Name: Les analyses et les choix non-choix pour tester la résistance de A. thaliana dinsectes broyeurs (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: Découvrez comment évaluer la résistance d'Arabidopsis thaliana contre Pieris rapae grâce aux expériences de choix et de non-choix. Cette méthode révèle le rôle crucial de l'acide jasmonique et des glucosinolates dans les mécanismes de défense des plantes.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Aucune expérience du choix: <ol><li> Soigneusement placer la plante Arabidopsis d&#39;intérêt dans une tasse en plastique. Dans ce cas: Col-0 (WT) et un mutant déficience dans la production de JA. Assurez-vous de limiter les dommages aux feuilles. Pour cela j&#39;utilise le dos de ce pinceau. </li><li> Utilisez un pinceau fin pour prendre une larve fraîchement écloses de la colonie sur le chou. </li><li> Placez délicatement la larve sur les plantes d&#39;Arabidopsis. </li><li> Larve de poids au jour 4, 7, 10. ASTUCE: Faites pousser vos plants dans des conditions de jours courts (8 h de lumière) pour augmenter la croissance végétative (1 larve peut remplir son cycle de vie complet sur une plante). </li></ol> Expérience choix: <ol><li> Deux usines sont sélectionnés, un de chaque génotype. Le mieux est de faire pousser des plantes dans le même pot, afin de limiter les autres facteurs, tels que des effets plateau, etc </li><li> Placez les plantes dans une cage papillon. </li><li> Sélectionnez une femelle fertile. J&#39;ai l&#39;habitude de prendre un féminin qui est activement à pondre dans la colonie d&#39;élevage. </li><li> Communiqué de la femelle dans la cage avec le choix de deux usines pendant 24 heures. </li></ol> Astuce 1: Pour éliminer un effet d&#39;apprentissage, ne pas réutiliser les femelles pour les tests de choix ultérieurs. ASTUCE 2: On ne peut comparer les plantes qui ont un phénotype de croissance similaires. Sinon, vous pourriez monter une feuille de chaque génotype sur le dessus d&#39;une fiole Erlenmeyer et de comparer leur attrait pour une femelle. S&#39;il vous plaît visitez <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825">examens annuels de biologie végétale</a> pour plus d&#39;informations sur ce protocole et l&#39;immunité des plantes aux insectes herbivores.

les analyses et les choix non-choix pour tester la résistance de a. thaliana d&#39;insectes broyeurs

Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects

Les larves du papillon du chou blanc petits sont un parasite en milieu agricole. Cette espèce chenille se nourrit de plantes de la famille des choux, qui comprennent de nombreuses cultures comme le chou, le brocoli, les choux de Bruxelles élevage des insectes etc a lieu sur les plantes de chou dans les serres. Au moins deux cages sont nécessaires pour l&#39;élevage de Pieris rapae. Un pour les larves et l&#39;autre pour contenir les adultes, les papillons. Afin d&#39;étudier le rôle des hormones végétales et de produits chimiques toxiques dans les plantes une résistance à cet insecte ravageur, nous démontrons deux expériences. Premièrement, la détermination du rôle de l&#39;acide jasmonique (JA - une hormone végétale souvent indiqué dans la résistance aux insectes) dans la résistance à la mastication des insectes Pieris rapae. Caterpillar croissance peut être comparée sur les plantes de type sauvage et mutants déficients dans la production de JA. Cette expérience est considérée comme &quot;No Choice&quot;, car les larves sont contraints de survivre sur une seule plante qui synthétise ou est déficient en JA. Deuxièmement, nous démontrons une expérience qui étudie le rôle des glucosinolates, qui sont utilisées comme oviposition (ponte) des signaux. Ici, nous utilisons Arabidopsis WT et mutants déficients dans la production de glucosinolates dans un &quot;choix&quot; expérience dans laquelle les papillons femelles sont autorisés à choisir pour pondre leurs oeufs sur des plantes de génotype soit. Cette vidéo montre le montage expérimental pour les deux dosages ainsi que des résultats représentatifs.

La résistance des plantes aux insectes herbivores mâcher peut être testée à plusieurs égards. Ici, nous montrons comment mettre en place un choix et une expérience non-choix avec la plante modèle Arabidopsis thaliana pour identifier la résistance contre les parasites des espèces Pieris rapae.

Les analyses et les choix non-choix pour tester la résistance de A. thaliana d&#39;insectes broyeurs

Les larves de la piéride du chou sont un ravageur en milieu agricole. Cette espèce de chenille se nourrit de plantes de la famille des brassicacées, lesquelles...

Les larves de la piéride du chou sont une nuisance dans les environnements agricoles. Cette espèce de chenille se nourrit de plantes de la famille des brassicacées, qui incluent de nombreuses cultures telles que le chou, le brocoli et les choux de Bruxelles, ainsi que bien d'autres. Curieusement, les plantes peuvent développer une résistance aux herbivores, comme la piéride du chou, et dans cette vidéo, nous testerons la résistance de l'espèce végétale modèle Arabidopsis thaliana à cet insecte phytophage en utilisant deux méthodes.Bonjour, je suis Martin Navos, chercheur postdoctoral dans le laboratoire de George Jander à l'Institut de recherche Bo Thompson pour les études planifiées. Aujourd'hui, je vais vous montrer comment mettre en place une expérience avec choix et sans choix, en utilisant Arabidopsis thaliana comme plante modèle pour étudier la résistance aux ravageurs phytophages.L'élevage des chenilles a lieu sur des plants de chou en serre. Deux cages au moins sont nécessaires pour l'élevage de Peter. Une cage est destinée aux larves, et l'autre contient les adultes, les papillons, afin de démontrer le rôle des hormones végétales et des produits chimiques végétaux toxiques.Dans le cadre de ce test sur la résistance aux insectes, je souhaite présenter deux expériences. La première consistera à déterminer le rôle de l'acide jasmonique, une hormone végétale souvent impliquée dans la résistance aux insectes.Dans une expérience sans choix, la croissance des chenilles peut être comparée sur des plantes de type sauvage et sur des plantes mutantes dont la production d'acide mon est altérée. L'hypothèse serait que les larves prennent plus de poids sur la plante mutante. Commençons donc la première expérience.Nous allons donc réaliser une expérience sans choix avec les plantes, une Revit opsis elliana, afin de mesurer le gain de poids des larves de purest rapha. Ce que nous devons faire tout d'abord, c'est enfermer soigneusement ces plantes. Dans l'un de ces gobelets, nous coupons le fond de ce gobelet en plastique.Ainsi, afin d'enclore, j'utilise l'extrémité arrière de ce pinceau fin. Sans endommager les feuilles, nous allons enclore ces plantes. Nous disposons donc ici d'une expérience sans choix entre les plantes de type sauvage opss et les plantes mutantes.Le mutant est un mutant déficient en acide jasmonique et est probablement plus sensible à l'alimentation. Il s'agit d'une expérience sans choix, car une larve ne peut choisir qu'entre un seul génotype de plantes. Nous allons donc ajouter une larve à chaque cupule.Il est important de commencer avec des larves qui viennent juste d'éclore. On les appelle des larves L1. Voici donc une larve qui vient de naître.Très bien, je vais donc déposer soigneusement cette larve sur la bande de test. L'étape suivante consiste à enfermer ces plantes avec leur unique larve, et j'utilise une maille fine et un ruban oléique pour les fermer afin qu'elles ne puissent pas s'échapper en rampant. Ensuite, nous attendons quelques jours, généralement sept jours, avant de mesurer le gain de poids de la larve.Après sept jours d'alimentation, nous sortons les larves et les pesons sur cette balance. À l'aide de pinces flexibles, nous prélevons délicatement les larves et enregistrons leur poids. Celui-ci pèse presque 250 milligrammes. Je vais comparer le poids de cette chenille élevée sur la plante mutante avec le poids de la chenille élevée sur la plante de type sauvage.Comme vous pouvez le constater immédiatement, il reste beaucoup plus de tissu végétal sur la plante de type sauvage. Nous supposons donc que la larve a pris moins de poids. La larve sur la plante de type sauvage pèse seulement environ cent milligrammes.Il existe donc une énorme différence, tant au niveau de la quantité de tissu consommée qu'au gain de poids des larves. Voilà donc pour l'expérience sans choix. Passons maintenant à l'expérience avec choix, voulez-vous ?Les ravageurs spécialisés identifient et sont attirés par des signaux hôtes qui sont toxiques pour les ravageurs généralistes. Dans le cas du pi, les glucosinolates rapides sont utilisés comme signal de surposition lénée. Ici, j'utiliserai des plants de type sauvage et des mutants de rabbit opsis altérés dans la production de glucosinolates.Pour illustrer une expérience de choix, avant de commencer cette expérience, il est nécessaire d'être capable de distinguer les papillons mâles des femelles. Voici un exemple : les femelles de bureaux de papillons rapides possèdent deux points sur chaque aile, tandis que les mâles n'en ont qu'un ; parfois, les mâles peuvent être confondus avec des femelles s'ils présentent une deuxième marque, souvent faible. Mettons donc en place l'expérience de choix.Dans ce cas, nous disposons à la fois d'une plante de type sauvage et d'une plante mutante. La plante mutante présente un défaut dans la production de glucosinolates. Rappelons que les glucosinolates sont toxiques pour les herbivores généralistes, mais que les espèces spécialisées comme la pyrale avec laquelle nous travaillons sont attirées par les glucosinolates.Ces cinq stades larvaires correspondent à ceux de la chenille de papillon, le plus petit, désigné L1, étant le premier stade larvaire, puis ils grossissent progressivement jusqu'au cinquième stade larvaire. Ensuite, ils se transforment en chrysalide et la métamorphose complète a lieu, donnant naissance aux papillons adultes. Pour cette expérience de choix, nous utilisons une cage dans laquelle j'ai placé à la fois la plante sauvage et la plante mutante, et maintenant je vais y introduire une femelle papillon.Pour évaluer l'acai, j'attrape généralement des femelles fertiles. Afin de m'assurer qu'elles sont fertiles, j'attrape des femelles qui pondent activement des œufs, je place délicatement ma main autour de l'insecte et je la transfère dans la cage d'essai. Nous laissons donc le papillon pendant 24 heures, puis nous comptons le nombre d'œufs pondus sur chacun de ces génotypes.Voici quelques conseils utiles lorsque vous réalisez ce type d'expériences : tout d'abord, lors de la sélection d'un papillon femelle, ne l'utilisez pas pour des expériences ultérieures car un effet d'apprentissage est possible. Deuxièmement, on ne peut comparer que des plantes présentant des phénotypes de croissance similaires. Ainsi, si vous disposez de plantes dont les phénotypes de croissance diffèrent, vous pouvez prélever des feuilles de taille comparable et les fixer au-dessus d'un flacon LMI.Ainsi, après 24 heures écoulées, nous pouvons d'abord retirer les plantes. La plante de type sauvage, comme vous pouvez le voir, présente de nombreux œufs, tandis que la plante mutante, le mutant dépourvu de glucosinolates. Elle ne possède donc pas de stimulus de type glucosinolate ou d'acai.Comme vous pouvez le constater, il y a presque aucun œuf, ou très peu du moins, sur la plante mutante. Alors qu’il y a beaucoup d’œufs sur la plante sauvage. Je viens donc de vous montrer comment mettre en place des expériences afin de déterminer la résistance face aux insectes.La première expérience était une expérience sans choix. Des expériences dans lesquelles nous avons comparé le gain de poids larvaire sur des plantes mutantes par rapport à des plantes de type sauvage. La deuxième expérience, une expérience avec choix.Nous avons comparé l'accla par une femelle de papillon également sur une plante mutante par rapport à une plante de type sauvage. Merci beaucoup. C'est tout.J'espère que cela sera utile pour vos expériences.

choice-no-choice-assays-for-testing-resistance-thaliana-to-chewing

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dans cette vidéo, et le dosage est démontré que les tests de la tolérance de la nicotine à deux types de pucerons qui infestent les plantes de tabac sur le terrain et celui qui n'en a pas.

Vérification de la tolérance à la nicotine chez les pucerons Utiliser une alimentation artificielle Experiment

Cette vidéo explique les mécanismes de résistance de la plante hôte à l'herbivorie et démontre un test non-choix que les estimations de la contribution relative de l'antibiose et de la tolérance au cercope...

Caractériser les mécanismes de résistance Herbivores: cercopes sur Brachiaria Spp. comme un exemple

Cette vidéo décrit le test de préférence gustative, une méthode comportementale utilisée pour mesurer l'attraction ou l'évitement envers les solutions colorées qui ont un goût différent en évaluant la coloration abdominale de la mouche après l'ingestion de la substance préférée. Le protocole présenté illustre la procédure utilisée pour mesurer la préférence des mouches pour les solutions de concentrations variables en saccharose.

Dosage de la préférence gustative : une méthode pour mesurer le comportement alimentaire chez la drosophile

Une verticale, labyrinthe en T olfactomètre est décrite pour le dosage de la réponse comportementale des arthropodes. L'olfactomètre permet à l'expérimentateur de mesurer les choix effectués par les sujets testés lorsqu'ils sont soumis à deux champs d'odeurs potentielles. Tant d'attraction et de répulsion à partir de substances odorantes peuvent être mesurés avec cet appareil.

Vertical Test Choix labyrinthe en T pour la réponse aux arthropodes odorants

Le goût est un processus sensoriel important qui facilite l’attraction vers les substances bénéfiques et l’évitement des substances toxiques.  Ce protocole décrit un essai d’ingestion simple permettant de déterminer la préférence gustative de la drosophile pour un composé chimique donné.

Goût préférence Essai pour adultes<em&gt; Drosophila</em

Ici, nous présentons un dosage spécifique de Caenorhabditis elegans conçu pour évaluer les changements dans le comportement d'aversion au cuivre et la capacité de localiser une source alimentaire commune, à mesure que l'organisme progresse d'un état nutritionnel nourri à un affamé.

UNE<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Ensemble d&#39;aversion en cuivre à base d&#39;état nutritionnel

Nous présentons une configuration et un protocole d'enregistrement du comportement qui permettent une analyse automatisée du nématode, la préférence de Caenorhabditis elegans pour les composés solubles dans un dosage basé sur la population. Cet article décrit la construction d'une chambre de comportement, du protocole d'analyse comportementale et de l'utilisation d'un logiciel d'analyse vidéo.

Analyse automatisée d&#39;un essai de préférence chimiosensible basée sur la population à base de nématodes

Nous présentons ici un protocole afin d’étudier la préférence de nymphose des larves matures de Ectropis grisescens en réponse aux facteurs de sol (p. ex., contenu de l’humidité et du type de substrat) à l’aide de tests biologiques de choix. Nous présentons également un protocole d’essais biologiques sans choix de déterminer les facteurs qui influent sur les comportements de nymphose et la survie des E. grisescens.

Choix et sans choix bioessais pour étudier la préférence de nymphose et succès à l’émergence de Ectropis grisescens

La méthode présentée crée des tissus végétaux naturels endommagés par l'herbivore grâce à l'application de larves de sexta de Manduca sur des feuilles détachées de pommes de terre. Le tissu végétal est mis en ligne pour l'expression de six homologs de facteur de transcription impliqués dans les réponses précoces à l'herbivorie d'insecte.

Des essais de feuilles détachées pour simplifier les études sur l'expression génique de la pomme de terre pendant l'infestation par l'insecte à mâcher Manduca sexta

Nous présentons un protocole pour un essai d'alimentation à deux choix pour les mouches. Cet essai d'alimentation est rapide et facile à exécuter et convient non seulement pour la recherche en laboratoire à petite échelle, mais aussi pour les écrans comportementaux à haut débit chez les mouches.

Un test rapide de préférence alimentaire à Drosophila

Ce protocole décrit l’essai d’alimentation obligatoire pour évaluer l’effet potentiellement toxique d’un phytochimique sur les larves d’insectes lépidoptères. Il s’agit d’un essai biologique sur les insectes hautement évolutif, facile à optimiser la dose sublétale et létale, l’activité dissuasive et l’effet physiologique. Cela pourrait être utilisé pour le criblage d’insecticides respectueux de l’environnement.

Mise au point d’un système d’analyse de l’alimentation pour évaluer l’effet insecticide des composés phytochimiques sur Helicoverpa armigera

Découvrez comment évaluer la résistance d'Arabidopsis thaliana contre Pieris rapae grâce aux expériences de choix et de non-choix. Cette méthode révèle le rôle crucial de l'acide jasmonique et des glucosinolates dans les mécanismes de défense des plantes.

Les analyses et les choix non-choix pour tester la résistance de A. thaliana d'insectes broyeurs

Explorer plus de vidéos