Name: Amélioration de l’administration et de l’expression de gènes à l’aide de l’injection intraosseuse de plasmides d’éditeur de base d’adénine encapsulés dans des nanoparticules de chitosane (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-16T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Découvrez une méthode de thérapie génique utilisant l'injection intraosseuse de plasmides d'éditeur d'adénine encapsulés dans des nanoparticules de chitosane pour améliorer l'expression génique dans la moelle osseuse de souris.

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<ol><li>Ikawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+of+hemoglobinopathies%3A+Progress+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Gene therapy of hemoglobinopathies: Progress and future challenges.</a> Hum Mol Genet. 28 (R1), R24-R30 (2019).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubes PCR de 0,2 ml, bouchon plat</td><td>LABSELECT</td><td>&nbsp ; PT-02-C</td><td></td></tr><tr><td>Seringue de 1 mL</td><td>Anhui Jiangnan medical equipment Co., LTD</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>1 % de pentobarbital sodique</td><td>/</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Tubes de microcentrifugation de 1,5 ml</td><td>LABSELECT</td><td>Référence : MCT-001-150</td><td></td></tr><tr><td>10 & fois ; Tampon de chargement d’ADN</td><td>Vazyme</td><td>Réf. P022-01</td><td></td></tr><tr><td>10X T4 DNA Ligase Tampon 1 ml</td><td>TaKaRa Biotechnology(Dalian)Co.,LTD</td><td>2011A</td><td></td></tr><tr><td>1250 &mu ; l Pointe de pipette 102,1 mm</td><td>LABSELECT</td><td>Réf. T-001-1250</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu ; l Pointes de pipette 50.55mm</td><td>LABSELECT</td><td>&nbsp ; Réf. T-001-200</td><td></td></tr><tr><td>2x Tampon Phanta Maxa</td><td>Vazyme</td><td>Réf. P505-d1</td><td></td></tr><tr><td>4 ? centrifugeuse</td><td>Thermo Fisher</td><td>75002425</td><td></td></tr><tr><td>Tube à centrifuger de 50 ml</td><td>LABSELECT</td><td>Réf. T-012-50</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de culture cellulaire à 6 puits</td><td>LABSELECT</td><td>11110</td><td></td></tr><tr><td>Agar-agar</td><td>Sangon Biotech</td><td>A505255-0250</td><td></td></tr><tr><td>Ampère</td><td>Abiowell</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Chitosane</td><td>Sangon Biotech</td><td>A600614-0500</td><td></td></tr><tr><td>Agitateur de culture à température constante</td><td>Shanghai Zhicheng Analytical Instrument Manufacturing Co., LTD</td><td>ZWY-200D</td><td></td></tr><tr><td>Compteur de cellules automatisé Countess</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Comtesse II/II FL</td><td></td></tr><tr><td>Lames et support de chambre de comptage de cellules Countess, jetables</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Réf. C10228</td><td></td></tr><tr><td>Tampon CutSmart</td><td>Biolabs de la Nouvelle-Angleterre</td><td>B7204SVIAL</td><td></td></tr><tr><td>DH5 et alpha ;</td><td>Biosystèmes généraux</td><td>CS01010</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>gibco</td><td>C11995500BT</td><td></td></tr><tr><td>Mélange dNTP</td><td>Vazyme</td><td>Réf. P505-d1</td><td></td></tr><tr><td>Enzyme Esp3I</td><td>NEBiolabs</td><td>Réf. R0734S</td><td></td></tr><tr><td>Acide éthylènediaminetétraacétique</td><td>VETEC (sigma-aldrich)</td><td>V900106</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>OriCell</td><td>Référence : FBSAD-01011-500</td><td></td></tr><tr><td>Cytomètre en flux</td><td>BD FACSCalibur</td><td>342975</td><td></td></tr><tr><td>Tube d’écoulement</td><td>Biotechnologie Beyotime</td><td>FFC005-1sac</td><td></td></tr><tr><td>Microscope à fluorescence</td><td>Leica</td><td>427019</td><td></td></tr><tr><td>Kit de purification Gel Maxi</td><td>TIANGEN</td><td>DP210</td><td></td></tr><tr><td>Kit d’extraction d’ADN génomique</td><td>TIANGEN</td><td>DP304</td><td></td></tr><tr><td>Acide acétique glacial</td><td>China National Pharmaceutical Group Corporation</td><td>10000218</td><td></td></tr><tr><td>Marqueur d’ADN GoldBand DL2,000</td><td>OUI</td><td>Référence 10501ES60</td><td></td></tr><tr><td>Machine à glaçons</td><td>Shanghaizhengqiao</td><td>BNS-30</td><td>Laboratoire réservé</td></tr><tr><td>Tampon ImunoSep</td><td>Precision Biomedicals Co., LTD</td><td>604050</td><td></td></tr><tr><td>Megafuge 8 Petite série de centrifugeuses de paillasse</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>75004250</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Technologie de la vie</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 2000°</td><td>Thermo Fisher Scientific, États-Unis</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>SIGAM</td><td>S5881-500G</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>XiGene</td><td>XG3650</td><td></td></tr><tr><td>Vecteur PCMV-SPRY-ABE8E</td><td>/</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Appareil d’amplification PCR</td><td>Thermo Fisher</td><td>AKC96300441</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline/Streptomycine&nbsp ;</td><td>Solarbio</td><td>P1400</td><td></td></tr><tr><td>Peptone</td><td>Sangon Biotech</td><td>A505247-0500</td><td></td></tr><tr><td>ADN polymérase Phanta Max Super-Fidelity</td><td>Vazyme</td><td>Réf. P505-d1</td><td></td></tr><tr><td>Lysat de globules rouges</td><td>Beyotime</td><td>Réf. C3702</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium</td><td>China National Pharmaceutical Group Corporation</td><td>10019318</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate de sodium</td><td>Aladin</td><td>S433911</td><td></td></tr><tr><td>T-001-10 10&mu ; l Pointes de pipette 31.65mm</td><td>LABSELECT</td><td>&nbsp ; Réf. T-001-10</td><td></td></tr><tr><td>T4 ADN ligase</td><td>TaKaRa Biotechnology(Dalian)Co.,LTD</td><td>2011A</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>BioFroxx</td><td>1115KG001</td><td></td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>Sangon Biotech</td><td>A505250-0500</td><td></td></tr><tr><td>Mélangeur vortex</td><td>sigma</td><td>Z258423</td><td></td></tr><tr><td>Bain-marie</td><td>Shanghaiyiheng</td><td>DK-80</td><td></td></tr><tr><td>Teinture en gel d’acide nucléique YeaRed</td><td>OUI</td><td>Référence 10203ES76</td><td></td></tr><tr><td>Extrait de levure</td><td>BBI</td><td>A610961-0500</td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer Nano</td><td>Malvern Panalytical</td><td>Zetasizer Nano ZS</td><td></td></tr><tr><td>&bêta ;-mercaptoéthanol&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>444203</td><td></td></tr></tbody></table>

amélioration de l’administration et de l’expression de gènes à l’aide de l’injection intraosseuse de plasmides d’éditeur de base d’adénine encapsulés dans des nanoparticules de chitosane

Enhanced Gene Delivery and Expression using Intraosseous Injection of Chitosan Nanoparticles Encapsulated Adenine Base Editor Plasmids

Des plasmides in vitro ont été injectés à des souris par injection intraosseuse (Figure 1A). La taille moyenne des particules des nanoparticules était d’environ 202,9 nm, le potentiel était de 2,77 mV et le PDI était de 0,22 (Figure 1B). La figure 1C montre la forme de surface des nanoparticules observées comme sphériques par microscopie électronique. La figure 1D</stro...

Amélioration de l’administration et de l’expression de gènes à l’aide de l’injection intraosseuse de plasmides d’éditeur de base d’adénine encapsulés dans des nanoparticules de chitosane

The delivery of exogenous plasmids into experimental animals is crucial in biomedical research, including the investigation of gene functions, the ...

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Dans la transfection in vivo d'ADN nu par la délivrance de gènes hydrodynamique introduit les gènes dans le tissu d'un animal avec une réponse inflammatoire minime. Des quantités suffisantes de produit du gène sont générées de telle sorte que la fonction des gènes et de la réglementation ainsi que la structure et la fonction des protéines peuvent être analysées.

Expression transitoire de protéines par hydrodynamique Gene livraison chez la souris

Ces études rendent compte de la fixation réversible des vecteurs de gènes adénoviraux sur des surfaces métalliques sans revêtement de stents et de disques à mailles modèles. La libération prolongée de particules virales capables de transduction subordonnée à l’hydrolyse des agents de réticulation utilisés pour l’immobilisation des vecteurs entraîne une expression durable du transgène spécifique au site dans les cellules vasculaires et dans les artères munies d’une endoprothèse.

Vasculaire Transfert de gènes à partir de stent métallique surfaces à l&#39;aide vecteurs adénoviraux Tethered par hydrolysables de la Croix-linkers

La différenciation des cellules précurseurs en ostéoclastes est régulée par les cytokines et les facteurs de croissance. Ici, une nouvelle technique de transfert de gènes pour la différenciation des ostéoclastes in vivo et des protocoles de culture cellulaire pour différencier les cellules précurseurs en ostéoclastes in vitro comme méthode d’étude des effets des cytokines sur l’ostéoclastogenèse sont décrits.

A Novel In vivo Technique Gene Transfer et In vitro Essais cellule sur la base de l'étude de la perte osseuse dans les troubles musculo-squelettiques

Ce protocole décrit un système de transplantation cellulaire utilisant des sphéroïdes injectables génétiquement modifiés. Les sphéroïdes cellulaires sont cultivés sur des plaques de culture à micromotifs et récupérés après l’introduction du gène à l’aide de nanomicelles polyplexes. Ce système facilite l’expression prolongée du transgène à partir des cellules transplantées chez les animaux hôtes tout en maintenant la fonction innée des cellules.

Transfection génique vers les cellules Spheroid sur microélectrodes plaques de culture destinés à la transplantation de cellules génétiquement modifiées

Les méthodes existantes pour la modification des plantes ont une applicabilité limitée. La nouvelle technologie dérivée des peptides proposée ici promet à la fois simplicité et efficacité dans l’introduction de protéines ou de gènes exogènes dans les compartiments intracellulaires souhaités de plantes intactes.

Peptide dérivé Méthode du transport des gènes et des protéines Across cellulaire et obstacles organites dans les plantes

Ce protocole est une alternative rentable pour exprimer l'ADN plasmidique nu dans la peau de la souris. L'objectif général du protocole est de délivrer des gènes liées au système immunitaire dans le tissu de la peau pour délimiter le rôle fonctionnel d'un gène spécifique dans l'inflammation cutanée.

Développement d&#39;un ADN Système économique Livraison par « Acufection » et son application à la recherche de la peau

Ce protocole décrit une méthode pour injecter de l’ADN de plasmide dans le rein de souris via le bassinet pour produire l’expression du transgène spécifiquement dans le rein.

Injection hydrodynamique bassinet non-virale expression des protéines dans le rein

Cette méthode décrit le placement des greffes de veine d’interposition chez le lapin, la transduction des greffons et la réalisation d’expression du transgène durables. Cela permet à l’enquête des rôles physiologiques et pathologiques des transgènes et leurs produits protéiques dans les veines greffées et essais de thérapies géniques pour veine du greffon.

Un modèle de lapin d’Expression du transgène durables dans la veine jugulaire à des greffes d’Interposition artère carotide commune

L’utilisation d’un modèle de tumeur autochtone immunocompétent piloté par des mutations courantes de patients pour les tests précliniques est essentielle pour les tests immunothérapeutiques. Ce protocole décrit une méthode pour générer des modèles murins de tumeurs cérébrales en utilisant l’administration d’ADN plasmidique basée sur l’électroporation qui représentent les mutations courantes des patients, fournissant ainsi un modèle murin précis, reproductible et cohérent.

Modélisation de tumeurs cérébrales in vivo à l’aide de l’administration par électroporation d’ADN plasmidique représentant les signatures de mutation des patients

Ce protocole décrit comment l’injection intrasplénique de petits ARN en épingle à cheveux délivrés par AAV8 atteint la même efficacité d’inactivation génique dans le foie que l’injection dans la veine porte, représentant une procédure plus simple avec une mortalité et des complications périopératoires et postopératoires beaucoup plus faibles.

Inactivation efficace d’un gène dans le foie par injection intrasplénique d’un petit ARN en épingle à cheveux délivré par le virus adéno-associé de sérotype 8 (AAV8)

Ce protocole vise à introduire une méthode permettant de produire et de purifier des biomimétiques extracellulaires de vésicules dérivées des cellules souches mésenchymateuses (MSC) pour la thérapie génique. La nanovésicule est confinée par des bicouches lipidiques dérivées de la MSC et encapsule des VA recombinants portant le gène d’intérêt dans la lumière. Cette nanovésicule offre un vecteur amélioré pour la délivrance de gènes in vivo .

Développement de nanovésicules enveloppées de membrane des cellules souches mésenchymateuses pour une meilleure délivrance de gènes

Découvrez une méthode de thérapie génique utilisant l'injection intraosseuse de plasmides d'éditeur d'adénine encapsulés dans des nanoparticules de chitosane pour améliorer l'expression génique dans la moelle osseuse de souris.

Amélioration de l’administration et de l’expression de gènes à l’aide de l’injection intraosseuse de plasmides d’éditeur de base d’adénine encapsulés dans des nanoparticules de chitosane (Vidéo) | JoVE Journal

Amélioration de l’administration et de l’expression de gènes à l’aide de l’injection intraosseuse de plasmides d’éditeur de base d’adénine encapsulés dans des nanoparticules de chitosane

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