Name: Protocole d’injection directe du nerf vague pour les rats (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Apprenez une technique d'injection directe du nerf vague chez le rat pour la thérapie génique. Cette méthode chirurgicale permet une administration ciblée de vecteurs AAV9 dans le système nerveux autonome.

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<ol><li>Fischer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+injection+into+the+dorsal+root+ganglion%3A+Technical%2C+behavioral%2C+and+histological+observations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Direct injection into the dorsal root ganglion: Technical, behavioral, and histological observations.</a> J Neurosci Methods. 199 (1), 43-55 (2011).</li>
<li>O'donnell, M., Fontaine, A., Caldwell, J., Weir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+dorsal+root+ganglia+%28drg%29+injection+in+mice+for+analysis+of+adeno-associated+viral+%28AAV%29+gene+transfer+to+peripheral+somatosensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Direct dorsal root ganglia (drg) injection in mice for analysis of adeno-associated viral (AAV) gene transfer to peripheral somatosensory neurons.</a> J Neurosci Methods. 411, 110268(2024).</li>
<li>Puljak, L., Kojundzic, S. L., Hogan, Q. H., Sapunar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+pharmacological+agents+into+rat+dorsal+root+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of pharmacological agents into rat dorsal root ganglion.</a> J Neurosci Methods. 177 (2), 397-402 (2009).</li>
<li>Rueter, L. E., Kohlhaas, K. L., Curzon, P., Surowy, C. S., Meyer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+and+central+sites+of+action+for+a-85380+in+the+spinal+nerve+ligation+model+of+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Peripheral and central sites of action for a-85380 in the spinal nerve ligation model of neuropathic pain.</a> Pain. 103 (3), 269-276 (2003).</li>
<li>Ulusoy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-to-neuron+alpha-synuclein+propagation+in+vivo+is+independent+of+neuronal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Neuron-to-neuron alpha-synuclein propagation in vivo is independent of neuronal injury.</a> Acta Neuropathol Commun. 3, 13(2015).</li>
<li>Helwig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+propagation+of+transduced+alpha-synuclein+involves+non-fibrillar+protein+species+and+is+enhanced+in+alpha-synuclein+null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Brain propagation of transduced alpha-synuclein involves non-fibrillar protein species and is enhanced in alpha-synuclein null mice.</a> Brain. 139 (Pt 3), 856-870 (2016).</li>
<li>Chiang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+suprachoroidal-to-optic-nerve+%28scone%29+drug+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Development of a novel suprachoroidal-to-optic-nerve (scone) drug delivery system.</a> Drug Deliv. 31 (1), 2379369(2024).</li>
<li>Ferrari, L. F., Cunha, F. Q., Parada, C. A., Ferreira, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+to+perform+direct+intraganglionar+injections+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel technique to perform direct intraganglionar injections in rats.</a> J Neurosci Methods. 159 (2), 236-243 (2007).</li>
<li>Yuan, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+injection+of+lumbar+dorsal+root+ganglia+under+direct+vision%3A+Relevant+anatomy%2C+protocol%2C+and+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rapid injection of lumbar dorsal root ganglia under direct vision: Relevant anatomy, protocol, and behaviors.</a> Front. Neurol. 14, 1138933(2023).</li>
<li>Mason, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+AAV+serotypes+for+gene+delivery+to+dorsal+root+ganglion+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Comparison of AAV serotypes for gene delivery to dorsal root ganglion neurons.</a> Mol Ther. 18 (4), 715-724 (2010).</li>
<li>Arjomandnejad, M., Dasgupta, I., Flotte, T. R., Keeler, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+of+recombinant+adeno-associated+virus+%28AAV%29+vectors+for+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22BioDrugs%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity of recombinant adeno-associated virus (AAV) vectors for gene transfer.</a> BioDrugs. 37 (3), 311-329 (2023).</li>
<li>Ertl, H. C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+and+toxicity+of+AAV+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity and toxicity of AAV gene therapy.</a> Front Immunol. 13, 975803(2022).</li>
<li>Wayman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+permanent+distal+middle+cerebral+with+common+carotid+artery+occlusion+in+aged+rats+to+study+cortical+ischemia+with+sustained+disability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Performing permanent distal middle cerebral with common carotid artery occlusion in aged rats to study cortical ischemia with sustained disability.</a> J Vis Exp. (108), e53106(2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL de BD&nbsp ; Seringue à tuberculine avec détachable 25 g x 5/8". Aiguille</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>SKU :309626</td><td>Utilisé pour se connecter avec une aiguille incurvée pour tirer le nerf vague et le maintenir au moment de l’injection.</td></tr><tr><td>Chlorhydrate de bupivacaïne à 0,5 % Injection</td><td>Hospira</td><td>NDC 0409-1162-19</td><td>Anesthésiques locaux utilisés pour anesthésier les tissus locaux.</td></tr><tr><td>100 mL 0,9 % de chlorure de sodium Irrigation USP</td><td>Stericare Solutions</td><td>Article #6240</td><td>Solution saline normale, utilisée pour réhydrater le rat et les tissus.</td></tr><tr><td>20 embouts émoussés, écarteurs, 7,5 mm</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Surgi 5018</td><td>Utilisé pour séparer et maintenir les tissus au moment de l’opération.</td></tr><tr><td>Seringue BD-Luer-Lok de 3 ml, stérile, à usage unique</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>SKU # 309657</td><td>Utilisé pour injecter une solution saline chez le rat et remplir la solution saline dans le tube en polyéthylène.</td></tr><tr><td>AK-Fluor10 %</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-253-10</td><td>Colorant fluorescéine visible dans le nerf. Utilisé pour suivre la fidélité de l’injection.</td></tr><tr><td>Balance pour animaux</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SCL 4000</td><td>Utilisée pour mesurer le poids corporel d’un rat.</td></tr><tr><td>Ansell ENCORE Perry Style 42 PF Gants chirurgicaux</td><td>Ansell</td><td>ASTM D3577</td><td>Gant stérile, il est utilisé au moment de l’intervention chirurgicale par un chirurgien.</td></tr><tr><td>Larmes artificielles Pommade 3.5g</td><td>Pivetal</td><td>NDC 46066-753-55</td><td>Utilisé dans les yeux pour prévenir la sécheresse excessive des yeux.</td></tr><tr><td>Bébé-Myxter Hémostatique&nbsp ;</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>13013-14</td><td>Utilisé pour arrêter les saignements en cas d’urgence. Également utilisé pour plier l’aiguille de 25 G x 5/8</td></tr>".<tr><td>Tube BD Intramedic PE</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>14-170-12A</td><td>Utilisé dans le système de configuration d’injection pour se connecter avec l’aiguille Hamilton et les aiguilles NanoFil. Il contient également le mélange d’injection.</td></tr><tr><td>BD Precison Glide Needle, 25 G x 5/8"</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#305122</td><td>Utilisé pour injecter une solution saline chez le rat et pour fabriquer une aiguille incurvée.</td></tr><tr><td>Aiguille BD Precison Glide, 27 G x &frac12 ; "</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#301629</td><td>Utilisé pour remplir de solution saline stérile le tube BD Intradermic.</td></tr><tr><td>Benchmark Accuris " NextPette" Micro kit de démarrage de pipette à volume variablecomprend 4 pipettes : 10/20/200/1000 &mu ; L, plus le support</td><td>MilliporeSigma</td><td>BMSP7700S1</td><td>Utilisé pour pippette solution stérile.</td></tr><tr><td>Bétadine, povidine iode 10 %</td><td>Honestmed</td><td>67618015017</td><td>Utilisé pour désinfecter la zone chirurgicale.</td></tr><tr><td>Carprofène Solution injectable 50 mg/mL</td><td>Fourni par Covtrus (6451506845)</td><td>SKU 591149</td><td>Dans notre cas, nous avons utilisé du carprofène dilué à la dose de 5 mg/kg fournie par le Centre de ressources animales du Southwestern Medical Center de l’Université du Texas</td></tr>.<tr><td>Aiguille incurvée (sur mesure)</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#305122</td><td>BD PrecisionGlide 25 G x 5/8" en aiguille est courbée à 90 degrés à l’aide d’un hémostat. La pointe de l’aiguille est émoussée. Il doit être stérilisé avant utilisation. Il est utilisé pour accrocher le nerf vague et le maintenir au moment de la séparation et de l’injection.</td></tr><tr><td>Microscope de dissection</td><td>Motic&nbsp ;</td><td>SMZ-171-BLED (jumelles avec lumières)</td><td>Utilisé pour agrandir la zone anatomique crificale au moment de la séparation du nerf vague, de l’injeciton et pour vérifier les fuites d’injection.</td></tr><tr><td>Drap de drapé&nbsp ;</td><td>Dynarex</td><td>Reorder#8122</td><td>Utilisé comme champ après stérilisation.</td></tr><tr><td>Applicateurs à embout en coton Dukal, non stériles</td><td>Dukal</td><td>Article 9003</td><td>Utilisé pour émousser la séparation des tissus, doit être stérilisé avant utilisation.</td></tr><tr><td>Dumont #7 - Fine Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>Utilisé pour séparer le nerf vague gauche de l’artère carotide commune. Il est incurvé donc facile à utiliser.</td></tr><tr><td>Ethicon PDS II Suture monofilament non teintée - SUTURE, 4/0 18 PDS II CLR MONO PS</td><td>Ethicon</td><td>VA - Z682G</td><td>Utilisé pour suturer la plaie.</td></tr><tr><td>Suture en nylon Ethilon Noir Monofilament</td><td>Ethicon</td><td>1856G</td><td>Utilisé pour suturer la plaie si une suture non absorbante est utilisée. Également utilisé pour accrocher la dent de rat pour fixer le nez à l’intérieur du cône nasal.</td></tr><tr><td>Pince fine - Finition miroir</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>11412-11</td><td>Utilisé au moment de la séparation du nerf vague de l’artère carotide commune. C’est direct.</td></tr><tr><td>Ciseaux fins - Outils scientifiques fins tranchants</td><td></td><td>14060-09</td><td>Ued pour couper les tissus.</td></tr><tr><td>Solution de nettoyage Hamilton</td><td>Hamilton</td><td>HT18311</td><td>Utilisé pour nettoyer le Hamilton après utilisation.</td></tr><tr><td>Aiguille Hamilton, 27G, petit moyeu Aiguille RN, 2", PT3, 6/PK</td><td>Hamilton</td><td>7762-01</td><td>Utilisé pour connecter BD Intramedic&trade ; Tubes en PE.</td></tr><tr><td>Seringue Hamilton , 710RN&nbsp ;</td><td>Hamilton</td><td>7638-01</td><td>Utilisé pour retenir la drogue au moment de l’injection du nerf vague.</td></tr><tr><td>Seringue à insuline</td><td>EXEL INT, Point de confort</td><td>REF 26027</td><td>Utilisé pour injecter du carprofène et des anesthésiques locaux.</td></tr><tr><td>Lidocaïne 2 % Injection</td><td>Covetrus</td><td>Reorder#002468</td><td>Utilisé pour mélanger avec la bupivacaïne et injecter au site de l’incision.</td></tr><tr><td>Luxol Fast Blue MBSN Acros</td><td>Organics</td><td>212170250</td><td>colorant visible dans le nerf, utilisé pour mélanger avec le médicament afin que le mélange d’injection soit visible.</td></tr><tr><td>Stérilisateur à microbilles avec perles de verre</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>Article n° 18090-46</td><td>Utilisé pour stériliser les outils chirurgicaux entre les opérations du rat.</td></tr><tr><td>Aiguilles NanoFil-NF35BV-2&nbsp ;</td><td>World Precision Instrument</td><td>NC9708956</td><td>Utilisé pour injecter un mélange de drogue et de colorant à l’intérieur du nerf vague.</td></tr><tr><td>Olsen-Hegar Porte-aiguilles avec coupe-sutures</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>12002-12</td><td>Utilisé dans la suture des plaies.</td></tr>Film <tr><td>d’emballage de laboratoire Parafilm M, 4 pouces x 125 pieds, 1 rouleau par boîte, 12 unités</td><td>Honestmed</td><td>PM#996</td><td>Utilisé pour contenir les 5 μL aliquotes du mélange médicament-colorant de sorte que le chargement du mélange médicament-colorant dans le tube intradermique BDTM soit précis. &nbsp ;</td></tr><tr><td>PDI Tampons de préparation à l’alcool</td><td>Honestmed</td><td>NDC 10819-3914-2</td><td>Utilisé pour désinfecter la zone chirurgicale.</td></tr><tr><td>Éponges de gaze stériles de type VII Premium Care, 8 plis, 2 » x 2</td>"<td>Dukal</td><td>Article C5119</td><td>Utilisé comme cushon sous le cou du rat au moment de la chirurgie.&nbsp ;</td></tr><tr><td>Presse' n Seal Cling Film</td><td>Glad Utilisé</td><td></td><td>pour couvrir un rat au moment de l’opération comme un drapé.</td></tr><tr><td>Ensemble d’écarteur de rat</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Surgi 5002</td><td>Utilisé pour maintenir l’incision ouverte afin qu’il soit facile de séparer le nerf vague de l’artère carotide.</td></tr><tr><td>RightTemp Jr.</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td></td><td>20,3 cm L x 25,4 cm L (8 po l x 10 po L), utilisé pour garder les rats au chaud.</td></tr><tr><td>S& Pince en T - SuperGrip Tips</td><td>Fine Science Tools</td><td>00632-11</td><td>Utilisé au moment de la suture pour retenir les tissus sans les endommager.</td></tr><tr><td>S& Pince à attacher la suture en T</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>00272-13</td><td>Utilisé pour resserrer la suture.</td></tr><tr><td>Lame de scalpel #15</td><td>Fine Science Tools</td><td>10015-00</td><td>Utilisé pour faire une incision dans la peau du côté ventral du cou.</td></tr><tr><td>Manche de scalpel-#7</td><td>Outils de science fine</td><td>10007-12</td><td>Utilisé pour tenir la lame du scalpel.</td></tr><tr><td>Pompe à seringue</td><td>&nbsp ; KD Scientific</td><td>78-81-8052GL</td><td>²&nbsp ; Serial #D107034, Modèle#LEGATO-180, est une pompe programmable qui peut pomper un petit volume de mélange dans le cadre d’un programme.</td></tr><tr><td>TipOne Filter Tip Refill Starter Systems</td><td>USA</td><td>Scientific Item #1120-3510</td><td>Utilisé pour pipeter le mélange de médicament et de colorant.</td></tr><tr><td>Vaporisateur pour isoflurane, rempli d’entonnoir</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Vetflow 1231</td><td>Utilisé pour anesthésier les rats.</td></tr><tr><td>Adhésifs tissulaires Vetbond</td><td>3M Science Applied to Life</td><td>ID B00016067</td><td>Utilisé pour sceller les tissus au site de la plaie coupée si la suture n’est pas parfaite.</td></tr><tr><td>Wahl BravMini+ Professional Cordless Clipper Kit</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>CL7300-Kit</td><td>Utilisé pour couper les poils de rat.</td></tr></tbody></table>

protocole d’injection directe du nerf vague pour les rats

Direct Vagus Nerve Injection Protocol For Rats

Six rats adultes (3 mâles et 3 femelles) ont été utilisés dans la présente étude. Sur six, un rat a été injecté plusieurs fois pour démontrer une condition d’injection d’échec qui montre une diffusion du colorant autour du site d’injection Figure 5A. Tous les autres rats ont montré une injection douce et une coloration nerveuse, comme le montrent les figures 4B et 5B.
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Protocole d’injection directe du nerf vague pour les rats

There is a relative abundance of strategies and methodologies to facilitate drug delivery to the central nervous system. However, drug delivery directly ...

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Stimulation du nerf vague par des électrodes de brassard nerveux périphérique implantées de manière chronique chez le rat

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