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Imagerie de transfert d’énergie par résonance de Förster en direct de la dynamique d’activation d...
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Cancer Research
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JoVE Journal Cancer Research
Live-Cell Förster Resonance Energy Transfer Imaging of Metabolically Regulated Akt Activation Dynamics in HepG2 Cells

Imagerie de transfert d’énergie par résonance de Förster en direct de la dynamique d’activation d’Akt régulée métaboliquement dans les cellules HepG2

Full Text
790 Views
08:03 min
May 23, 2025

DOI: 10.3791/68075-v

Javed Akhtar1,2,3,4,5, Muhammad Imran6, Jiahe Wang1,2,3, Gang Ma5, Guanyu Wang1,2,3

1Laboratory of Biocomplexity and Engineering Biology, School of Medicine,The Chinese University of Hong Kong, 2Futian Biomedical Innovation R&D Center,The Chinese University of Hong Kong, 3Ciechanover Institute of Precision and Regenerative Medicine, School of Medicine,The Chinese University of Hong Kong, 4Department of Immunology and Microbiology, School of Life Sciences,Southern University of Science and Technology, 5Department of Biology, School of Life Sciences,Southern University of Science and Technology, 6Department of Computer Science and IT,University of Southern Punjab

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Ici, nous présentons un protocole pour quantifier la dynamique spatio-temporelle de l’activation et de la phosphorylation d’Akt dans des cellules HepG2 vivantes. L’imagerie par transfert d’énergie par résonance de Förster (FRET) est un outil puissant qui fournit des informations précieuses sur les voies de signalisation de l’insuline et la régulation métabolique dans les cellules cancéreuses.

L’hétérogénéité cellulaire est un obstacle à la description précise des subtilités de la dynamique cellulaire, qui sont essentiellement moyennées. C’est pourquoi nous sommes ici pour imager des cellules uniques. Les développements récents dans les biocapteurs FRET génétiquement codés ont amélioré la spécificité et révolutionné le suivi en temps réel d’Akt dans les cellules, ce qui est essentiel à la compréhension de l’hétérogénétique et au développement de thérapies médicamenteuses personnalisées.

Le cancer et le diabète sont le fait de voies métaboliques complexes. Pour décoder la biocomplexité de la voie de signalisation de l’insuline dans le cancer, nous utilisons l’imagerie FRET de cellules vivantes de pointe à une résolution de cellule unique. Nous avons constaté que l’optimisation du microscope confocal, de la configuration matérielle et logicielle, ainsi que le réglage précis de la puissance laser et l’ajustement du gain du détecteur, sont essentiels pour minimiser le bruit et la diaphonie spectrale dans les signaux FRET.

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