Modèle murin de parodontite avancée induite par la ligature en nylon dans la deuxième molaire supérieure

Le but de notre recherche est d’étudier les facteurs cellulaires et moléculaires qui favorisent la parodontite pour laquelle nous utilisons un modèle murin de parodontite induite par la ligature.

Des recherches récentes ont établi l’importance de l’inflammation. La dysbiose et les maladies systémiques sont des facteurs déterminants dans le développement de la parodontite.

La technologie récemment utilisée en parodontie comprend des modèles animaux, certains recherchent différentes molécules, le séquençage protéomique, la cytométrie en flux et l’histologie, entre autres.

Les défis expérimentaux actuels sont liés à la compréhension de l’interaction entre les maladies systémiques et la parodontite.

Nous utilisons un modèle murin de parodontite par ligature pour démontrer que les cytokines pro-inflammatoires A et S sont impliquées dans le développement de la parodontite pendant la grossesse.

[Narrateur] Pour commencer, placez une souris anesthésiée sur une table de travail tournée vers le haut, la tête dirigée vers l’opérateur. Tirez doucement chaque jambe sans tension et fixez-les avec du ruban adhésif microporeux pour éviter les mouvements involontaires soudains. Couvrez la souris avec une couverture ou une gaze pour maintenir sa chaleur corporelle. Placez une extrémité d’un élastique orthodontique autour des incisives supérieures et fixez l’autre extrémité à un support supérieur sans appliquer de tension. Placez ensuite un deuxième élastique orthodontique autour des incisives inférieures et fixez-le à un support inférieur à l’aide d’un élastique. Insérez maintenant les séparateurs de joues et déplacez délicatement la languette d’un côté pour améliorer la visibilité. Positionnez le microscope de manière à visualiser les molaires supérieures à l’aide de l’objectif de grossissement le plus faible. Une fois localisé, grossissement augmenté pour optimiser le confort et la mise au point de l’opérateur. Lorsque l’image est claire, identifiez la molaire la plus grande et proximale M1, la molaire suivante M2 et la plus petite molaire distale M3. Utilisez une suture en nylon 6-0 pour la mise en place de la ligature, car elle cause moins de dommages mécaniques que les sutures plus larges. À l’aide d’une pince à tissus, tenez l’extrémité distale de la suture en nylon 6-0 et placez-la à la base de la papille du côté palatin au niveau distal de M2. Appliquez une légère pression à travers la base de l’espace palatin interproximal pour le faire avancer vers la surface buccale. Lorsque la suture se croise, tirez-la à travers l’espace interproximal vers le côté buccal. Maintenant, placez l’extrémité de la suture à la base de la zone interproximale à la surface mésiale de M2 du côté buccal. Poussez-le doucement pour traverser l’espace interproximal et repassez-le par l’espace buccal jusqu’au palatin. Tirez doucement sur la suture en nylon 6-0. Tenez l’embout avec une pince à tissu ajustée autour de M2 et fixez la suture à l’aide de trois nœuds simples. Coupez ensuite la suture avec des ciseaux fins. Pour libérer la souris, retirez d’abord l’élastique autour des incisives inférieures, puis les séparateurs de joues. Retirez ensuite l’élastique autour des incisives supérieures et le ruban microporeux des jambes. Retirez maintenant la souris de la table de travail et gardez la langue d’un côté pour maintenir les voies respiratoires ouvertes et éviter le blocage. Enveloppez la souris dans de la gaze ou un chiffon et placez-la face vers le haut. Gardez l’animal au chaud, recouvert d’un chiffon ou d’une gaze, et sous observation jusqu’à ce qu’il soit complètement réveillé. Appliquez une goutte d’hypromellose dans chaque œil jusqu’à ce que la souris puisse cligner normalement. Ensuite, remettez-le dans sa cage habituelle. Pour vérifier la permanence de la ligature, prenez la souris. Tenez fermement sa tête et son corps et utilisez des pinces à tissus pour ouvrir la bouche. Sous la lumière de la lampe, observez la suture en nylon 6-0 autour de M2. Pour confirmer la formation d’un biofilm à l’aide de l’histologie, prélever les maxilli des animaux euthanasiés après 30 jours. Lavez les mouchoirs dans une solution de chlorure de sodium à 0,9 % et placez-les dans des tubes de microcentrifugation étiquetés. Fixer les échantillons dans une solution de paraformaldéhyde à 4 % pendant deux heures sous agitation. Ensuite, lavez les échantillons fixés à l’eau du robinet pendant deux heures. Ensuite, détartrez les échantillons en 20 volumes d’EDTA à 4 % à pH 7,3 pendant 20 jours, en changeant l’EDTA tous les quatre jours. Ensuite, intégrez les échantillons dans de la paraffine. Découpez cinq sections micrométriques de la zone M2 et colorez-les avec de l’hématoxyline et de l’éosine. Observez les coupes colorées au microscope optique pour décrire les changements dans l’épithélium du sillon, les fibres gingivales et parodontales, la hauteur et l’intégrité de la crête alvéolaire. Mesurez la perte d’attachement en déterminant la distance entre la jonction de l’émail cemento et le point le plus élevé de la crête osseuse à l’aide d’un programme d’édition numérique. Après l’analyse histométrique, analysez les données des groupes témoins et de traitement parodontal à l’aide du test U de Mann-Whitney. La parodontite induit une perte de tissu chez la souris, une inflammation, des saignements et la formation de poches parodontales au bord gingival au 30e jour, contrairement au groupe témoin. L’analyse histologique a confirmé des lésions structurelles importantes dans le groupe PT, avec présence de poches parodontales, détachement de fibres et migration apicale de l’épithélium. Une perte de noyaux cellulaires dans la gencive et l’os des côtés buccal et palatin a également été observée. En revanche, le groupe CTL a montré une histologie saine. L’analyse quantitative a révélé une augmentation significative de la perte d’attachement dans le groupe PT, avec une perte du côté buccal à environ 209 micromètres et du côté palatin à environ 254 micromètres.