Name: Isolement rapide de vésicules extracellulaires dérivées du lait maternel humain (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T12:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 35 s
Description: Apprenez une méthode rapide d'isolation de vésicules extracellulaires à partir de lait maternel humain. Cette technique réduit le temps nécessaire par rapport à l'ultracentrifugation tout en préservant la concentration et la taille des particules pour des applications thérapeutiques.

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<ol><li>Galley, J. D., Besner, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+potential+of+breast+milk-derived+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">The therapeutic potential of breast milk-derived extracellular vesicles.</a> Nutrients. 12 (3), 745(2020).</li>
<li>Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+milk-derived+exosomes+attenuate+cell+death+in+intestinal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Human breast milk-derived exosomes attenuate cell death in intestinal epithelial cells.</a> Innate Immun. 24 (5), 278-284 (2018).</li>
<li>Hock, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+milk-derived+exosomes+promote+intestinal+epithelial+cell+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Breast milk-derived exosomes promote intestinal epithelial cell growth.</a> J Pediatr Surg. 52 (5), 755-759 (2017).</li>
<li>Alexander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-delivered+microRNAs+modulate+the+inflammatory+response+to+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Exosome-delivered microRNAs modulate the inflammatory response to endotoxin.</a> Nat Commun. 6, 7321(2015).</li>
<li>Lasser, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+saliva%2C+plasma%2C+and+breast+milk+exosomes+contain+RNA%3A+Uptake+by+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Human saliva, plasma, and breast milk exosomes contain RNA: Uptake by macrophages.</a> J Transl Med. 9, 9(2011).</li>
<li>Chan, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+interferon+sensing+unlocks+dormant+adipocyte+inflammatory+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Type I interferon sensing unlocks dormant adipocyte inflammatory potential.</a> Nat Commun. 11 (1), 2745(2020).</li>
<li>Miyake, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+milk+exosomes+attenuate+intestinal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Surg+Int%22%5BJournal%5D)">Human breast milk exosomes attenuate intestinal damage.</a> Pediatr Surg Int. 36 (2), 155-163 (2020).</li>
<li>Gao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+isolating+methods+for+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Recent developments in isolating methods for exosomes.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 1100892(2022).</li>
<li>Patel, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+exosome+isolation+methods+using+culture+supernatant+for+optimum+yield%2C+purity+and+downstream+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of exosome isolation methods using culture supernatant for optimum yield, purity and downstream applications.</a> Sci Rep. 9 (1), 5335(2019).</li>
<li>Gandhi, J., Naik, M. N., Mishra, D. K., Joseph, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+profiling+of+Aspergillus+flavus+endophthalmitis-derived+extracellular+vesicles+in+an+in+vivo+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Mycol%22%5BJournal%5D)">Proteomic profiling of Aspergillus flavus endophthalmitis-derived extracellular vesicles in an in vivo murine model.</a> Med Mycol. 60 (9), myac064(2022).</li>
<li>Palinski, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+purinergic+receptor+p2x4+regulates+neoangiogenesis+induced+by+microvesicles+from+sarcoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Lysosome purinergic receptor p2x4 regulates neoangiogenesis induced by microvesicles from sarcoma patients.</a> Cell Death Dis. 12 (9), 797(2021).</li>
<li>Tantengco, O. aG., Radnaa, E., Shahin, H., Kechichian, T., Menon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross+talk%3A+Trafficking+and+functional+impact+of+maternal+exosomes+at+the+feto-maternal+interface+under+normal+and+pathologic+statesdagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Cross talk: Trafficking and functional impact of maternal exosomes at the feto-maternal interface under normal and pathologic statesdagger.</a> Biol Reprod. 105 (6), 15621576(2021).</li>
<li>Caruso Bavisotto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomal+hsp60%3A+A+potentially+useful+biomarker+for+diagnosis%2C+assessing+prognosis%2C+and+monitoring+response+to+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">Exosomal hsp60: A potentially useful biomarker for diagnosis, assessing prognosis, and monitoring response to treatment.</a> Expert Rev Mol Diagn. 17 (9), 815-822 (2017).</li>
<li>Feng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latest+trend+of+milk-derived+exosomes%3A+Cargos%2C+functions%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Nutr%22%5BJournal%5D)">Latest trend of milk-derived exosomes: Cargos, functions, and applications.</a> Front Nutr. 8, 747294(2021).</li>
<li>Li, P., Kaslan, M., Lee, S. H., Yao, J., Gao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+exosome+isolation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Progress in exosome isolation techniques.</a> Theranostics. 7 (3), 789-804 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>(H+L) Anti-souris conjugué HRP</td><td>Bio-Rad</td><td>1721011</td><td></td></tr><tr><td>(H+L) Anti-lapin conjugué HRP</td><td>Bio-Rad</td><td>1706515</td><td></td></tr><tr><td>Filtre à seringue 0,20</td><td>Fisherbrand</td><td>09-719C</td><td></td></tr><tr><td>Filtre à cellules μm 0,70</td><td>Corning</td><td>431751</td><td></td></tr><tr><td>1,5 million Tris HCL</td><td>Fabriqué en interne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubes de 15 mL</td><td>Faucon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Ensemble d’extension de filtre 16 pouces</td><td>B-BRAUN</td><td>FE2012F</td><td></td></tr><tr><td>1M Tris HCL</td><td>Teknova</td><td>T1068</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-031</td><td></td></tr><tr><td>Tubes de 50 mL</td><td>Faucon</td><td>353070</td><td></td></tr><tr><td>Tampon d’échantillon 5 fois réducteur</td><td>Thermo Scientific</td><td>39000</td><td></td></tr><tr><td>Acylamide</td><td>Fisher Scientifc&nbsp ;</td><td>BP1410-1</td><td></td></tr><tr><td>Amphotéricine B</td><td>Gibco</td><td>15290-018</td><td></td></tr><tr><td>Appareil photo AMT NanoSprint43 Mark-II</td><td>AMT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Anti</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD63</td><td>Novusbio</td><td>NBP2-32830</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD9</td><td>Invitrogen</td><td>10626D</td><td></td></tr><tr><td>APS</td><td>Thermo Scientific</td><td>17874</td><td></td></tr><tr><td>Kit de test protéique BCA</td><td>Pierce</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Tubes Beckman</td><td>Beckman coulter&nbsp ;</td><td>344059</td><td></td></tr><tr><td>BrightStar ECL Chimiluminescent</td><td>Alkali Scientific</td><td>XR92</td><td></td></tr><tr><td>FBS épuisé par les exosomes</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0464480</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de blocage rapide</td><td>Pierce</td><td>37575</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>Technologies de vie</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>Hsp70</td><td>Invitrogen</td><td>MA3-006</td><td></td></tr><tr><td>Insuline humaine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>Peroxyde d’hydrogène</td><td>Fisher Scientific</td><td>H325-500</td><td></td></tr><tr><td>IEC-6&nbsp ;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1592</td><td></td></tr><tr><td>JEOL 1400 FLASH TEM</td><td>JEOL USA Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tampon d’échantillon de réduction du marqueur de voie</td><td>Thermo Scientific</td><td>39000</td><td></td></tr><tr><td>Lait en poudre</td><td>Bioworld</td><td>30620074-1</td><td></td></tr><tr><td>Nanosight NS 300</td><td>Malvern Instruments Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Membrane de nitrocellulose</td><td>Technologies de vie</td><td>88018</td><td></td></tr><tr><td>Appareil de décharge PELCO easiGlow</td><td>Ted Pella</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini-comprimés inhibiteurs de protéase</td><td>Pierce</td><td>A32955</td><td></td></tr><tr><td>Tampon RIPA</td><td>Pierce</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Fisher Scientifc&nbsp ;</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>Fisher Scientifc&nbsp ;</td><td>BP2436-200</td><td></td></tr><tr><td>Flasque T-25</td><td>Thermo Scientific</td><td>156367</td><td></td></tr><tr><td>TBS</td><td>Fabriqué en interne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0801</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine EDTA</td><td>Gibso</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Préadolescent 20</td><td>Thermo Scientific</td><td>J20605-AP</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement rapide de vésicules extracellulaires dérivées du lait maternel humain

Rapid Isolation of Human Breast Milk-Derived Extracellular Vesicles

Isolement rapide de vésicules extracellulaires dérivées du lait maternel humain

Extracellular vesicles (EVs), nanosized particles approximately 20-1000 nm in size, are rapidly garnering attention for their therapeutic potential. ...

rapid-isolation-of-human-breast-milk-derived-extracellular-vesicles

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Source : Watson, D. C., et.al. Isolement et purification évolutifs des vésicules extracellulaires d’Escherichia coli et d’autres bactéries. J. Vis. Exp. (2021)Cette vidéo démontre l’isolement et la concentration de vésicules extracellulaires (VE) dérivées de la membrane externe de bactéries génétiquement modifiées. Le processus implique la culture des bactéries pour libérer des VE, suivie d’étapes de centrifugation et de filtration séquentielles pour éliminer les cellules et les débris. Enfin,...

Isolement et enrichissement de vésicules extracellulaires dérivées de la membrane externe à partir de bactéries

Source: DeMarino, C., et al. Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus. J. Vis. Exp. (2019)The video demonstrates the separation of EVs from virions and other contaminants by density gradient centrifugation, followed by capture and concentration with hydrogel nanoparticles. Washed fractions are then ready for downstream identification of those enriched in EVs.

Separation and Enrichment of Extracellular Vesicles in the Presence of Virions

Ce protocole décrit en détail une méthode pour isoler des vésicules extracellulaires (VE), de petites particules libérées par des cellules membranaires, d'aussi peu que 10 échantillons de sérum ul. Cette approche évite la nécessité d'ultracentrifugation, ne nécessite que quelques minutes de temps de dosage, et permet l'isolement des véhicules électriques à partir d'échantillons de volumes limités.

Dispositifs à base de papier pour l&#39;isolement et la caractérisation de vésicules extracellulaire

Ce protocole décrit des méthodes pour purifier, quantifier et caractériser les vésicules extracellulaires (EV) / les exosomes provenant de cellules épithéliales mammaires non adhérentes / mésenchymateuses et pour les utiliser pour transférer la capacité de formation de glandes mammaires aux cellules épithéliales mammaires luminescentes. Les EV / exosomes dérivés de cellules épithéliales mammaires de type tige peuvent transférer cette propriété cellulaire vers des cellules qui ingerent les EV /...

Transfert de la capacité de formation des glandes mammaires entre les cellules épithéliales basales mammaires et les cellules luminesnelles mammaires par des vésicules extracellulaires / des exosomes

Nous décrivons ici les deux protocoles d’isolement vésicule extracellulaire, centrifugation d’ultrafiltration et ultracentrifugation avec centrifugation en gradient de densité, d’isoler des vésicules extracellulaires des échantillons de liquide de lavage broncho-alvéolaire murine. Les vésicules extracellulaires dérivés du murin de lavage bronchoalvéolaire par ces deux méthodes sont quantifiés et caractérisés.

Isolement des vésicules extracellulaires du murin lavage broncho-alvéolaire fluide à l’aide d’une Technique de Centrifugation de l’Ultrafiltration

Une procédure étape par étape est décrite pour l'immobilisation sans étiquette des exosomes et des vésicules extracellulaires à partir d'échantillons liquides et leur imagerie par microscopie de force atomique (AFM). Les images de l'AFM sont utilisées pour estimer la taille des vésicules de la solution et caractériser d'autres propriétés biophysiques.

Imagerie des vésicules extracellulaires par microscopie de force atomique

Ce protocole isole les vésicules extracellulaires (VE) loin des virions à haut rendement et à haut rendement en incorporant les précipitations EV, l'ultracentrifugation du gradient de densité et la capture des particules pour permettre un flux de travail rationalisé et une réduction du démarrage volumes, ce qui entraîne des préparations reproductibles pour une utilisation dans toutes les recherches sur les véhicules électriques.

Purification des préparations extracellulaires de vésicule à haut rendement loin du virus

Le protocole démontre ici que les vésicules extracellulaires peuvent être séparées de manière adéquate des milieux de culture cellulaire conditionnés en utilisant la chromatographie d’exclusion de taille.

Chromatographie d’exclusion de taille pour séparer les vésicules extracellulaires des milieux de culture cellulaire conditionnés

Ce protocole montre comment isoler les petites vésicules extracellulaires des cellules souches mésenchymateuses dérivées du cordon ombilical humain (hUC-MSC-sEVs) avec un simple réglage de paillasse à l’échelle du laboratoire. La distribution granulométrique, la concentration en protéines, les marqueurs de sEVs et la morphologie des hUC-MSC-sEVs isolés sont caractérisés par l’analyse de suivi des nanoparticules, le dosage de la protéine BCA, le transfert Western et le microscope électronique à...

Une méthode de filtration de paillasse simple pour isoler de petites vésicules extracellulaires à partir de cellules souches mésenchymateuses humaines

Cette étude décrit une méthode permettant d’isoler et de purifier les vésicules extracellulaires bactériennes (VEB) enrichies à partir de matières fécales humaines par centrifugation à gradient de densité (DGC), identifie les caractéristiques physiques des VEB à partir de la morphologie, de la taille des particules et de la concentration, et discute des applications potentielles de l’approche DGC dans la recherche clinique et scientifique.

Isolement et purification de vésicules extracellulaires bactériennes à partir de matières fécales humaines à l’aide d’une centrifugation à gradient de densité

Apprenez une méthode rapide d'isolation de vésicules extracellulaires à partir de lait maternel humain. Cette technique réduit le temps nécessaire par rapport à l'ultracentrifugation tout en préservant la concentration et la taille des particules pour des applications thérapeutiques.

Isolement rapide de vésicules extracellulaires dérivées du lait maternel humain

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