td><td></td></tr><tr><td>Système d’imagerie des ovocytes-Spindleview</td><td>Hamilton Thorne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solution saline tamponnée au phosphate (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Iodure de propidium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Réf. P4170</td><td></td></tr><tr><td>Rapide i</td><td>VitroLife</td><td>14406</td><td></td></tr><tr><td>Boîte intelligente</td><td>VitroLife</td><td>14423</td><td></td></tr><tr><td>Substitut de protéines synthétiques (SPS)</td><td>CooperChirurgical</td><td>RÉF. 3011</td><td></td></tr><tr><td>Kit de biohydrogel d’hyaluronane lié à la tyramine&nbsp ;</td><td>LifeCore</td><td>ENG-00151</td><td></td></tr><tr><td>Scelleuse à ultrasons</td><td>VitroLife</td><td>14415</td><td></td></tr><tr><td>Antenne parabolique GPS universelle de culture 8x 100 & micro ; L Puits</td><td>CooperChirurgical</td><td>Référence UGPS-010</td><td></td></tr></tbody></table>

application d’un nouvel hydrogel d’hyaluronane pour la culture tridimensionnelle de follicules et méthodologie pour la cryoconservation de follicules ovariens de souris

Application of a Novel Hyaluronan Hydrogel for Three-Dimensional Follicle Culture and Methodology for Mouse Ovarian Follicle Cryopreservation

Cet article détaille la méthodologie d’utilisation d’un nouveau gel d’hyaluronane lié à la tyramine pour la culture in vitro de follicules préantraux de souris36,37. La figure 6 illustre les différences entre la croissance des follicules préantraux lorsqu’ils sont placés dans un système de culture 2D conventionnel et un seul follicule encapsulé dans un gel HA pour la culture 3D. L’architecture folliculaire native est maintenue pendant les 12 jours de culture avec un antre clairement visible le dernier jour de croissance.
Le gel HA est très polyvalent, permettant la croissance de follicules isolés individuellement ou en groupes et le tissu ovarien est également divisé mécaniquement en petits groupes de follicules. Le gel est transparent, ce qui permet de visualiser les follicules même s’ils sont à des profondeurs différentes. Les follicules encapsulés et le FL-C présentent une expansion radiale due à la prolifération continue des cellules de la granulosa (Figure 7). Le diamètre initial des follicules est en moyenne de 139,8 ± 28 μm, le diamètre de l’ovocyte GV mesurant 63,5 ± 4,6 μm. Chez les follicules cultivés individuellement, les diamètres finaux mesurent environ 385,6 ± 36,7 μm, soit une augmentation d’environ 3 fois la taille. Les ovocytes ovulés en métaphase II mesurent environ 84,8 ± 3,8 μm. Au sein des grappes de FL en culture, la taille des follicules est assez diverse (Figure 5, Figure 7). Les ovocytes ovulés après le déclenchement de l’hCG se trouvent près du follicule (Figure 8). La majorité des ovocytes de la métaphase II seront prélevés à partir des COC ovulés. Les follicules encore intégrés après le déclenchement contiennent généralement des ovocytes GV et de métaphase I.
Le tableau 1 compare les taux de maturation entre les follicules isolés et les amas de FL provenant d’ovaires frais ou congelés. Les FL-C des ovaires cryoconservés avaient des taux de maturation significativement plus faibles. Des observations microscopiques ont montré qu’ils avaient fréquemment une lame basale cassée, ce qui les rendait très sensibles à l’extrusion prématurée des ovocytes. La nature fragile des amas de follicules a été quelque peu contrée par l’encapsulation. Le traitement à la collagénase des ovaires cryoconservés a été évité car il était particulièrement dommageable avec un faible taux de survie et un faible rendement de follicules intacts.
La cryoconservation de follicules isolés est beaucoup plus efficace que la conservation de l’ovaire entier. Des taux de maturation élevés peuvent être obtenus avec les deux méthodes de vitrification examinées (tableau 2). Malgré de grandes différences dans les vitesses de refroidissement, la maturation des ovocytes après VCI n’a pas différé. Le support ouvert CL permet une plus grande efficacité car jusqu’à dix follicules peuvent être chargés sur un seul support ouvert CL. Cela raccourcit également le temps global de récupération de plusieurs follicules cryoconservés. Cependant, pour toute application clinique éventuelle de la vitrification pour les follicules humains, le système fermé scellé peut être préférable.
La disposition de la chromatine autour du nucléole de l’ovocyte GV peut être utilisée pour identifier les ovocytes les plus susceptibles de féconder après l’ovulation et de se développer en blastocystes38. La figure 9 illustre la coloration en direct des ovocytes pour visualiser le modèle de distribution de la chromatine.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig01.jpg"> Figure 1 : Schéma de la croissance des follicules. Ce schéma illustre les différentes étapes du développement du follicule, d’un follicule primaire au stade préantral secondaire et enfin à un follicule tertiaire complètement mature prêt pour l’ovulation. Une image microscopique d’un follicule préantral typique est également montrée avec ses différentes caractéristiques morphologiques. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig02.jpg"> Figure 2 : Schéma de la méthode d’encapsulation HA. La structure du gel d’acide hyaluronique et les différentes étapes de l’intégration des follicules sont illustrées dans ce schéma. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig03.jpg"> Figure 3 : Isolement et encapsulation du follicule. (A, B) Follicule préantral sélectionné pour l’intégration à un grossissement de 40x et 200x. (C) Le follicule apoptotique est représenté avec un follicule préantral sain avec un ovocyte pas tout à fait central. (D) Image d’une perle de gel HA ensemencée avec des follicules et (E) avec deux FL-C. Images prises avec un stéréomicroscope pour montrer l’ensemble de la bille de gel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig04.jpg"> Figure 4 : Dispositifs de vitrification pour la cryoconservation de follicules isolés. Avec le dispositif à support ouvert CL, l’étape de vitrification est réalisée par immersion directe des follicules dans l’azote liquide. Le taux de refroidissement est donc extrêmement élevé, supérieur à -20 000 °C/min. En revanche, avec le support fermé RI, les follicules sont chargés sur le bâtonnet en plastique intérieur et déposés dans une paille extérieure immergée dans de l’azote liquide. Cette méthode de vitrification fermée évite le contact direct avec l’azote liquide. Cependant, la vitesse de refroidissement est nettement inférieure à -1220 °C/min. Le chargement et la récupération des follicules de l’un ou l’autre porteur sont faciles. Le support ouvert CL pouvait charger jusqu’à dix follicules par dispositif, contre seulement deux avec le support fermé RI. Ce chiffre a été modifié au lieu de35. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig05.jpg"> Figure 5 : Images représentatives des problèmes rencontrés. (A) Amas de follicules avec extrudation de l’ovocyte. (B) Follicules isolés avec une membrane de lame basale brisée et un avec un ovocyte extrudé. (C) Follicule incrusté sous une bulle dans le gel. (D) Amas de follicules qui est resté dans le gel (à gauche) par rapport à l’amas incrusté trop profondément qui s’est finalement attaché à la boîte. La large gamme de tailles de follicules dans FL-C est clairement visible. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig06.jpg"> Figure 6 : Comparaison de la croissance folliculaire dans les conventions 2D par rapport à la culture 3D dans l’HA. Avec la croissance 2D, l’aplatissement du follicule et la fixation des cellules de la granulosa à la boîte de culture tissulaire ont été observés au jour 4, laissant l’ovocyte vulnérable à la migration des cellules de la granulosa, à la perturbation des jonctions lacunaires et à l’extrusion prématurée de l’ovocyte. Le follicule encapsulé dans l’HA est resté détaché tout au long de l’intervalle de culture. L’expansion cellulaire de la granulosa s’est produite dans toutes les directions, enveloppant l’ovocyte et maintenant l’architecture 3D. Ce chiffre a été modifié au lieu de36. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig06large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig07.jpg"> Figure 7 : Images représentatives de follicules encapsulés dans un gel d’hyaluronane lié à la tyramine. (A) Follicule préantral prélevé après digestion par collagénase de l’ovaire frais le jour 1. (B) Goutte de gel ensemencée avec quatre follicules préantraux imagés le jour 1 et (C) Jour 4 de la culture, (D) Amas de follicules de l’ovaire frais le jour 2, (E) le jour 6 et (F) le jour 9 de la culture. (G) Amas de follicules disséqué mécaniquement à partir de l’ovaire entier vitrifié montré le jour 2 et (H) le jour 6 de la culture. (I) Le follicule avec formation d’antre est clairement visible au jour 9 de la culture. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig07large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig08.jpg"> Figure 8 : Ovulation de l’ovocyte. (A, B) Cumulus-ovocytes (COC) ovulé montré à côté de la perle de gel HA. (C) Les ovocytes ont été imagés après un traitement enzymatique des COC avec de l’hyaluronidase pour éliminer les cellules cumulus environnantes. De nombreux ovocytes en métaphase II. (D) Ovocyte de métaphase II avec corps polaire proéminent. Grossissement 400x. (E) Imagerie en direct de l’ovocyte en métaphase II à l’aide d’une lumière polarisée et d’un système d’imagerie pour visualiser le fuseau méiotique et évaluer l’organisation, effectuée comme décrit en37. Grossissement 400x. Fuseau biréfringent normal visible. (F) Ovocyte de métaphase II fixé et coloré avec de l’anti-alpha/bêta-tubuline et de l’iodure de propidium pour visualiser l’organisation du fuseau méiotique. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig08large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig09.jpg"> Figure 9 : Réorganisation de la chromatine dans les ovocytes GV. La disposition de la chromatine dans les ovocytes GV après la formation de l’antre a été examinée par coloration de l’ADN avec Hoechst 33342 (50 ng/mL). Des follicules représentatifs ont été prélevés à partir de billes d’AH par pipetage doux. Les cellules de la granulosa ont été éliminées à l’aide de la hyaluronidase. Les ovocytes de GV ont ensuite été colorés pendant 15 min. (Voir protocole par Monti et al.38). Les images ont été prises à un grossissement de 40x. (A) Ovocyte GV montré au jour 1 au début de la culture présentant le motif de coloration de la chromatine non entourée (NSN). (B) Ovocyte GV du follicule en croissance avec antre montré le jour du déclenchement de l’hCG. La chromatine s’est condensée et a formé un anneau périnucléaire autour du nucléole. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig09large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Paramètre</td>
			<td colspan="2">Ovaire frais</td>
			<td>Ovary congelé</td>
		</tr><tr><td></td>
			<td>Isolé FL</td>
			<td>Cluster FL</td>
			<td>Cluster FL</td>
		</tr><tr><td>Follicules observés lors de la VCI</td>
			<td>130</td>
			<td>154</td>
			<td>69</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">Ovulation après HCG ( %)</td>
			<td>71%</td>
			<td>66%</td>
			<td>93%</td>
		</tr><tr><td>(92/130)</td>
			<td>(101/154)</td>
			<td>(64/69)</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">GVBD ( %)</td>
			<td>30%</td>
			<td>28%</td>
			<td>52%</td>
		</tr><tr><td>(28/92)</td>
			<td>(28/101)</td>
			<td>(33/64)</td>
		</tr><tr><td>Formation d’ovocytes ( %)</td>
			<td>59%</td>
			<td>55%</td>
			<td>*34%</td>
		</tr><tr><td></td>
			<td>(54//92)</td>
			<td>(56/101)</td>
			<td>(22/64)</td>
		</tr></tbody></table>Tableau 1 : Résultats avec des follicules inclus dans l’HA à partir d’ovaires frais et vitrifiés. Les follicules et les FL-C d’ovaires frais ont été mûris in vitro après encapsulation dans un gel HA. Le gel HA a également été testé sur des follicules d’ovaires vitrifiés à l’aide d’un protocole EG/DMSO39. Avec des ovaires frais, les follicules individuels (FL) et les amas de follicules (FL-C) ont été collectés après la digestion de la collagénase. Pour les ovaires vitrifiés, l’exposition à la collagénase était, en fait, dommageable pour les follicules. La meilleure approche avec des ovaires cryoconservés était d’isoler les amas de FL plutôt que les follicules individuels et de n’utiliser que la dissection mécanique avec des aiguilles. Le tableau compare les résultats entre les billes d’AH ensemencées avec des follicules en groupes de 4 à 6 et les billes avec un seul FL-C contenant 6 à 10 follicules. *Le taux de maturation avec le FL-C à partir d’ovaires cryoconservés était significativement plus faible (p = 0,008 ; analyse du khi-deux pour tester la signification).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2">Transporteur</td>
			<td>RI</td>
			<td>CL</td>
		</tr><tr><td>(Fermé)</td>
			<td>(Ouvrir)</td>
		</tr><tr><td>Survie ( %)</td>
			<td>100% (24/24)</td>
			<td>100% (41/41)</td>
		</tr><tr><td>Formation de l’antre* ( %)</td>
			<td>25.0% (6/24)</td>
			<td>75.6% (31/41)*</td>
		</tr><tr><td>Taux d’ovulation ( %)</td>
			<td>66.7% (16/24)</td>
			<td>87.8% (36/41)</td>
		</tr><tr><td>Taux de maturation ( % MII)</td>
			<td>81.3% (13/16)</td>
			<td>69.4% (25/36)</td>
		</tr></tbody></table>Tableau 2 : Résultats après cryoconservation de follicules isolés sur deux dispositifs de vitrification différents. Des taux de maturation élevés ont été atteints à la fois avec le dispositif CL ouvert et avec le support RI fermé, avec sa vitesse de refroidissement plus faible. La formation de l’antre était le seul critère de jugement significatif observé, mais n’a pas eu d’impact sur le taux de maturation global (p &lt; 0,05 ; Analyse du khi-deux pour tester la signification).

Application d’un nouvel hydrogel d’hyaluronane pour la culture tridimensionnelle de follicules et méthodologie pour la cryoconservation de follicules ovariens de souris

The 3-D architecture of the ovarian follicle and the complex interactions between somatic cell components and the oocyte that are necessary for ...

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