Name: Traitement isolé des îlots pancréatiques et mesure de l’apoptose (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T13:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: Découvrez le traitement isolé des îlots pancréatiques et la mesure de l'apoptose par microscopie confocale à fluorescence multiple. Cette méthode révèle les mécanismes de mort cellulaire dans le diabète de type 1.

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<ol><li>Da Silva Xavier, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cells+of+the+islets+of+Langerhans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clinical+medicine%22%5BJournal%5D)">The cells of the islets of Langerhans.</a> J Clinical medicine. 7 (3), 54(2018).</li>
<li>Grunnet, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proinflammatory+cytokines+activate+the+intrinsic+apoptotic+pathway+in+%CE%B2-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Proinflammatory cytokines activate the intrinsic apoptotic pathway in β-cells.</a> Diabetes. 58 (8), 1807-1815 (2009).</li>
<li>Delaney, C. A., Pavlovic, D., Hoorens, A., Pipeleers, D. G., Eizirik, D. cL. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+induce+deoxyribonucleic+acid+strand+breaks+and+apoptosis+in+human+pancreatic+islet+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Cytokines induce deoxyribonucleic acid strand breaks and apoptosis in human pancreatic islet cells.</a> Endocrinology. 138 (6), 2610-2614 (1997).</li>
<li>Farnsworth, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+gap+junction+coupling+within+the+islet+of+langerhans+during+the+development+of+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of gap junction coupling within the islet of langerhans during the development of type 1 diabetes.</a> Front Physiol. 13, 913611(2022).</li>
<li>Collins, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleavage+of+protein+kinase+c+%CE%B4+by+caspase-3+mediates+proinflammatory+cytokine-induced+apoptosis+in+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Cleavage of protein kinase c δ by caspase-3 mediates proinflammatory cytokine-induced apoptosis in pancreatic islets.</a> J Biol Chem. 300 (9), 107611(2024).</li>
<li>Farnsworth, N. L., Walter, R., Piscopio, R. A., Schleicher, W. E., Benninger, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exendin-4+overcomes+cytokine-induced+decreases+in+gap+junction+coupling+via+protein+kinase+A+and+Epac2+in+mouse+and+human+islets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Exendin-4 overcomes cytokine-induced decreases in gap junction coupling via protein kinase A and Epac2 in mouse and human islets.</a> J Physiol. 597 (2), 431-447 (2019).</li>
<li>NIH CIT Consortium Chemistry Manufacturing Controls Monitoring Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purified+human+pancreatic+islet-viability+estimation+of+islet+using+fluorescent+dyes+%28FDA%2FPI%29%3A+Standard+operating+procedure+of+the+NIH+clinical+islet+transplantation+consortium%5BTitle%5D)+AND+%22CellR4+Repair+Replace+Regen+Reprogram%22%5BJournal%5D)">Purified human pancreatic islet-viability estimation of islet using fluorescent dyes (FDA/PI): Standard operating procedure of the NIH clinical islet transplantation consortium.</a> CellR4 Repair Replace Regen Reprogram. 3 (1), e1378(2015).</li>
<li>Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H., Reutellingsperger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+assay+for+apoptosis+flow+cytometric+detection+of+phosphatidylserine+expression+on+early+apoptotic+cells+using+fluorescein+labelled+annexin+V%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Meth%22%5BJournal%5D)">A novel assay for apoptosis flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled annexin V.</a> J Immunol Meth. 184 (1), 39-51 (1995).</li>
<li>Rieger, A. M., Nelson, K. L., Konowalchuk, J. D., Barreda, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+annexin+V%2Fpropidium+iodide+apoptosis+assay+for+accurate+assessment+of+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Modified annexin V/propidium iodide apoptosis assay for accurate assessment of cell death.</a> J Vis Exp. (50), e2597(2011).</li>
<li>Emdin, S., Dodson, G., Cutfield, J., Cutfield, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+zinc+in+insulin+biosynthesis%3A+some+possible+zinc-insulin+interactions+in+the+pancreatic+B-cell%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Role of zinc in insulin biosynthesis: some possible zinc-insulin interactions in the pancreatic B-cell.</a> Diabetologia. 19, 174-182 (1980).</li>
<li>ZA, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+staining+fresh+and+cultured+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A simple method of staining fresh and cultured islets.</a> Transplantation. 45 (4), 827-830 (1988).</li>
<li>Zalewski, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Video+image+analysis+of+labile+zinc+in+viable+pancreatic+islet+cells+using+a+specific+fluorescent+probe+for+zinc%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Video image analysis of labile zinc in viable pancreatic islet cells using a specific fluorescent probe for zinc.</a> J Histochem Cytochem. 42 (7), 877-884 (1994).</li>
<li>Jindal, R. M., Taylor, R. P., Gray, D. W., Esmeraldo, R., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+quantification+of+islets+by+measurement+of+zinc+content%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">A new method for quantification of islets by measurement of zinc content.</a> Diabetes. 41 (9), 1056-1062 (1992).</li>
<li>Jayaraman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+the+detection+of+viable+human+pancreatic+beta+cells+by+flow+cytometry+using+fluorophores+that+selectively+detect+labile+zinc%2C+mitochondrial+membrane+potential+and+protein+thiols%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">A novel method for the detection of viable human pancreatic beta cells by flow cytometry using fluorophores that selectively detect labile zinc, mitochondrial membrane potential and protein thiols.</a> Cytometry A. 73 (7), 615-625 (2008).</li>
<li>Lukowiak, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+purification+of+functional+human+%CE%B2-cells+by+a+new+specific+zinc-fluorescent+probe%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Identification and purification of functional human β-cells by a new specific zinc-fluorescent probe.</a> J Histochem Cytochem. 49 (4), 519-527 (2001).</li>
<li>Gee, K. R., Zhou, Z. L., Qian, W. J., Kennedy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+imaging+of+zinc+secretion+from+pancreatic+%CE%B2-cells+using+a+new+fluorescent+zinc+indicator%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Detection and imaging of zinc secretion from pancreatic β-cells using a new fluorescent zinc indicator.</a> J Am Chem Soc. 124 (5), 776-778 (2002).</li>
<li>Gyulkhandanyan, A. V., Lee, S. C., Bikopoulos, G., Dai, F., Wheeler, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Zn2%2B-transporting+pathways+in+pancreatic+%CE%B2-cells%3A+a+role+for+the+L-type+voltage-gated+Ca2%2B+channel%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The Zn2+-transporting pathways in pancreatic β-cells: a role for the L-type voltage-gated Ca2+ channel.</a> J Biol Chem. 281 (14), 9361-9372 (2006).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+pancreatic+islet+cell-based+screening+for+diabetogenic+environmental+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A murine pancreatic islet cell-based screening for diabetogenic environmental chemicals.</a> J Vis Exp. (136), e57327(2018).</li>
<li>Farnsworth, N. L., Walter, R. L., Hemmati, A., Westacott, M. J., Benninger, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+level+pro-inflammatory+cytokines+decrease+connexin36+gap+junction+coupling+in+mouse+and+human+islets+through+nitric+oxide-mediated+protein+kinase+C%CE%B4%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Low level pro-inflammatory cytokines decrease connexin36 gap junction coupling in mouse and human islets through nitric oxide-mediated protein kinase Cδ.</a> J Biol Chem. 291 (7), 3184-3196 (2016).</li>
<li>Dalle, S., Abderrahmani, A., Renard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+inhibitors+of+%CE%B2-cell+dysfunction+and+death+as+therapeutics+for+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Pharmacological inhibitors of β-cell dysfunction and death as therapeutics for diabetes.</a> Front Endocrinol. 14, 1076343(2023).</li>
<li>Collins, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide-coated+polycaprolactone-Benzalkonium+chloride+nanocapsules+for+targeted+drug+delivery+to+the+pancreatic+%CE%B2-Cell%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Bio+Mater%22%5BJournal%5D)">Peptide-coated polycaprolactone-Benzalkonium chloride nanocapsules for targeted drug delivery to the pancreatic β-Cell.</a> ACS Appl Bio Mater. 7 (10), 6451-6466 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Boîte de Pétri à fond en verre de 14 mm</td><td>Mattek</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td></td></tr><tr><td>1640 RPMI</td><td>Corning</td><td>10-041-CV</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de Pétri de 35 mm</td><td>Celltreat</td><td>229638</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de Pétri à fond en verre de 7 mm</td><td>Mattek</td><td>P35G-1.5-7-C</td><td></td></tr><tr><td>Annexin V, Alexa Flour 488</td><td>Thermo Fisher (Invitrogen)</td><td>A13201</td><td>ex488/em515</td></tr><tr><td>Chlorure de calcium dihydraté</td><td>Fisher</td><td>C79</td><td></td></tr><tr><td>Diméthyl Sulfoxyde Anhydre</td><td>Sigma</td><td>276855</td><td></td></tr><tr><td>Sérum de veau fœtal</td><td>Thermo Fisher (Gibco)</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>Flouzin-3, AM</td><td>Thermo Fisher (Invitrogen)</td><td>F24195</td><td>ex488/em516</td></tr><tr><td>Diacétate de fluorescéine (FDA)</td><td>Thermo Fisher (Invitrogen)</td><td>F1303</td><td>ex488/em520</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>54457</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel de traitement d’images</td><td>NIH</td><td>ImageJ</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium Chloride</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>NucBlue Live ReadyProbes Reagent (Hoechst 33342)</td><td>Thermo Fisher (Invitrogen)</td><td>R37605</td><td>ex360/em460</td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine</td><td>Thermo Fisher (Gibco)</td><td>15-140-122&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Comprimés salins tamponnés au phosphate</td><td>Fisher</td><td>BP2944-100</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de potassium, granulaire</td><td>Macron</td><td>6858-04</td><td></td></tr><tr><td>Iodure de propidium</td><td>Thermo Fisher (Invitrogen)</td><td>P1304MP</td><td>ex535/em620</td></tr><tr><td>Protéine recombinante de souris Protéine IFN-gamma R</td><td>& D Systems</td><td>485-MI-100/CF</td><td></td></tr><tr><td>Souris recombinante IL-1 bêta/IL-1F2&nbsp ;</td><td>R& D Systems</td><td>401-ML-100/CF</td><td></td></tr><tr><td>Souris recombinante TNF-alpha (aa 80-235) Protéine</td><td>R& D Systems</td><td>410-MT-100/CF</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium, Crystal</td><td>Macron</td><td>7581-12</td><td></td></tr><tr><td>Stellaris Microcope confocale avec détecteurs spectraux</td><td>Leica</td><td>DMI-8</td><td>&nbsp ; Objectif d’immersion dans l’eau 40x.</td></tr><tr><td>Yopro-1 Huile d’iodure</td><td>Thermo Fisher (Invitrogen)</td><td>Y3603</td><td>ex488/em509</td></tr></tbody></table>

traitement isolé des îlots pancréatiques et mesure de l’apoptose

Isolated Pancreatic Islet Treatment and Apoptosis Measurement

La double coloration avec FDA et PI a été utilisée pour évaluer la viabilité des îlots traités avec des cytokines. Toutes les expériences ont été menées en trois exemplaires (n = 3), et les données ont été générées à partir de plusieurs images de la pile z espacées de 10 μm, chaque répétition contenant des données moyennes de 5 ou 6 îlots, afin d’assurer la reproductibilité et la comparaison statistique entre les îlots traités et non traités. La figure 1A montre des îlots sains du groupe tém...

Traitement isolé des îlots pancréatiques et mesure de l’apoptose

This study investigates the effect of pro-inflammatory cytokines on pancreatic islets, particularly insulin-producing &#946;-cells, using a combination of ...

isolated-pancreatic-islet-treatment-and-apoptosis-measurement

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Atteindre de haute qualité et la quantité appropriée d'îlots humains est l'une des conditions préalables importantes pour la transplantation d'îlots de succès. Dans cette vidéo, nous décrire étape par étape les procédures pour l'isolement des îlots pancréatiques humains (partie II: la purification et la culture d'îlots humains) en utilisant une méthode modifiée automatisés.

Isolement îlots pancréatiques humaines: Partie II: Purification et culture d&#39;îlots humains

L'alimentation de type 2 diabétiques îlots pour la recherche est insuffisant. Ici, nous partageons notre protocole pour isoler les îlots de patients subissant une pancréatectomie partielle. Cette approche représente un lieu unique pour obtenir des îlots de diabétiques de type 2 et cliniquement correspondance des sujets non diabétiques, en nombre suffisant pour les études fondamentales et cliniques.

L&#39;isolement des îlots humains à partir des patients partiellement pancréatectomisés

Les îlots pancréatiques, également appelés îlots de Langerhans, sont un amas de cellules endocrines qui produisent des hormones pour la régulation du glucose et d’autres fonctions biologiques importantes. Ce protocole explique une méthode pour isoler les îlots pancréatiques en perfusant d’abord la collagénase via l’ampoule de Vater pour digérer le tissu pancréatique exocrine et une centrifugation simplifiée par gradient de densité pour purifier les îlots des souris.

Isolement des îlots pancréatiques par perfusion de collagénase : une méthode enzymatique pour isoler les cellules des îlots pancréatiques

Le dosage in vitro la fonction β-cellulaire en utilisant des îlots isolés de souris de Langerhans est un élément important dans l'étude du diabète physiopathologie et la thérapeutique. Alors que de nombreuses applications en aval sont disponibles, ce protocole décrit précisément la mesure intracellulaire d'adénosine monophosphate cyclique (AMPc) comme un paramètre essentiel de déterminer la fonction β-cellulaire.

Une méthode pour la souris Isolement îlots pancréatiques et AMPc intracellulaire Détermination

défis critiques pour le domaine de la recherche sur le diabète sont de comprendre les mécanismes moléculaires qui régulent la réplication β-cellules d'îlots et de développer des méthodes pour stimuler la régénération β-cellulaire. Ici une méthode de criblage à haut contenu pour identifier et évaluer l'activité de réplication favorisant β-cellulaire de petites molécules est présenté.

Un haut contenu<em&gt; In vitro</em&gt; Pancreatic Islet β-cellulaire Plateforme de découverte de la réplication

Ce protocole décrit une méthode pour l'analyse quantitative de la formation complexe de protéine de mitophagie spécifiquement dans les cellules bêta des échantillons humains primaires d'islet. Cette technique permet ainsi l'analyse de la mitophagie à partir de matériel biologique limité, qui sont cruciaux dans les échantillons précieux de cellules bêta pancréatiques humaines précieuses.

Visualisation des complexes mitophatonus endogènes in situ dans les cellules bêta pancréatiques humaines utilisant l'analyse de la ligation de proximité

Ici, nous présentons un protocole pour produire des données de transcriptome de haute qualité et à grande échelle des cellules simples des îlots pancréatiques humains isolés utilisant une technologie microfluidique de séquençage d'ARN à base de gouttelettes.

Séquençage et analyse de l'ARN unicellulaire des îlots pancréatiques humains

Ce protocole fournit un guide étape par étape pour l’obtention d’un pancréas porcin pour l’isolement et la purification des îlots de Langerhans.

Perfusion chirurgicale et isolement du pancréas porcin pour l’isolement des îlots

Ici, nous fournissons des détails sur la réalisation de la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose (GSIS) par perfusion à travers le système vasculaire de souris avec un pancréas intact comme technique supplémentaire pour évaluer la fonction pancréatique endocrine avec réduction des facteurs de confusion possibles.

Sécrétion d’insuline stimulée par le glucose par perfusion à travers le système vasculaire de souris avec un pancréas intact

Ce protocole décrit une méthode standardisée pour la prélèvement chirurgical, la digestion enzymatique et la purification par gradient de densité des îlots pancréatiques de rat Lewis, permettant des préparations à haut rendement et à haute pureté pour une utilisation directe dans des études de transplantation ou in vitro .

Isolement et purification des îlots pancréatiques à partir de rats de Lewis grâce à la digestion enzymatique et à la séparation par gradient de densité

Découvrez le traitement isolé des îlots pancréatiques et la mesure de l'apoptose par microscopie confocale à fluorescence multiple. Cette méthode révèle les mécanismes de mort cellulaire dans le diabète de type 1.

Traitement isolé des îlots pancréatiques et mesure de l’apoptose

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