Name: En face Cryosectionnement de la rétine de souris pour l’analyse moléculaire spatiale de haute dimension (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-08T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Découvrez la cryosection en face de la rétine de souris pour la transcriptomique spatiale. Cette méthode préserve l'organisation laminaire et permet le mapping complet des cellules ganglionnaires rétiniennes.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Baden, T., Euler, T., Berens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+retinal+basis+of+vision+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Understanding the retinal basis of vision across species.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (1), 5-20 (2020).</li>
<li>Heukamp, A. S., Warwick, R. A., Rivlin-Etzion, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topographic+variations+in+retinal+encoding+of+visual+space%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Topographic variations in retinal encoding of visual space.</a> Annu Rev Vis Sci. 6, 237-259 (2020).</li>
<li>Collin, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+web-based+archive+for+topographic+maps+of+retinal+cell+distribution+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Optom%22%5BJournal%5D)">A web-based archive for topographic maps of retinal cell distribution in vertebrates.</a> Clin Exp Optom. 91 (1), 85-95 (2008).</li>
<li>Budoff, S. A., Poleg-Polsky, A. GraSP gene targets to hierarchically infer sub-classes with CuttleNet. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBudoff%2C+SA+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2024).</li>
<li>Rheaume, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+transcriptome+profiling+of+retinal+ganglion+cells+identifies+cellular+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Single cell transcriptome profiling of retinal ganglion cells identifies cellular subtypes.</a> Nat Commun. 9 (1), 2759(2018).</li>
<li>Tran, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+profiles+of+retinal+ganglion+cells+differing+in+resilience+to+injury+reveal+neuroprotective+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Single-cell profiles of retinal ganglion cells differing in resilience to injury reveal neuroprotective genes.</a> Neuron. 104 (6), 1039-1055.e12 (2019).</li>
<li>Yan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+retinal+cell+atlas%3A+Molecular+identification+of+over+sixty+amacrine+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mouse retinal cell atlas: Molecular identification of over sixty amacrine cell types.</a> J Neurosci. 40 (27), 5177-5195 (2020).</li>
<li>Bleckert, A., Schwartz, G. W., Turner, M. H., Rieke, F., Wong, R. O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+space+is+represented+by+nonmatching+topographies+of+distinct+mouse+retinal+ganglion+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Visual space is represented by nonmatching topographies of distinct mouse retinal ganglion cell types.</a> Curr Biol. 24 (3), 310-315 (2014).</li>
<li>Holmgren, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+pursuit+behavior+in+mice+maintains+the+pursued+prey+on+the+retinal+region+with+least+optic+flow%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Visual pursuit behavior in mice maintains the pursued prey on the retinal region with least optic flow.</a> eLife. 10, e70838(2021).</li>
<li>Tapia, M. L., Nascimento-dos-Santos, G., Park, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtype-specific+survival+and+regeneration+of+retinal+ganglion+cells+in+response+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Subtype-specific survival and regeneration of retinal ganglion cells in response to injury.</a> Front Cell Dev Biol. 10, 956279(2022).</li>
<li>Berchuck, S. I., Mukherjee, S., Medeiros, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+rates+of+progression+and+predicting+future+visual+fields+in+glaucoma+using+a+deep+variational+autoencoder%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Estimating rates of progression and predicting future visual fields in glaucoma using a deep variational autoencoder.</a> Sci Rep. 9 (1), 18113(2019).</li>
<li>de Gainza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+trajectory+of+glaucoma+progression+in+2-dimensional+structural-functional+space%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">The trajectory of glaucoma progression in 2-dimensional structural-functional space.</a> Ophthalmol Glaucoma. 3 (6), 466-474 (2020).</li>
<li>Choi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+organization+of+the+mouse+retina+at+single+cell+resolution+by+MERFISH%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Spatial organization of the mouse retina at single cell resolution by MERFISH.</a> Nat Commun. 14 (1), 4929(2023).</li>
<li>Kremers, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+STED+imaging+in+the+inner+and+outer+whole-mount+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Super-resolution STED imaging in the inner and outer whole-mount mouse retina.</a> Front Ophthalmol. 3, 1126338(2023).</li>
<li>Simon, P., Thanos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+methods+of+retrograde+staining%2C+layer-separation+and+viscoelastic+cell+stabilization+to+isolate+retinal+ganglion+cells+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Combined methods of retrograde staining, layer-separation and viscoelastic cell stabilization to isolate retinal ganglion cells in adult rats.</a> J Neurosci Methods. 83 (2), 113-124 (1998).</li>
<li>Lindqvist, N., Vidal-Sanz, M., Hallböök, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+RT-PCR+analysis+of+tyrosine+kinase+receptor+expression+in+adult+rat+retinal+ganglion+cells+isolated+by+retinal+sandwiching%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Protoc%22%5BJournal%5D)">Single cell RT-PCR analysis of tyrosine kinase receptor expression in adult rat retinal ganglion cells isolated by retinal sandwiching.</a> Brain Res Brain Res Protoc. 10 (2), 75-83 (2002).</li>
<li>Fontaine, V., Kinkl, N., Sahel, J., Dreyfus, H., Hicks, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+purified+rat+photoreceptors+in+vitro+is+stimulated+directly+by+fibroblast+growth+factor-2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Survival of purified rat photoreceptors in vitro is stimulated directly by fibroblast growth factor-2.</a> J Neurosci. 18 (23), 9662-9672 (1998).</li>
<li>Sandu, C., Hicks, D., Felder-Schmittbuhl, M. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+photoreceptor+circadian+oscillator+strongly+relies+on+lighting+conditions%3A+Molecular+clock+in+rat+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rat photoreceptor circadian oscillator strongly relies on lighting conditions: Molecular clock in rat photoreceptors.</a> Eur J Neurosci. 34 (3), 507-516 (2011).</li>
<li>Jaeger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+organization+of+the+rodent+retina+involves+strongly+coupled%2C+layer-specific+oscillators%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Circadian organization of the rodent retina involves strongly coupled, layer-specific oscillators.</a> FASEB J. 29 (4), 1493-1504 (2015).</li>
<li>Hecht, R. M., Shi, Q., Garrett, T. R., Sivyer, B., Morgans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Split+retina+as+an+improved+flatmount+preparation+for+studying+inner+nuclear+layer+neurons+in+vertebrate+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Split retina as an improved flatmount preparation for studying inner nuclear layer neurons in vertebrate retina.</a> J Vis Exp. (203), e65757(2024).</li>
<li>Budoff, S. A., Poleg-Polsky, A. A Complete spatial map of mouse retinal ganglion cells reveals density and gene expression specializations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBudoff%2C+SA+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Ames&prime ; Moyen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1420-10X1L</td><td>Marque spécifique non importante</td></tr><tr><td>Beadsmith Thread Zap, Thread Burner</td><td>The Beadsmith Store</td><td>7.90524E+11</td><td>D’autres cautériseurs peuvent être utilisés</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>cm1950</td><td>Les considérations importantes sont le volume contrôlable séparément par rapport à la température de la scène.</td></tr><tr><td>Glace sèche</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA Fine</td></tr><tr><td>Science Tools Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools 1129500</td><td>NC9889584</td><td>Marque spécifique non importante</td></tr><tr><td>Fisher Healthcare Tissue-Plus O.C.T. Compound</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td>Marque spécifique non importante</td></tr><tr><td>Fisherbrand Pince à épiler / pince haute précision droite mince à pointe fine</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-127</td><td>Marque spécifique non importante</td></tr><tr><td>Fisherbrand Ciseaux de dissection standard</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-951-20</td><td>Marque spécifique non importante</td></tr><tr><td>Fisherbrand Superfrost Plus Lames de microscope</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-246</td><td>Marque spécifique non importante</td></tr><tr><td>Integra Miltex Noyes Ciseaux à iris</td><td>Integra Miltex 181510</td><td>12-460-278</td><td>Marque spécifique non importante</td></tr><tr><td>Olympus IX81 microscope</td><td></td><td></td> à épifluorescence à disque rotatif <td>Pour Figure 7</td></tr><tr><td>RNAscope HiPlex</td><td>ACDBio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lunettes de couverture rectangulaires</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541-033</td><td>Marque spécifique non importante</td></tr><tr><td>Bicarbonate</td><td>de sodium Sigma-Aldrich S6014-25G</td><td></td><td>Marque spécifique non importante</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nunc Plats à fond en verre</td><td>Fisher Scientifique</td><td>12-567-400</td><td>Marque spécifique non importante</td></tr><tr><td>World Precision Instrument Microscope trinoculaire stéréo de précision (IV) sur support de perche</td><td>World Precision Instrument PZMTIVBS</td><td>50-253-8607</td><td>Marque spécifique non importante</td></tr><tr><td>Zeiss Axio Imager.M2 microscope à épifluorescence&nbsp ;</td><td></td><td></td><td>Section optique activée (pour la figure 8)</td></tr></tbody></table>

en face cryosectionnement de la rétine de souris pour l’analyse moléculaire spatiale de haute dimension

En face Cryosectioning of Mouse Retina for High-dimensional Spatial Molecular Analysis

La mise en œuvre réussie de ce protocole produit des coupes rétiniennes intactes adaptées à de multiples approches de profilage moléculaire tout en maintenant des relations spatiales à travers la surface rétinienne. Nous démontrons l’utilité du protocole par une approche de validation systématique, allant de l’immunohistochimie conventionnelle au profilage moléculaire automatisé à haut débit en passant par la détection manuelle d’ARN multiplex.
La validation initiale de notre protocol...

En face Cryosectionnement de la rétine de souris pour l’analyse moléculaire spatiale de haute dimension

The complex laminar structure of the retina presents significant challenges for comprehensive spatial molecular mapping. Current techniques for ...

en-face-cryosectioning-mouse-retina-for-high-dimensional-spatial

Research

Recherche

JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

La technique de dissection illustre énucléation de l'oeil de la souris pour la fixation des tissus pour réaliser le phénotypage à haut débit écrans.

L&#39;énucléation des yeux de souris à distance pour le phénotypage à haut débit

Source : Wang, Z., et al. Imagerie transpupillaire à deux photons in vivo de la rétine de souris.  J. Vis. Exp. (2021). Cette vidéo présente une technique d’imagerie rétinienne in vivo utilisant la microscopie à deux photons. Les souris anesthésiées sont préparées pour l’imagerie en fixant leur tête, en appliquant un lubrifiant pour les yeux et en plaçant une lamelle sur l’œil. Les cellules ganglionnaires rétiniennes (CGR) exprimant des protéines fluorescentes sont d’abord visualisées à l’aide...

Imagerie in vivo à deux photons de la rétine de la souris

Nous décrivons ici un protocole pour une microdissection laser reproductible de la saisie (LCM) pour isoler le réseau trabéculaire (TM) pour l’analyse en aval de RNA. La capacité d’analyser les changements dans l’expression des gènes dans le TM aidera à comprendre les mécanismes moléculaires sous-jacents des maladies oculaires liées au TM.

Saisie Microdissection de trabéculum très Pure de souris yeux de laser pour l’analyse de l’Expression génique

Nous montrons trois techniques de préparation de tissus différents pour la visualisation d’immunohistochemical des péricytes microvasculaire rétine de rat, c'est-à-dire, cryo-sections, ensemble-montages et hypotonique isolement du réseau vasculaire.

Rétiniennes Cryo-sections, ensemble-montages et préparations hypotonique vaisseaux isolés pour la visualisation d’Immunohistochemical des péricytes microvasculaire

Ce rapport décrit des méthodes complètes pour préparer les sections congelées de rétine de souris pour l'immunohistochimie (IHC).  Les méthodes décrites incluent la dissection de la tasse postérieure oculaire, la fixation de paraformaldehyde, l'intégration dans la température de coupe optimale (OCT) orientation de médias et de tissu, sectionnement et immunostaining.

Préparation de la souris Retinal Cryo-sections pour l'immunohistochimie

L’imagerie in vivo est un outil puissant pour l’étude de la biologie dans la santé et la maladie. Ce protocole décrit l’imagerie transpupillaire de la rétine de la souris avec un microscope standard à deux photons. Il démontre également différentes méthodes d’imagerie in vivo pour marquer par fluorescence plusieurs cohortes cellulaires de la rétine.

Transpupillaire Imagerie in vivo à deux photons de la rétine de souris

Ce protocole présente deux techniques pour isoler les compartiments subcellulaires des photorécepteurs de bâtonnets murins pour l’analyse des protéines. La première méthode utilise de la rétine vivante et du papier filtre de cellulose pour séparer les segments extérieurs des tiges, tandis que la seconde utilise de la rétine lyophilisée et du ruban adhésif pour décoller les couches internes et externes des segments.

Deux méthodes de peeling pour l’isolement des compartiments des cellules photoréceptrices dans la rétine de la souris pour l’analyse des protéines

Ce protocole décrit en détail les étapes de la pré-intégration de l’immunomicroscopie électronique, en mettant l’accent sur l’exploration des circuits synaptiques et la localisation des protéines dans la rétine.

Étude des circuits rétiniens et de la localisation moléculaire par immunomicroscopie électronique pré-intégrée

Les péricytes dans le système vasculaire rétinien ont été examinés par coloration immunofluorescente avec le récepteur du facteur de croissance dérivé des plaquettes β après injection rétro-orbitaire de lectine fluorescente de tomate. La rétine marquée a ensuite été traitée avec la méthode de nettoyage des tissus et montée entière pour visualiser les vues tridimensionnelles des péricytes entourant le système vasculaire rétinien au microscope confocal.

Visualisation 3D des péricytes vasculaires rétiniens chez la souris par immunomarquage 

Un protocole pour la préparation de cryocoupes rétiniennes de souris et la réalisation d’immunomarquage sur les photorécepteurs est décrit. Cet article permet aux chercheurs de produire de manière cohérente des coupes rétiniennes congelées de souris avec une morphologie bien préservée et des résultats d’immunomarquage de haute qualité.

Cryosectionnement et immunomarquage de la rétine de souris

Découvrez la cryosection en face de la rétine de souris pour la transcriptomique spatiale. Cette méthode préserve l'organisation laminaire et permet le mapping complet des cellules ganglionnaires rétiniennes.

En face Cryosectionnement de la rétine de souris pour l’analyse moléculaire spatiale de haute dimension

Explorer plus de vidéos