Name: Protocole de cytométrie par électroporation pour la microscopie à fluorescence de cellules vivantes à l’aide de la culture de cellules U2 OS (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T12:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Découvrez la cytométrie par électroporation pour la microscopie à fluorescence de cellules vivantes utilisant des cultures de cellules U2 OS. Cette méthode permet de suivre le cycle cellulaire pendant 72 heures.

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<ol><li>Shi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+electroporation-based+intracellular+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">A review on electroporation-based intracellular delivery.</a> Molecules. 23 (11), 3044(2018).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Diapositive de chambre (imprimée en 3D/évaluée)&nbsp ;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de culture (10 cm)</td><td>Sarstedt</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>Delta Vision</td><td>Olympus</td><td>N/A</td><td>D’autres modèles de microscopes peuvent également être utilisés. S’assurer que la platine et le système environnemental peuvent accueillir la glissière de la chambre d’électroporation (55 mm x&nbsp ;</td></tr><tr><td>DMEM &ndash ; Sérum</td><td></td> de bovin fœtal à haute teneur <td>en glucose Gibco</td> 11965092 <td></td></tr><tr><td></td><td>ThermoFisher</td><td>A5256701</td><td></td></tr><tr><td>Imprimante 3D i3 MK3S</td><td>Prusa</td><td>N/A</td><td>D’autres modèles d’imprimantes peuvent être utilisés qui peuvent utiliser des fichiers STL.&nbsp ;</td></tr><tr><td>Stylo streptocoque</td><td>ThermoFisher</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Tamponné Saline</td><td>Gibco</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>tFUCCI(CA)5</td><td>Addgene</td><td>153521</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-07-07</td><td></td></tr><tr><td>U2-OS Lignée cellulaire</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td></td></tr></tbody></table>

protocole de cytométrie par électroporation pour la microscopie à fluorescence de cellules vivantes à l’aide de la culture de cellules u2 os

An Electroporation Cytometry Protocol for Live-Cell, Fluorescence Microscopy Using U2 OS Cell Culture

À l’aide du système FUCCI (Figure 2), les données visuelles du cycle cellulaire ont été obtenues en mesurant la durée pendant laquelle chaque couleur a été exprimée par la cellule à la suite de l’expression et de la débiquitination des protéines. D’après les résultats des expériences non synchronisées et synchronisées (figure 3), il était évident que l’exposition au PEF en phase S régulait à la hausse le cycle cellulaire. Cela a été mis en évidence par la diminu...

Protocole de cytométrie par électroporation pour la microscopie à fluorescence de cellules vivantes à l’aide de la culture de cellules U2 OS

Pulsed electric fields (PEFs) have a wide range of applications in medical research and clinical applications. A key area of research focuses on ...

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Dans cette vidéo, nous démontrons électrofusion efficace des...

Électrofusion cellulaire visualisé par microscopie à fluorescence

L'ARN polymérase II cinétiques transcriptionnelles sont mesurés sur des gènes spécifiques dans les cellules vivantes. ARNm transcrit à partir du gène d'intérêt sont marqués par fluorescence et de l'utilisation de récupération de fluorescence après photoblanchiment (FRAP) la cinétique in vivo de l'élongation de la transcription sont obtenues.

Mesure de la cinétique de la transcription d&#39;ARNm dans les cellules vivantes simples

Source : Aigrain, L., et al. Internalisation et observation de biomolécules fluorescentes chez des micro-organismes vivants via électroporation.  J. Vis. Exp. (2015)La vidéo montre la délivrance de biomolécules fluorescentes dans des cellules microbiennes électrocompétentes grâce à l’électroporation. Le processus commence par l’introduction d’ADN ou de protéines marqués par fluorophore dans une suspension cellulaire refroidie. Une impulsion haute tension est ensuite appliquée pour créer des...

Livraison par électroporation de biomolécules fluorescentes dans les cellules bactériennes

Cette vidéo décrit BiFC-PALM ― une combinaison de microscopie de localisation photoactivée et de complémentation de fluorescence bimoléculaire ― pour évaluer les interactions protéine-protéine. BiFC implique la fusion de deux fragments de protéines fluorescentes avec deux protéines d’intérêt en interaction. Lorsque les deux protéines interagissent, les fragments sont rapprochés, ce qui permet aux deux parties de se réunir et de reconstituer une protéine fluorescente fonctionnelle. La...

Microscopie de localisation photoactivée couplée à la fluorescence bimoléculaire

Cette vidéo montre l’imagerie de cellules vivantes de la topologie des synapses immunologiques, en étudiant les interactions entre les lymphocytes T et les cellules épithéliales porteuses d’antigènes fluorescents. La microscopie à fluorescence révèle un déplacement du cytoplasme rouge et des anneaux membranaires jaunes dans les cellules endothéliales, indiquant la formation de synapses immunologiques.

Évaluation de la topologie immunologique des synapses par l’imagerie de cellules vivantes

Les études de biomolécules in vivo sont cruciales pour comprendre la fonction moléculaire dans un contexte biologique. Nous décrivons ici une nouvelle méthode permettant l’internalisation de biomolécules fluorescentes, telles que l’ADN ou les protéines, dans des micro-organismes vivants. L’analyse des données in vivo enregistrées par microscopie à fluorescence est également présentée et discutée.

Internalisation et l&#39;Observation des Biomolécules Fluorescent In Living micro-organismes par électroporation

Les interactions protéine-protéine sont visualisées dans les cellules avec une résolution spatiale nanométrique en combinant la complémentation de fluorescence bimoléculaire (BiFC) avec la microscopie de localisation photoactivée (PALM). L’utilisation de BiFC-PALM pour l’imagerie des interactions Ras-Raf dans les cellules U2OS permet de visualiser le regroupement à l’échelle nanométrique et la diffusion de complexes Ras-Raf individuels.

Photoactivés Localisation Microscopie avec Bimoléculaire complémentation de fluorescence (BiFC-PALM)

L’électroporation double in utero permet de cibler les populations cellulaires qui sont séparées spatialement et temporellement. Cette technique est utile pour visualiser les interactions entre ces populations cellulaires à l’aide de protéines fluorescentes dans des conditions normales, mais aussi après des expériences fonctionnelles pour perturber les gènes d’intérêt.

Double électroporation in utero pour cibler les populations cellulaires séparées temporellement et spatialement

Ce protocole décrit les techniques de microfabrication requises pour construire un dispositif d’électroporation microfluidique en laboratoire sur puce. La configuration expérimentale effectue des transfections contrôlées au niveau d’une seule cellule dans un flux continu et peut être étendue à des débits plus élevés avec un contrôle basé sur la population. Une analyse est fournie démontrant la capacité de surveiller électriquement le degré de perméabilisation de la membrane cellulaire en temps...

La fabrication et l’exploitation d’un système de micro-électroporation à flux continu avec détection de perméabilisation

Pour l’étude des réponses des cellules excitables in vitro, le protocole décrit la surveillance optique des changements dans la génération de potentiel d’action dus à l’électroporation sur un modèle cellulaire excitable simple de cellules HEK à enrichissement tet-on génétiquement modifiées, ainsi que les changements de tension transmembranaire avec extraction automatisée des paramètres pertinents.

Surveillance des changements induits par l’électroporation dans la génération de potentiel d’action dans les cellules HEK à pointes Tet-On génétiquement modifiées

Ce protocole décrit la procédure pour réaliser la microscopie de localisation profonde à cellule entière à molécule unique (SMLM) à l’aide d’un microscope confocal à disque tournant avec réassignation optique de photons, permettant ainsi l’imagerie DNA-PAINT sans besoin d’optiques personnalisées ou d’illuminations complexes.

Imagerie super-résolution de cellules entières via DNA-PAINT sur un disque tournant confocal avec réaffectation optique des photons

Découvrez la cytométrie par électroporation pour la microscopie à fluorescence de cellules vivantes utilisant des cultures de cellules U2 OS. Cette méthode permet de suivre le cycle cellulaire pendant 72 heures.

Protocole de cytométrie par électroporation pour la microscopie à fluorescence de cellules vivantes à l’aide de la culture de cellules U2 OS (Vidéo) | JoVE Journal

Protocole de cytométrie par électroporation pour la microscopie à fluorescence de cellules vivantes à l’aide de la culture de cellules U2 OS

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