Name: Prédiction de la signification des anticorps anti-globules rouges à l’aide du dosage des monocytes-macrophages (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:40:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: Découvrez le dosage des monocytes-macrophages pour prédire la signification clinique des anticorps anti-globules rouges en médecine transfusionnelle. Cette méthode améliore la sensibilité par rapport au test classique.

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<ol><li>Tong, T. N., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+monocyte+monolayer+assay+to+evaluate+Fc%CE%B3+receptor-mediated+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Use of a monocyte monolayer assay to evaluate Fcγ receptor-mediated phagocytosis.</a> J Vis Exp. (119), e55039(2017).</li>
<li>Tong, T. N., Cen, S., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocyte+monolayer+assay%3A+Past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus+Med+Rev%22%5BJournal%5D)">The monocyte monolayer assay: Past, present and future.</a> Transfus Med Rev. 33 (1), 24-28 (2019).</li>
<li>Frias Boligan, K., Sandhu, G., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+evaluate+the+potential+clinical+significance+of+antibodies+to+red+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">Methods to evaluate the potential clinical significance of antibodies to red blood cells.</a> Curr Protoc. 2 (8), e504(2022).</li>
<li>Lemay, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+first+case+of+severe+acute+hemolytic+transfusion+reaction+caused+by+anti-Sc2%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The first case of severe acute hemolytic transfusion reaction caused by anti-Sc2.</a> Transfusion. 58 (11), 2506-2512 (2018).</li>
<li>Tong, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+a+monocyte+monolayer+assay+in+the+assessment+of+intravenous+immunoglobulin-associated+hemolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The utility of a monocyte monolayer assay in the assessment of intravenous immunoglobulin-associated hemolysis.</a> Transfusion. 60 (12), 3010-3018 (2020).</li>
<li>Srivastava, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCAR%3A+the+high-prevalence+antigen+013.008+in+the+Scianna+blood+group+system%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">SCAR: the high-prevalence antigen 013.008 in the Scianna blood group system.</a> Transfusion. 61 (1), 246-254 (2021).</li>
<li>Branch, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentially+clinically+significant+anti-Dib+identified+by+monocyte+monolayer+assay+before+transfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Potentially clinically significant anti-Dib identified by monocyte monolayer assay before transfusion.</a> Transfusion. 61 (1), 331-332 (2021).</li>
<li>Italiani, P., Boraschi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+monocytes+to+M1%2FM2+macrophages%3A+Phenotypical+vs.+functional+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">From monocytes to M1/M2 macrophages: Phenotypical vs. functional differentiation.</a> Front Immunol. 5, 514(2014).</li>
<li>Mills, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M1+and+M2+macrophages%3A+Oracles+of+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">M1 and M2 macrophages: Oracles of health and disease.</a> Crit Rev Immunol. 32 (6), 463-488 (2012).</li>
<li>Atri, C., Guerfali, F. Z., Laouini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+human+macrophage+polarization+in+inflammation+during+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Role of human macrophage polarization in inflammation during infectious diseases.</a> Int J Mol Sci. 19 (6), 1801(2018).</li>
<li>Bertani, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+M1%2FM2-polarized+human+macrophages+by+label-free+hyperspectral+reflectance+confocal+microscopy+and+multivariate+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Classification of M1/M2-polarized human macrophages by label-free hyperspectral reflectance confocal microscopy and multivariate analysis.</a> Sci Rep. 7, 8965(2017).</li>
<li>Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li>
<li>Cohn, C., Delaney, M., Johnson, S. T., Katz, L. M., Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCohn%2C+C+%22Technical+Manual%22">Technical Manual</a>. , 21st Ed, American Association for the Advancement of Blood and Biotherapeutics. Maryland, USA. (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1X PBS, pH 7,4, sans Ca2+/Mg2+</td><td>Wisent Bioproducts&nbsp ;</td><td>311-425-CL</td><td>Conserver à 4 degrés ou à température ambiante</td></tr><tr><td>AccutaseTM</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp ;</td><td>7920</td><td>Solution de détachement cellulaire</td></tr><tr><td>Tampon de lyse ACK&nbsp ;</td><td>Technologies STEMCELL&nbsp ;</td><td>07850, 07800</td><td>Conserver à 4 degrés</td></tr><tr><td>Anti-Globuline Humaine</td><td>NOVACLONE, Immunocor.&nbsp ;</td><td>N/A</td><td>NOVACLONE Anti-igG pour les tests IAT&nbsp ;</td></tr><tr><td>Anti-Rh(D) (WinRho. SDF CDN)</td><td>Saol Therapeutics&nbsp ;</td><td>1003092</td><td>Toute source commerciale de globine immunitaire Rh suffira.</td></tr><tr><td>Racleur de cellules</td><td>UofT Medstore</td><td>83.395</td> détachement <td>de cellules&nbsp ;</td></tr><tr><td>Filtre à cellules 70uM nylon</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td>filtre de cellules&nbsp ;</td></tr><tr><td>Diapositive de chambre Nunc. Lab-TekTM II avec couvercle, lame de verre RS</td> stérile<td>Thermo Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>154534</td><td>lames de chambre pour MMA&nbsp ;</td></tr><tr><td>Couvre-filets&nbsp ;</td><td>VWR</td><td>48393-081</td><td>24 x 50 mm</td></tr><tr><td>Cytiva Ficoll Paque Plus, densité 1,077 g/L</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>17-1440-03</td><td>Séparation des PBMCS du sang total ; gradient de densité moyen</td></tr><tr><td>Elvanol Support de montage</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Dulbecco' s PBS (D-PBS) sans Ca2+/Mg2+, 15 % (p/v) de résine polyvinylique et 30 % (v/v) de glycérine.</td></tr><tr><td>Sang total frais (sonde ACD) ou couche leucocytaire</td> Services <td></td><td>canadiens du sang</td><td>Peut se reposer à température ambiante jusqu’à 36 heures.</td></tr><tr>Cellules souches <td>humaines recombinantes GM-CSF</td><td>Technologies&nbsp ;</td><td>78015.1</td><td>Cytokine pour la polarisation des macrophages M1</td></tr><tr><td>Humains Recombinant IFN-gamma</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp ;</td><td>78020</td><td>Cytokine pour la polarisation des macrophages M1</td></tr><tr><td>Human Recombinant IL-4</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp ;</td><td>78045.1</td><td>Cytokine pour la polarisation des macrophages M2</td></tr><tr><td>Recombinant humain M-CSF</td><td>Stemcell Technologies&nbsp ;</td><td>78057.1</td><td>Cytokine pour la polarisation des macrophages M2</td></tr><tr><td>ID-CellStab</td><td>Bio-Rad</td><td>005650 05740 Solution</td> de <td>stockage/stabilisation des cellules de globules rouges&nbsp ;</td></tr><tr><td>Milieu d’isolation&nbsp ;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>PBS Ca2+ et Mg2+ libres + FBS 2 % + 1mM EDTA</td></tr><tr><td>Lipopolysaaracide (LPS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L3024-5MG</td><td>Cytokine pour la polarisation des macrophages M1</td></tr><tr><td>Méthanol (100 %)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Fixation des lames&nbsp ;</td></tr><tr><td>Kit d’isolement des monocytes STEM-cells EasySep Kit d’enrichissement des monocytes humains sans déplétion en CD16&nbsp ;</td><td>Technologies STEMCELL&nbsp ;</td><td>19058</td><td>Isolement des monocytes à partir de PBMC</td></tr><tr><td>Poly-D-ysine&nbsp ;</td><td>Medstore de l’Université de Toronto&nbsp ;</td><td>P6407</td><td>Solution de fixation de cellules&nbsp ;</td></tr><tr><td>Rh(D) positif R2R2 GR</td><td>Société canadienne du sang</td><td>S.O. Également</td><td>disponible dans le commerce</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Wisent Bioproducts.</td><td>350-000-CL</td><td>complété par 10 % de FBS inactivé par la chaleur, 1 mM de supplément GlutaMAX, 1 mM HEPES et 1 % de pénicilline/streptomycine. Conserver à 4 degrés.&nbsp ;</td></tr><tr><td>Trypan Blue solution&nbsp ;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>15250061</td><td>Solution de comptage cellulaire&nbsp ;</td></tr></tbody></table>

prédiction de la signification des anticorps anti-globules rouges à l’aide du dosage des monocytes-macrophages

Prediction of Red Blood Cell Antibody Significance Using the Monocyte-Macrophage Assay

Les résultats de la figure 1 sont cohérents avec la littérature et indiquent une polarisation réussie des macrophages de leur état M0 à leur état M1/M2 ultérieur. Les macrophages M1 et M2 ont été cultivés pendant 8 jours (6 jours avec des facteurs de croissance et 2 jours de polarisation), et des globules rouges anti-D ou anti-k ont été testés (Figure 2). Les macrophages M2 présentent un indice phagocytaire élevé par rapport aux M1 avec des glob...

Prédiction de la signification des anticorps anti-globules rouges à l’aide du dosage des monocytes-macrophages

Derived from monocytes in the bone marrow, macrophages are large, innate immune cells that play a major role in clearing dead cells, debris, tumor cells, ...

prediction-red-blood-cell-antibody-significance-using-monocyte

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Cette vidéo présente un test monocouche de monocytes utilisant des monocytes primaires du sang périphérique pour évaluer la phagocytose médiée par le récepteur Fcγ avec des globules rouges R2R2 opsonisés par anticorps poly D.

Un test pour l’étude de la phagocytose induite par le récepteur Fcγ dans les monocouches de monocytes

Macrophages dérivés de monocytes sont des cellules importantes du système immunitaire inné. Ici, nous décrivons un outil facile à...

Une<em&gt; In vitro</em&gt; Modèle pour étudier l&#39;hétérogénéité de la différenciation des macrophages humains et de la polarisation

Ce protocole décrit l’utilisation de la spectrométrie de masse MALDI-TOF à cellules entières sur des cellules eucaryotes. Ici, nous illustrons la précision de cette technique en analysant les multiples états d’activation des macrophages en réponse à leur microenvironnement.

La spectrométrie de masse MALDI-TOF à cellules entières est une méthode précise et rapide pour analyser différents modes d’activation des macrophages

Nous décrivons ici deux dosages pour mesurer l'activation du complément induite par des anticorps contre les globules rouges. L'avantage majeur sur les tests actuels est leur nature quantitative et facile à interpréter.

Les méthodes de détection quantitative d&#39;anticorps induite par l&#39;activation du complément sur les globules rouges

Nous présentons un protocole simple et efficace pour la production de macrophages humains. Les couches leucocytaires sont traitées en double centrifugation en gradient de densité et les monocytes isolés sont ensuite différenciées en macrophages en culture cellulaire sacs de téflon. Ceci maximise les rendements des macrophages et facilite la récolte de cellules pour des expériences ultérieures.

Isolement des monocytes humains par double centrifugation en gradient et leur différenciation en macrophages en téflon de culture cellulaire Sacs

Le dosage monocouche de monocytes (MMA) est un dosage in vitro qui utilise des monocytes primaires isolés obtenus à partir de sang total périphérique de mammifère pour évaluer la phagocytose médiée par le récepteur Fcγ (FcγR).

Utilisation d&#39;un monocytes monocouche Assay pour évaluer phagocytose Fcy Receptor médiée

Ce protocole fournit une analyse des sous-populations de macrophages dans le système nerveux central de souris par cytométrie de flux et est utile pour l'étude de marqueurs multiples exprimés par ces cellules.

Analyse de la microglie et des macrophages dérivés de monocytes du système nerveux central par cytométrie de flux

Nous présentons ici un protocole pour caractériser les sous-ensembles de monocyte par cytométrie en flux de sang. Cela inclut décrivant comment les sous-ensembles de la porte et évaluer leur expression de marqueurs de surface et donne un exemple de l’évaluation de l’expression des marqueurs de M2 (anti-inflammatoire) et de M1 (inflammatoire).

Caractérisation des sous-ensembles de Monocyte humain de sang Flow Cytometry analyse

Ici nous présentons un protocole pour quantifier l'activité chimiotactique des monocytes sanguins dans les modèles de souris, pour évaluer les effets des interventions nutritionnelles, pharmacologiques et génétiques sur le monocyte sanguin et pour caractériser les macrophages dérivés des monocytes sanguins dans modèles de souris utilisant des bouchons de gel dérivés de la membrane de membrane de membrane de sous-sol monocyte-chemoattractant-1 (MCP-1).

Quantification de l'activité chimiotactique monocyte in Vivo et caractérisation des macrophages dérivés du monocyte sanguin

L’utilisation de réactifs de référence pour les tests de libération de cytokines permet d’obtenir des profils d’innocuité in vitro plus reproductibles et standardisés des anticorps monoclonaux immunothérapeutiques. Nous décrivons ici comment les tests de libération de cytokines peuvent être utilisés avec un panel de réactifs de référence pour prédire l’innocuité de certains anticorps monoclonaux thérapeutiques.

Utilisation de réactifs de référence pour confirmer la robustesse des tests de libération de cytokines pour la prédiction de l’innocuité des anticorps monoclonaux

Les monocytes et les macrophages sont des cellules immunitaires très plastiques et reprogrammables cruciales pour la santé et la maladie. Ils détectent et répondent à un large éventail de stimuli en adoptant des programmes de différenciation et des phénotypes spécifiques. Nous avons normalisé un modèle in vitro pour étudier la polarisation et la reprogrammation des macrophages, ce qui constitue un outil précieux pour la recherche.

Reprogrammation d’un modèle de macrophages dérivés de monocytes humains pour des essais in vitro

Découvrez le dosage des monocytes-macrophages pour prédire la signification clinique des anticorps anti-globules rouges en médecine transfusionnelle. Cette méthode améliore la sensibilité par rapport au test classique.

Prédiction de la signification des anticorps anti-globules rouges à l’aide du dosage des monocytes-macrophages

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