Name: Réglage fin de l’orientation de Caenorhabditis elegans sur des coussinets gélifiés canalisés pour l’imagerie de la neurorégénération (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T14:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Découvrez le réglage fin de l'orientation de Caenorhabditis elegans sur des coussinets gélifiés canalisés pour améliorer l'imagerie de la neurorégénération. Cette méthode optimise la visualisation des structures neuronales.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Fabrication de coussinets de gélose canalisés à l’aide de moules PDMS pour contrôler l’orientation des animaux

<ol><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li>
<li>Bargmann, C. I., Avery, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+killing+of+cells+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Laser killing of cells in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Cell Biol. 48, 225-250 (1995).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+self-regulating+feed-forward+circuit+controlling+C-elegans+egg-laying+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A self-regulating feed-forward circuit controlling C-elegans egg-laying behavior.</a> Curr Biol. 18 (19), 1445-1455 (2008).</li>
<li>Chung, S. H., Mazur, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femtosecond+laser+ablation+of+neurons+in+C.+elegans+for+behavioral+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Phys+A-Mater+Sci+Process%22%5BJournal%5D)">Femtosecond laser ablation of neurons in C. elegans for behavioral studies.</a> Appl Phys A-Mater Sci Process. 96 (2), 335-341 (2009).</li>
<li>Zellag, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CentTracker%3A+a+trainable%2C+machine-learning-based+tool+for+large-scale+analyses+of+Caenorhabditis+elegans+germline+stem+cell+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">CentTracker: a trainable, machine-learning-based tool for large-scale analyses of Caenorhabditis elegans germline stem cell mitosis.</a> Mol Biol Cell. 32 (9), 915-930 (2021).</li>
<li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+neuron+in+C.+elegans+orchestrates+multiple+motor+outputs+through+parallel+modes+of+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A single neuron in C. elegans orchestrates multiple motor outputs through parallel modes of transmission.</a> Curr Biol. 33 (20), 4430-4445.e6 (2023).</li>
<li>Rasmussen, N. R., Dickinson, D. J., Reiner, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ras-dependent+cell+fate+decisions+are+reinforced+by+the+RAP-1+small+GTPase+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Ras-dependent cell fate decisions are reinforced by the RAP-1 small GTPase in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 210 (4), 1339-1354 (2018).</li>
<li>Rivera Gomez, K., Schvarzstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immobilization+of+nematodes+for+live+imaging+using+an+agarose+pad+produced+with+a+vinyl+record%5BTitle%5D)+AND+%22MicroPubl+Biol%22%5BJournal%5D)">Immobilization of nematodes for live imaging using an agarose pad produced with a vinyl record.</a> MicroPubl Biol. 2018, (2018).</li>
<li>Chung, S. H., Clark, D. A., Gabel, C. V., Mazur, E., Samuel, A. D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+AFD+neuron+in+C.+elegans+thermotaxis+analyzed+using+femtosecond+laser+ablation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of the AFD neuron in C. elegans thermotaxis analyzed using femtosecond laser ablation.</a> BMC Neuroscience. 7 (1), 30(2006).</li>
<li>Gerhold Abigail, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+regulation+of+stem+and+progenitor+cell+mitotic+progression+by+in+situ+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Investigating the regulation of stem and progenitor cell mitotic progression by in situ imaging.</a> Curr Biol. 25 (9), 1123-1134 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Fiole Erlenmeyer de 125 mL</td><td>Corning</td><td>4980-125</td><td></td></tr><tr><td>33 1/2 tr/min ou 12 pouces de long (LP) disque vinyle&nbsp ;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>PROFONDEUR DU CANAL INDIVIDUEL : 50 & micro ; m, largeur : 200 &micro ; m</td></tr><tr><td>seringue en plastique de 30 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-793-817</td><td></td></tr><tr><td>90 % platine, 10 % fil d’iridium</td><td>Tritech Research&nbsp ;</td><td>PT-9010</td><td>utilisé pour créer une feuille d’aluminium de pic de platine</td></tr><tr><td>&nbsp ;</td><td>Amazon</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de calcium</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAL131910B</td><td></td></tr><tr><td>vitre</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>7 po x 5 po Vitre prise du cadre&nbsp ;</td></tr><tr><td>pipette en verre</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20A</td><td>utilisée pour créer une</td></tr> plaque chauffante à pic en platine<tr><td>&nbsp ;</td><td>Thermofisher</td><td>SP88857104</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate de magnésium</td><td>Fisher Scientific</td><td>AA3333736</td><td></td></tr><tr><td>lames de microscope</td><td>Mckesson</td><td>938360</td><td></td></tr><tr><td>biologie moléculaire grade agar&nbsp ;</td><td>Benchmark Scientific</td><td>A1705</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate de potassium dibasique</td><td>Fisher Scientific</td><td>P290-500</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate de potassium monobasique</td><td>Fisher Scientific</td><td>P285-500</td><td></td></tr><tr><td>Azoture de sodium</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAJ2161022</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-212</td><td></td></tr> verre <tr><td>de protection carré</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541-016</td><td></td></tr><tr><td>SYLCAP 284-F (Fast Cure) Kit d’encapsulation d’élastomère de silicone, transparent, optiquement transparent, mélange 10:1, 500 g/ml (0,5 kg), plus rapide que Sylgard 184 et similaires&nbsp ;</td>Dessiccateur sous vide <td>MicroLubrol</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-648-100</td><td></td></tr><tr><td>parabole</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-549-750</td><td></td></tr></tbody></table>

réglage fin de l’orientation de caenorhabditis elegans sur des coussinets gélifiés canalisés pour l’imagerie de la neurorégénération

Fine Adjustment of Caenorhabditis elegans Orientation on Channeled Agar Pads for Imaging Neuroregeneration

Fabrication de moules PDMS Le cycle de pression du vide pendant la fabrication du moule perfore et élimine les bulles d’air du PDMS non durci, garantissant ainsi un moule sans bulles. Comme le montre la figure 3D , les bulles remontent à la surface et se perforent. Les moules sans bulles peuvent produire des canaux propres.
Solidification du moule PDMS Lorsque vous placez la vitre sur le disque vinyle, évitez de créer des espaces d’air. Ces espaces peuvent entraîner une épaisseur inégale ou des défauts de surface. Les bulles, si elles sont présentes, peuvent être détectées visuellement. En pressant la vitre d’un côté à l’autre, on déplace l’air, ce qui minimise la formation de bulles et garantit une épaisseur de moule uniforme illustrée à la figure 4A.
Utilisation de tampons gélifiés canalisés pour une orientation fine de C. elegans Les coussinets de gélose canalisés permettent une orientation précise de C. elegans. Nous définissons l’orientation de l’animal en roulant légèrement l’animal avec un pic en fil de platine, tout en vérifiant l’orientation à l’aide de repères, tels que la vulve ou l’intestin en forme de S (Figure 5A,C). Nous confirmons l’orientation sous un microscope de dissection fluorescent avant de transférer les animaux dans un microscope inversé illustré à la figure 5B,D.
Évaluation de la régénération des fibres neuronales à l’aide de coussinets gélifiés canalisés Les coussinets de gélose canalisés améliorent la qualité d’imagerie de la régénération neuronale en orientant de manière optimale l’animal. Le positionnement des fibres neuronales régénérées plus près de la lentille de l’objectif réduit la diffusion et l’absorption de la lumière, améliorant ainsi la clarté de l’image. Les figures 5E, F montrent que le fait de rapprocher le site de régénération de l’objectif améliore la qualité de l’imagerie, facilitant une analyse plus précise de la repousse neuronale.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig01.jpg"> 
Figure 1 : Caenorhabditis elegans sur des coussinets plats et canalisés. (A) Animal sur un tampon gélosé plat en orientation DV ; Couvre-visage de la vulve. (B) L’introduction de la lamelle pousse la vulve sur le côté, forçant l’animal à s’orienter latéralement. (C) Animal sur une plaque de gélose canalisée en orientation DV. (D) L’animal reste en orientation DV après l’introduction de la lamelle. (E) Image en fond clair d’un mutant au rouleau sur une plaque de gélose canalisée en orientation DV. (F) Image en fond clair avec lamelle, le même animal que E reste en orientation DV. Abréviations : DV = dorsale-ventrale ; lat = latéral. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig02.jpg"> 
Figure 2 : Matériaux et équipements pour la fabrication de PDMS. (A) Kit d’élastomère de silicone SYLCAP 284-F. (B) Échelle. (C) Seringue en plastique. (D) Dessiccateur sous vide. (E) Plaque chauffante. (F) Disque vinyle longue durée de 12 pouces, démontable au besoin. (G) Vitre. Abréviation : PDMS = polydiméthylsiloxane. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig03.jpg"> 
Figure 3 : Mélange et mise sous vide de PDMS non polymérisés. (A) Mélangez la base et l’agent de durcissement dans le plateau. (B) Placez le plateau dans une chambre à vide. (C) Passez l’aspirateur trois fois pour permettre aux bulles de faire surface. (D) Au bout d’une heure, la plupart des bulles ont éclaté. Notez une transmission améliorée grâce au PDMS. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig04.jpg"> 
Figure 4 : Introduction d’une vitre dans un PDMS non polymérisé sans bulles. (A) Introduction de la vitre sur le disque vinyle sans bulles. (B) Moule PDMS solidifié retiré du disque, avec des canaux de détail encastrés. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig05.jpg"> 
Figure 5 : Images en fond clair et en fluorescence de C. elegans montées sur gélose canalisée. (A) Image en fond clair d’un animal en orientation DV bilatérale. Repère anatomique pour l’orientation DV : intestin en forme de S en spirale (tissu plus foncé indiqué par une flèche) traversant la ligne médiane ~60 % de la distance entre le nez et la queue. (B) Image de fluorescence des neurones en orientation DV, même animal que A. (C) Image en fond clair d’un animal en orientation latérale. Repère anatomique pour l’orientation latérale : vulve tournée vers le côté. (D) Image de fluorescence des neurones en orientation latérale, même animal que C. (E) Orientation avec régénération (flèche) dans le côté plus profond (éloigné) d’un animal. (F) Orientation avec régénération chez l’animal du côté moins profond plus proche de l’objectif ; Régénération plus claire (flèche). Barres d’échelle = 20 μm. Abréviations : DV = dorsale-ventrale ; lat = latéral. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Réglage fin de l’orientation de Caenorhabditis elegans sur des coussinets gélifiés canalisés pour l’imagerie de la neurorégénération

Caenorhabditis elegans is a model organism widely used for studying biological processes. Its transparency and small size make it ideal for imaging ...

fine-adjustment-caenorhabditis-elegans-orientation-on-channeled-agar

Research

Recherche

JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

Lors de l’imagerie en direct de C. elegans, un tampon d’agarose peut être utilisé pour maintenir le nématode immobile sans l’endommager ni le dessécher. Cette vidéo décrit comment préparer un tampon de montage simple pour la microscopie.

Préparation de lames de nématodes : une méthode pour monter des animaux sur une gélose

Source : Doser, R., et al. Imagerie subcellulaire de la manipulation neuronale du calcium in vivo. J. Vis. Exp. (2023)Cette vidéo démontre l’imagerie in vivo du flux de calcium subcellulaire dans les neurones de la moelle nerveuse ventrale de souches transgéniques de Caenorhabditis elegans. Deux indicateurs calciques distincts sont utilisés : un indicateur cytoplasmique dans une souche et un indicateur mitochondrial dans une autre. Les neurones sont observés au microscope à fluorescence pour...

Imagerie de la dynamique subcellulaire du calcium dans les neurones de Caenorhabditis elegans

Avec son petit corps, transparent et documenté neuroanatomie et une foule de techniques génétiques qui se prêtent et...

En imagerie calcique in vivo des neurones en C. elegans

Nous décrivons des méthodes pour étudier les aspects de amylopathies dans le...

A<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Système modèle pour l&#39;étude de Amylopathy

Ce protocole décrit comment l'image des cellules en division dans un tissu en Caenorhabditis elegans embryons. Bien que de nombreux protocoles décrivent comment la division cellulaire de l'image dans l'embryon précoce, ce protocole décrit comment l'image de la division cellulaire dans un tissu en développement au cours de l'embryogenèse tardive milieu.

Visualisation neuroblaste Cytocinèse cours<em&gt; C. elegans</em&gt; Embryogenèse

L’imagerie du comportement et de l’activité neuronale sur de longues échelles de temps sans immobilisation de l’animal est une condition préalable à la compréhension du comportement. L’imagerie des chambres microfluidiques à l’agarose (IAM) peut être utilisée pour imager l’activité neuronale et le comportement à tous les stades de la vie de Caenorhabditis elegans.

Microchambres agarose à long terme de l&#39;imagerie calcique<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans (C. elegans) est un bon modèle pour étudier le transport axonal et intracellulaire. Ici, je décris un protocole in vivo d’enregistrement et d’analyse du transport axonal et de chez c. elegans.

Immobilisation Caenorhabditis elegans , à analyser le Transport intracellulaire dans les neurones

Cette étude décrit des mesures quantitatives de la taille et de la localisation synaptiques, de la morphologie musculaire et de la forme mitochondriale chez C. elegans à l'aide d'outils de traitement d'image librement disponibles. Cette approche permet à des études futures chez C. elegans de comparer quantitativement l'étendue des changements structurels tissulaires et organllés résultant de mutations génétiques.

Approches quantitatives pour l'étude des structures cellulaires et de la morphologie d'organite à Caenorhabditis elegans

Un protocole d’imagerie des microtubules dynamiques in vivo à l’aide d’une protéine de liaison à l’extrémité sous marquage fluorescent a été présenté. Nous avons décrit les méthodes pour étiqueter, imager et analyser les microtubules dynamiques dans le neurone du microtubule latéral postérieur (PLM) de C. elegans.

In vivo Évaluation de la dynamique et de l’orientation des microtubules dans les neurones de Caenorhabditis elegans

L’article décrit l’optimisation des paramètres d’acquisition de la microscopie à fluorescence pour visualiser le transport axonal de cargaisons endogènes marquées à une résolution de neurone unique chez un nématode vivant.

Optimisation de la visualisation du transport axonal de la cargaison endogène par microscopie à fluorescence chez Caenorhabditis elegans vivant

Découvrez le réglage fin de l'orientation de Caenorhabditis elegans sur des coussinets gélifiés canalisés pour améliorer l'imagerie de la neurorégénération. Cette méthode optimise la visualisation des structures neuronales.

Réglage fin de l’orientation de Caenorhabditis elegans sur des coussinets gélifiés canalisés pour l’imagerie de la neurorégénération (Vidéo) | JoVE Journal

Réglage fin de l’orientation de Caenorhabditis elegans sur des coussinets gélifiés canalisés pour l’imagerie de la neurorégénération

Explorer plus de vidéos