Name: Ensemble de bioréacteur pour la culture continue de communautés fécales complexes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Découvrez l'assemblage de mini-bioréacteurs pour la culture continue de communautés fécales complexes en conditions anaérobies. Cette méthode permet d'étudier contrôlée les interactions hôte-bactéries et leurs effets sur la réponse aux traitements anticancéreux.

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<ol><li>Sender, R., Fuchs, S., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+estimates+for+the+number+of+human+and+bacteria+cells+in+the+body%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Revised estimates for the number of human and bacteria cells in the body.</a> PLoS Biol. 14 (8), e1002533(2016).</li>
<li>Postler, T. S., Ghosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+holobiont%3A+how+microbial+metabolites+affect+human+health+and+shape+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Understanding the holobiont: how microbial metabolites affect human health and shape the immune system.</a> Cell Metab. 26 (1), 110-130 (2017).</li>
<li>Rooks, M. G., Garrett, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%2C+metabolites+and+host+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota, metabolites and host immunity.</a> Nat Rev Immunol. 16 (6), 341-352 (2016).</li>
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<li>Fouhy, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+freezing+on+faecal+microbiota+as+determined+using+MiSeq+sequencing+and+culture-based+investigations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The effects of freezing on faecal microbiota as determined using MiSeq sequencing and culture-based investigations.</a> PLoS One. 10 (3), e0119355(2015).</li>
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<li>Newsome, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+bacterial+genera+associated+with+therapeutic+response+to+immune+checkpoint+PD-1+blockade+in+a+United+States+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Interaction of bacterial genera associated with therapeutic response to immune checkpoint PD-1 blockade in a United States cohort.</a> Genome Med. 14 (1), 35(2022).</li>
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<li>Qi, Y., Yu, L., Tian, F., Zhao, J., Zhai, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+to+study+human+gut-microbiota+interactions%3A+Applications%2C+advances%2C+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Res%22%5BJournal%5D)">In vitro models to study human gut-microbiota interactions: Applications, advances, and limitations.</a> Microbiol Res. 270, 127336(2023).</li>
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Le microbiote intestinal est un vaste réseau de micro-organismes, notamment des bactéries, des champignons, des archées et des virus, qui contiennent un énorme répertoire génétique et métabolique qui dépasse largement celui d’un hôte humain1. La riche capacité métabolique du microbiome comprend des métabolites produits par le traitement bactérien des nutriments alimentaires, des métabolites de l’hôte chimiquement modifiés par des bactéries et des métabolites synthétisés uniquement par le microbiote2. Le microbiote est impliqué dans presque tous les bioprocessus de l’hôte, mais aussi dans des états pathologiques tels que les maladies inflammatoires de l’intestin, le cancer, les troubles métaboliques et même les troublesneurologiques2,3. Il est essentiel de disséquer la contribution du microbiote de celle de l’hôte pour comprendre le rôle de micro-organismes spécifiques ou de communautés complexes dans la santé et la maladie. L’une des approches qui permet cette dissection est l’utilisation de bioréacteurs microbiens, qui cultivent diverses communautés microbiennes dans des conditions dynamiques. Il existe de nombreux bioréacteurs disponibles dans le commerce qui permettent la croissance de communautés bactériennes fécales à presque toutes les fins, y compris la culture de bioproduits à grande échelle ou le contrôle précis de facteurs nutritifs spécifiques pour l’étude des processus métaboliques. Cependant, ces systèmes sont extrêmement coûteux et nécessitent une préparation approfondie, et ne permettent pas d’examiner en parallèle diverses conditions expérimentales. Pour une approche simplifiée qui soit moins coûteuse, plus adaptable et qui permette de nombreuses conditions parallèles, nous présentons ici le protocole pour la mise en place et l’utilisation d’un réseau de mini-bioréacteurs en flux continu adapté d’Auchtung et al.4.
La configuration complète du système de mini-bioréacteur est illustrée à la figure 1A. Ce système de mini-bioréacteur utilise des réseaux de 6 puits de réacteur, qui sont complètement indépendants les uns des autres et sont installés dans une chambre anaérobie sous écoulement péristaltique pour permettre une distribution et une évacuation continues des fluides (Figure 1A). Chaque réseau de réacteurs repose sur une plaque d’agitation magnétique à 60 positions, avec deux pompes péristaltiques à 48 cassettes contenant un tube à 2 arrêts pour le média source et le flux de déchets (figure 1A). La chambre anaérobie est équipée d’un moniteur anaérobie CAM-12 pour la teneur en oxygène, d’un boîtier catalytique pour éliminer l’oxygène avec une capacité de chauffage et d’une colonne d’élimination du sulfure d’hydrogène pour absorber l’excès de gaz du métabolisme bactérien. Chaque puits de réacteur est équipé d’une entrée de média source, d’une sortie de déchets et d’un orifice d’échantillonnage, ce qui permet l’inoculation ou l’échantillonnage de chaque puits de réacteur (figure 1B).
Comme décrit, le système de bioréacteur permet un contrôle dynamique de la température, de la consommation de milieux et de la disponibilité des nutriments pour soutenir la culture et le maintien des communautés fécales. La température est modulée par un boîtier catalytique à capacité de chauffage, ce qui permet de mettre en œuvre rapidement les changements de température dans toute la chambre anaérobie. La consommation de fluide est régulée par les débits de la pompe péristaltique, qui peuvent être modifiés pour modifier le renouvellement du fluide dans les réacteurs. Le renouvellement des milieux peut être adapté aux types de communautés cultivés dans les réacteurs, par exemple, en étant adapté aux souches cibles à croissance lente ou à croissance très rapide. Enfin, la disponibilité des nutriments peut être modifiée de manière dynamique en ajoutant des composants par l’intermédiaire des orifices d’échantillonnage individuels de chaque puits de réacteur. Les conditions statiques qui peuvent être modifiées au début d’une expérience, mais qui n’ont pas de contrôle dynamique dans le système, sont le type de milieu, la teneur en oxygène et le nombre de réacteurs simultanés. Les enquêteurs peuvent choisir d’implémenter n’importe quel média source qu’ils souhaitent, et bien qu’un média soit décrit ici, d’innombrables autres types de médias sources ont été mis en œuvre avec succès. On peut faire fonctionner les réacteurs dans des conditions aérobies ou microaérophiles (selon la disponibilité d’une chambre microaérophile). Enfin, il est possible de mettre en place autant ou aussi peu de réacteurs que nécessaire en fonction des besoins expérimentaux de l’investigateur. Alors que les réacteurs sont en groupes de six au sein d’un réseau, chaque réacteur fonctionne indépendamment des autres, et chacun peut être relié à une source différente si on le souhaite.
Ce système de bioréacteur modulaire peut être entièrement installé pour environ 25 000 $ (sans compter la chambre anaérobie ou les composants spécifiques à la chambre), la seule pièce non réutilisable étant le tube qui peut être remplacé pour moins de 100 $ par cycle du système. Le système est principalement automatisé, mais nécessite une vérification quotidienne des niveaux de fluides, car les bouteilles de sources de médias devront être changées lorsqu’elles sont vides. De plus, tout échantillonnage doit être effectué manuellement, et toute modification conditionnelle dynamique du système devra être initiée manuellement (par exemple, modification de la température). À partir du protocole système original publié par Auchtung et al., quelques modifications ont été mises en œuvre pour améliorer les performances globales et l’utilité4. Tout d’abord, le matériau pour l’impression 3D du réseau de bioréacteurs est modifié pour être en plastique transparent translucide de type ABS afin d’améliorer l’intégrité structurelle du système grâce à des cycles répétés d’autoclavage. De plus, à la place du tube en PTFE de 1/8 pouce (3,2 mm) de diamètre extérieur, le tube E-LFL, de 2,06 mm de diamètre intérieur, 100 pieds est utilisé en raison du matériau plus robuste, qui est plus résistant à l’effondrement, ce qui provoquerait des blocages de l’écoulement dans le système. Enfin, un raccord supplémentaire utilisant un filetage de 1/4 à 28 mm sur des adaptateurs mâles cannelés est utilisé pour réduire les changements de glissement des tubes des flacons sources de fluide. D’après Han et al., la recette adaptée du milieu MEGA fournit un milieu indéfini, complexe et très riche qui permet la culture de micro-organismes anaérobies fastidieux5. Le support est modifié pour utiliser une autre préparation du composant histidine-hématine, car l’original n’est plus disponible dans le commerce. L’hydroxyde de sodium est également utilisé pour pH du milieu à 7,0 ou au pH souhaité. Dans l’ensemble, ce système est économique et convivial, optimisé et constitue un excellent point d’entrée dans les systèmes de culture en flux continu.
Dans ce protocole, nous décrivons en détail la configuration de ce système de mini-bioréacteur, y compris les matériaux, la stérilisation du système et l’utilisation ultérieure pour la culture d’échantillons de matières fécales murines humanisées dans l’intestin. L’objectif global de cette méthode est de construire un système de bioréacteur adaptable et rentable qui peut être utilisé pour cultiver des communautés microbiennes dans des conditions contrôlées. Un schéma détaillé du déroulement de l’assemblage du système de mini-bioréacteur est fourni à la figure 2 et référencé aux étapes appropriées du protocole. Dans notre exemple, nous inoculons deux réacteurs avec le même échantillon fécal à partir de souris intestinales humanisées et décrivons la structure de la communauté microbienne sous un flux continu de milieux MEGA.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68035/68035fig1v2.jpg"> 
Figure 1 : Schéma de principe de l’installation du réseau de mini-bioréacteurs dans la chambre anaérobie. (A) Vue complète de l’installation complète du réseau de mini-bioréacteurs dans la chambre anaérobie. Le réseau de bioréacteurs à 6 puits est situé sur la plaque d’agitation magnétique à 60 positions. Le réseau de luer té source est relié au média source sur le côté gauche par le bouchon de la bouteille à deux trous. Deux pompes péristaltiques maintiennent la tuyauterie à 2 arrêts de la source et les réseaux de déchets à gauche et à droite, respectivement. Le réseau de tés Luer se déverse dans la bouteille à déchets sur le côté droit. Les équipements essentiels au fonctionnement de la chambre anaérobie, y compris le moniteur CAM-12, le boîtier de catalyseur avec capacité de chauffage et la colonne d’élimination du sulfure d’hydrogène, sont disposés à l’intérieur de la chambre autour du système de réseau. (B) Vue de dessus de la source, de l’échantillon et des orifices de déchets fixés à un puits du réacteur avec le milieu à la hauteur appropriée dans le réacteur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68035/68035fig1v2large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68035/68035fig2v2.jpg"> 
Figure 2 : Schéma de principe du flux de travail d’assemblage d’un réseau de mini-bioréacteurs. (A) Vue de haut en bas du réseau de mini-bioréacteurs, montrant l’orientation de la source, des déchets et des orifices d’échantillonnage. (B) Vue latérale du réseau de mini-bioréacteurs avec vue illustrant les étapes 2.3 et 2.4 du protocole. Le tube et le raccord en PTFE de 1/8 de pouce (1) sont fixés et insérés dans les orifices de déchets et d’échantillons. Le raccord (1) sans PTFE est inséré dans le port source. (C) Vue latérale d’un réseau de mini-bioréacteurs illustrant les étapes 2.5 et 2.6 du protocole. Le raccord (2) est fixé à la source et aux orifices de déchets. Le raccord (3) est fixé à l’orifice d’échantillonnage, et pour cela, le raccord (4) est inséré sur le dessus. (D) Vue latérale du réseau de mini-bioréacteurs illustrant les étapes 2.9 à 2.11. Le tube E-LFL 2,06 mm est connecté aux orifices source et de décharge, et l’autre extrémité est connectée aux raccords (5) puis (6). Un tube à 2 butées du diamètre approprié est ensuite raccordé au raccord (6). La connexion inverse est ensuite répétée à l’extrémité du tube à 2 butées, le raccord (6) se connectant au tube à 2 arrêts et le raccord (5) se connectant à celui-ci. Enfin, le tube E-LFL de 2,06 mm sera connecté au raccord (5) pour le raccordement au réseau de tés Luer. (E) Vue de haut en bas du réseau de mini-bioréacteurs montrant la configuration du réseau de sources et de déchets décrite aux étapes 2.12 à 2.15. Le tube E-LFL de 2,06 mm se terminant par le raccord (5) est utilisé pour connecter chaque réacteur à plusieurs raccords (7), dont la dernière ouverture est reliée au bouchon de la source ou de la bouteille de déchets. (F) Vue latérale de l’ensemble de bouchon de bouteille à deux trous décrit aux étapes 2.16-2.17. Une ouverture dans le bouchon est reliée à un tube en PTFE qui est placé à l’intérieur de la bouteille. Dans cette ouverture est inséré le raccord (1), suivi du raccord (2) et du tube E-LFL de 2,06 mm relié au raccord (5). Ce raccord est fixé à la source ou au réseau de déchets luer. Dans l’ouverture non connectée au tube en PTFE, le raccord (1) est inséré, suivi du raccord (2), et le tube E-LFL 2,06 mm est connecté à un autre raccord (5). Cette extrémité est recouverte d’une feuille lors de la stérilisation en autoclave pour une fixation future à un filtre à seringue stérile de 0,22 μM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68035/68035fig2v2large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

<table><tbody><tr><td>1 mL BD Slip Tip Seringue stérile, à usage unique</td><td>Fisher Scientific</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>1/4-28 mm filetage à adaptateur mâle barbelé (3,2 mm), 5/paquet</td><td>Cole-Parmer</td><td>008NB32-KD5L</td><td>Pour construire 1 réseau à 6 puits, besoin de 2 paquets</td></tr><tr><td>10M NaOH (hydroxyde de sodium)</td><td>Sigma</td><td>72068-100ML</td><td></td></tr><tr><td>2.0ml Tube à bouchon à vis, non-moleté, jupe, naturel, E-Beam Tube stérile avec capuchon attaché</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-755-228</td><td></td></tr><tr><td>2mag MIXdrive 60 Entraînement d’agitation</td><td>2mag</td><td>40060</td><td>Plaque d’agitation magnétique à 60 positions (ajout facultatif de capacité de chauffage - cat# 40260)</td></tr><tr><td>Réacteur à 6 puits, ABS-Like Translucide Plastique transparent</td><td>Protolabs Personnalisé</td><td></td><td>Voir les fichiers supplémentaires pour le fichier .stl pour l’impression 3D</td></tr><tr><td>Éthanol absolu (200 preuve)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818</td><td></td></tr><tr><td>Acide acétique, glacial</td><td>Sigma</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Adaptateur, nylon, luer mâle à filetage 1/4-28, 25/paquet</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45505-82</td><td>Pour construire 1 réseau de 6 puits, besoin de 6 (1 paquet)</td></tr><tr><td>Feuille d’aluminium</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>Chambre anaérobie</td><td>Coy Lab Produits</td><td>Type B</td><td></td></tr><tr><td>Bel-Art&nbsp ; SP Scienceware Flea Micro Spinbar Barres d’agitation magnétiques (1/pk)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-261679</td><td>Pour construire 1 réseau de 6 puits, il faut 6&nbsp ;</td></tr><tr><td>Armoire de biosécurité classe 2</td><td>Acide butyrique Nuaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>B103500&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 &middot ; 2H2O (chlorure de calcium dihydraté)</td><td>Sigma</td><td>C7902</td><td></td></tr><tr><td>Lingettes germicides Clorox Healthcare avec eau de Javel, non parfumées, 6 » x 5 », paquet de 150 lingettes</td><td>Office Depot</td><td>129202</td><td></td></tr><tr><td>D-(-)-Fructose</td><td>Sigma</td><td>F0127-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Cellobiose</td><td>Sigma</td><td>C7252-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Sigma</td><td>G8270-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Maltose monohydraté</td><td>Sigma</td><td>M5885-100G</td><td></td></tr><tr><td>Drill America Plug Hand Tap DWTP1/4-28</td><td>Home Depot</td><td>305699489</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco’s Saline tamponnée au phosphate, 1X sans Ca ni Mg, Genesee</td><td></td><td>stérile 25-508</td><td></td></tr><tr><td>Luer femelle &times ; 1/16&Prime ; adaptateur de tuyau cannelé, Nylon, 25/paquet</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-00</td><td>Pour construire 1 réseau à 6 puits, besoin de 24 (1 paquet)</td></tr>Adaptateur de tuyau <tr><td>cannelé femelle &times ; 1/8&Prime ; Nylon 25/paquet</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-04</td><td>Pour construire 1 réseau à 6 puits, besoin de 6 (1 paquet)</td></tr><tr><td>Adaptateur de tuyau cannelé femelle &times ; 3/32&Prime ; adaptateur de tuyau cannelé, Nylon, paquet de 25</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-02</td><td>Pour construire 1 réseau à 6 puits, besoin de 6 (1 paquet)</td></tr><tr><td>Té Luer femelle, Nylon, 25/paquet</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-56</td><td>Pour construire 1 réseau de 6 puits, besoin de 10 (1 paquet)</td></tr><tr><td>FeSO4 &middot ; 7H2O (Sulfate de fer [II] Heptahydrate)</td><td>Sigma</td><td>F8633</td><td></td></tr><tr><td>Hematin</td><td>Sigma</td><td>H3281</td><td></td></tr><tr><td>Histidine</td><td>Sigma</td><td>H7750</td><td></td></tr><tr><td>Acide isovalérique</td><td>Sigma</td><td>129542</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4 dibasique (hydrogénophosphate dipotassique)</td><td>Sigma</td><td>P2222-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4 monobasique (dihydrogénophosphate de potassium)</td><td>Sigma</td><td>P0662-500G</td><td></td></tr><tr><td>Embouts de pipette à grand orifice</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-134</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhydrate de L-cystéine</td><td>Sigma</td><td>C1276-10G</td><td></td></tr><tr><td>Luer mâle avec bague de verrouillage &times ; 1/8&Prime ; adaptateur de cannelure de tuyau, Nylon, 25/paquet</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45505-04</td><td>Pour construire 1 réseau à 6 puits, besoin de 42 (2 paquets)</td></tr><tr><td>Extrait</td><td>de viande Sigma</td><td>70164-500G</td><td></td></tr><tr><td>Med Vet International&nbsp ; Aiguille Exel, 20G x 1", Hypodermique, 100/boîte, 26417</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-209-2532</td><td></td></tr><tr><td>Menadione (Vitamine K3)</td><td>Sigma</td><td>M5625</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp ; &point moyen ; 7H2O (Sulfate de Magnésium Heptahydraté)</td><td>Sigma</td><td>M1880-500G&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q eau</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl (chlorure de sodium)</td><td>Sigma</td><td>S9888-500G&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3 (bicarbonate de sodium)</td><td>Sigma</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>Omnifi t Q-series bouchon de bouteille à deux trous</td><td>Cole-Parmer</td><td>00945Q-2</td><td>Pour construire 1 réseau de 6 puits, besoin de 1</td></tr><tr><td>PMP IPC-N L 24CHNL 8RLR 115V</td><td>MasterFlex</td><td>ISM939C-115V</td><td>Pompe péristaltique à 24 canaux, nécessite 1 pour la source et 1 pour les déchets</td></tr><tr><td>Precision Seal&reg ; septa en caoutchouc, blanc, tube en verre de 7 mm de diamètre extérieur (100/pk)</td><td>Millipore Sigma</td><td>Z553905-100EA</td><td>Pour construire 1 réseau de 6 puits, il faut 6 septa</td></tr><tr><td>d’acide propionique</td><td>Sigma</td><td>P5561&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Tubulure de pompe, 2 arrêts, Tygon S3 E-Lab, 1,02 mm ID ; 12/PK</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-28</td><td>Pour construire 1 réseau de 6 puits, il faut 6&nbsp ; (1 paquet)</td></tr><tr><td>Tubulure de pompe, 2 arrêts, Tygon S3 E-Lab, 1,14 mm ID ; 12/PK</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-30</td><td>Pour construire 1 réseau de 6 puits, besoin de 6 (1 paquet)</td></tr><tr><td>Puritan Cary-Blair Medium, 5 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-029-646</td><td></td></tr><tr><td>Bouteilles de stockage de supports ronds PYREX 2L, avec bouchon à vis GL45</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-414-1E</td><td></td></tr><tr><td>Lames de rasoir</td><td>Genesee</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Résazurine, sel de sodium</td><td>ACROS Organics de ThermoFisher</td><td>AC41890-0010</td><td></td></tr><tr><td>Amidon soluble</td><td>Sigma</td><td>S9765-100G</td><td></td></tr><tr><td>Micro-spatules en acier inoxydable, lame en forme de cuillère</td><td>Fisher Scientific</td><td>S50823</td><td></td></tr><tr><td>TBNG TYGON ELFL 2.06MMID 100'VWR</td><td></td> <td>MFLX06449-42</td><td>Pour construire 1 réseau de 6 puits, il faut 205,5 cm</td></tr><tr><td>de supplément d’oligo-éléments</td><td>ATCC</td><td>MD-TMS</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase peptone (BBL)</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11921</td><td></td></tr><tr><td>Tube, PTFE, 1/8&Prime ; (3,2 millimètres) OD & fois ; 1,5 mm ID, 10 M</td><td>Cole-Parmer</td><td>008 T32-150-10</td><td>Pour construire 1 réseau de 6 puits, il faut un</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma</td><td>P1754</td> de 300 mm.<td></td></tr><tr><td>Supplément vitaminique</td><td>ATCC</td><td>MD-VS</td><td></td></tr><tr><td>Extrait de levure (Bacto)</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0127-17-9</td><td></td></tr></tbody></table>

ensemble de bioréacteur pour la culture continue de communautés fécales complexes

Bioreactor Assembly for Continuous Culture of Complex Fecal Communities

Des échantillons de matières fécales ont été prélevés sur des souris colonisées avec du lisier fécal humain 2 semaines après l’inoculation et stockés à -80 °C. Le système de bioréacteur a été mis en place avec un flux continu de média MEGA pour deux puits de réacteur répétés (figure 3A). La boue fécale a été préparée à partir des boulettes fécales de souris conformément au protocole décrit à l’étape 6, et les deux réacteurs ont été inoculés par port d’échant...

Ensemble de bioréacteur pour la culture continue de communautés fécales complexes

The microbiota, especially bacteria, respond to various environmental exposures such as micro and macronutrients, pharmacological compounds, and ...

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Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

L'échelle du laboratoire digesteurs anaérobies permettre aux scientifiques de la recherche de nouvelles façons d'optimiser les applications existantes de la biotechnologie anaérobie et d'évaluer le potentiel du méthane production de divers déchets organiques. Cet article présente un modèle généralisé pour la construction, l'inoculation, l'exploitation et la surveillance d'un laboratoire échelle agité en continu digesteur anaérobie.

Continu agité digesteur anaérobie pour convertir les déchets organiques en biogaz: configuration du système et le fonctionnement de base

Source : Ahmadi, S., et al. Un modèle de culture batch-in vitro visant à estimer les effets des régimes interventionnels sur le microbiote fécal humain. J. Vis. Exp. (2019).Cette vidéo démontre une méthode pour modéliser la fermentation microbienne intestinale en incubant des échantillons fécales avec des fibres fermentescibles alimentaires dans des conditions anaérobies afin d’étudier la production de métabolites par le microbiote intestin.

In vitro Modèle de culture par lots pour imiter la fermentation du côlon par le microbiote intestinal humain

La régulation des nutriments à l’aide d’une alimentation ajustée en croissance continue améliore les taux de croissance des sphéroïdes de cellules de mammifères par rapport à l’alimentation intermittente par lots pour les cultures dans des bioréacteurs en suspension agitée.  Cette étude démontre les méthodes requises pour établir des cultures simples nourries au taux ajusté.

Règlement des éléments nutritifs par l&#39;alimentation continue pour l&#39;expansion à grande échelle de cellules de mammifères en Spheroids

Le comportement fonctionnel des cellules en culture peut être améliorée par la mise en culture plus in vivo -comme des milieux de culture de 16-21 3 dimensions. Ce manuscrit décrit la mise en place et le fonctionnement d'un système de bioréacteur à fibres creuses pour vivo -comme mammifère culture de tissus dans.

Bioréacteurs à fibres creuses pour<em&gt; In Vivo</em&gt; -like Tissue Culture Mammifères

Une nouvelle conception de réacteur, baptisée bioréacteur à haute densité (HDBR), est présentée pour la culture et l’étude des communautés microbiennes à haute densité. Ici, le HDBR est appliqué avec succès dans une configuration de photobioréacteur (PBR) pour l’étude du métabolisme de l’azote par une communauté d’algues mixtes à haute densité.

Un bioréacteur pour Novel Haute Culture de la densité des communautés microbiennes diverses

Interactions hôtes-microorganismes gut ont été évaluées à l’aide d’une nouvelle approche combinant une communauté orale synthétique, in vitro digestion gastro-intestinale et un modèle de l’épithélium de l’intestin grêle. Nous présentons une méthode qui peut être adaptée pour évaluer l’invasion des cellules des agents pathogènes et des biofilms multi-espèces, ou même de tester la capacité de survie des probiotiques formulations.

Évaluation de la viabilité d’un Consortium bactérien synthétique sur l’Interface hôte-microbe In Vitro Gut

Nous présentons ici un protocole pour cultiver le microbiote intestinal du côlon in vitro, à l’aide d’une série de bioréacteurs qui simulent les conditions physiologiques du tractus gastro intestinal.

Appliquer des avancées In Vitro culture technologie afin d’étudier la microflore intestinale humaine

Nous présentons ici un protocole permettant de réaliser la fabrication à grande échelle de cellules adhérentes grâce à un système entièrement fermé basé sur des microporteurs solubles de qualité GMP. La culture de cellules souches mésenchymateuses humaines, de cellules HEK293T et de cellules Vero a été validée et a répondu à la fois aux exigences quantitatives et aux critères de qualité de l’industrie de la thérapie cellulaire et génique.

Production de cellules à grande échelle à base de microporteurs poreux solubles de qualité GMP

L’objectif de cet article est de détailler les meilleures pratiques pour la fabrication de milieux pour les micro-organismes anaérobies exigeants acquis dans un environnement. Ces méthodes aident à gérer les cultures anaérobies et peuvent être appliquées pour soutenir la croissance de micro-organismes insaisissables non cultivés, la « matière noire microbienne ».

Ensemble de formats de milieux simulés in situ pour la culture de micro-organismes anaérobies acquis dans l’environnement

Le minibioréacteur (MBRA) est un système de culture à flux continu, personnalisable et à haut débit qui permet de cultiver des communautés microbiennes complexes, soutenant des expériences parallèles pour étudier la dynamique du microbiome, les interactions thérapeutiques et les réponses microbiennes aux facteurs environnementaux.

Mise à jour du Protocole pour l’assemblage et l’utilisation du réseau de minibioréacteurs (MBRA)

Découvrez l'assemblage de mini-bioréacteurs pour la culture continue de communautés fécales complexes en conditions anaérobies. Cette méthode permet d'étudier contrôlée les interactions hôte-bactéries et leurs effets sur la réponse aux traitements anticancéreux.

Ensemble de bioréacteur pour la culture continue de communautés fécales complexes

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