Name: Analyse 3D simultanée des lésions cardiaques et de la réponse immunitaire dans l’infarctus aigu du myocarde reperfusé à l’aide de la microscopie à fluorescence à feuillet de lumière (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Découvrez l'analyse 3D simultanée des lésions cardiaques et de la réponse immunitaire après infarctus du myocarde chez la souris. Cette méthode par microscopie à feuillet de lumière permet de localiser précisément les zones endommagées et les interactions cellulaires.

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<ol><li>Whelan, R. S., Kaplinskiy, V., Kitsis, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+death+in+the+pathogenesis+of+heart+disease%3A+mechanisms+and+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cell death in the pathogenesis of heart disease: mechanisms and significance.</a> Annu Rev Physiol. 72, 19-44 (2010).</li>
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<li>Totzeck, M., Hendgen-Cotta, U. B., French, B. A., Rassaf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+approach+to+remote+ischemic+preconditioning+and+ischemic+preconditioning+against+myocardial+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Methods%22%5BJournal%5D)">A practical approach to remote ischemic preconditioning and ischemic preconditioning against myocardial ischemia/reperfusion injury.</a> J Biol Methods. 3 (4), e57(2016).</li>
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<li>Coolen, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+T1+mapping+of+the+mouse+heart+using+variable+flip+angle+steady-state+MR+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional T1 mapping of the mouse heart using variable flip angle steady-state MR imaging.</a> NMR Biomed. 24 (2), 154-162 (2011).</li>
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<li>Taki, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((14C-Methionine+uptake+as+a+potential+marker+of+inflammatory+processes+after+myocardial+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">14C-Methionine uptake as a potential marker of inflammatory processes after myocardial ischemia and reperfusion.</a> J Nucl Med. 54 (3), 431-436 (2013).</li>
<li>Michel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD1+deficiency+modifies+cardiac+immunity+during+baseline+conditions+and+in+reperfused+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">PD1 deficiency modifies cardiac immunity during baseline conditions and in reperfused acute myocardial infarction.</a> Int J Mol Sci. 23 (14), 7533(2022).</li>
<li>Park, K. C., Gaze, D. C., Collinson, P. O., Marber, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+troponins%3A+from+myocardial+infarction+to+chronic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac troponins: from myocardial infarction to chronic disease.</a> Cardiovasc Res. 113 (14), 1708-1718 (2017).</li>
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<li>Klingberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fully+automated+evaluation+of+total+glomerular+number+and+capillary+tuft+size+in+nephritic+kidneys+using+light+sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Fully automated evaluation of total glomerular number and capillary tuft size in nephritic kidneys using light sheet microscopy.</a> J Am Soc Nephrol. 28 (2), 452-459 (2017).</li>
<li>Weiss, K. R., Voigt, F. F., Shepherd, D. P., Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tutorial%3A+practical+considerations+for+tissue+clearing+and+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Tutorial: practical considerations for tissue clearing and imaging.</a> Nat Protoc. 16 (6), 2732-2748 (2021).</li>
<li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-brain+imaging+with+single-cell+resolution+using+chemical+cocktails+and+computational+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Whole-brain imaging with single-cell resolution using chemical cocktails and computational analysis.</a> Cell. 157 (3), 726-739 (2014).</li>
<li>Erturk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nat Protoc. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li>
<li>Merz, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+three-dimensional+imaging+for+precise+staging+in+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">High-resolution three-dimensional imaging for precise staging in melanoma.</a> Eur J Cancer. 159, 182-193 (2021).</li>
<li>Hofmann, J., Gadjalova, I., Mishra, R., Ruland, J., Keppler, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+tissue+clearing+and+multi-organ+volumetric+imaging+enable+quantitative+visualization+of+sparse+immune+cell+populations+during+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Efficient tissue clearing and multi-organ volumetric imaging enable quantitative visualization of sparse immune cell populations during inflammation.</a> Front Immunol. 11, 599495(2020).</li>
<li>Pichardo, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+tissue+clearing+to+study+the+intra-pulmonary+biodistribution+of+intravenously+delivered+mesenchymal+stromal+cells+and+their+interactions+with+host+lung+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Optical tissue clearing to study the intra-pulmonary biodistribution of intravenously delivered mesenchymal stromal cells and their interactions with host lung cells.</a> Int J Mol Sci. 23 (22), 14171(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Aiguille de 27 g</td><td>Becton Dickinson</td><td>305889</td><td>BD Eclipse</td></tr><tr><td>Traitement d’images 3D & logiciel d’analyse</td><td>Plan binaire</td><td>Vers. 10.1.0</td><td>Imaris</td></tr><tr><td>Suture 5-0</td><td>Serag-Wiessner</td><td>IC108000</td><td>Soie</td></tr><tr><td>Suture 6-0</td><td>Éthicon</td><td>EH7814</td><td>Prolène</td></tr><tr><td>Kit d’étiquetage d’anticorps AlexaFluor 546</td><td>Invitrogen</td><td>N° A20183</td><td></td></tr><tr><td>Kit d’étiquetage d’anticorps AlexaFluor 790</td><td>Invitrogen</td><td>A20189</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-souris Ly6G (AlexaFluor 647)</td><td>Biolégende</td><td>127610</td><td>Clone : 1A8</td></tr><tr><td>Passoire à cellules (100 &micro ; m)</td><td>Corning</td><td>431752</td><td></td></tr><tr><td>Diméthylsulfoxyde (DMSO)</td><td>Carl Roth</td><td>7029.1</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol</td><td>Carl Roth</td><td>0911.4</td><td></td></tr><tr><td>Cinnémate d’éthyle (ECi)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>112372</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel de conversion de fichiers</td><td>Plan binaire</td><td>Vers. 10.1.0</td><td>Imaris</td></tr><tr><td>Gaze</td><td>Fuhrmann</td><td>10021</td><td></td></tr><tr><td>Gomme gellane en poudre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Réf. P8169</td><td>Le phytagel</td></tr><tr><td>Héparine (25.000 IE/5 mL)</td><td>LEO Pharma</td><td>15261203</td><td></td></tr><tr><td>Peroxyde d’hydrogène (H2O2, 30 %)</td><td>Carl Roth</td><td>8070.2</td><td></td></tr><tr><td>Seringue d’injection</td><td>B Braun</td><td>Référence 9161502S</td><td>Omnican F</td></tr><tr><td>Kétamine (100 mg/mL)</td><td>bela-pharma</td><td>402581.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Système de microscope à feuillet de lumière</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>-</td><td>UltraMicroscope Blaze</td></tr><tr><td>Seringue Luer Lock</td><td>Becton Dickinson</td><td>303172</td><td>BD Plastipak</td></tr><tr><td>Agitateur magnétique</td><td>VWR</td><td>444-0572</td><td></td></tr><tr><td>Appareil photo Neo sCMOS (4,2 MP)</td><td>Technologie Andor</td><td>Cellule ZL41 4.2</td><td></td></tr><tr><td>Objectif</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-133-625</td><td>MI Plan 1,1x NA 0,1, WD 17,6 mm</td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde (PFA, 4 %)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.00496</td><td>10 % formol, tamponné neutre</td></tr><tr><td>Pétri</td><td>Greiner Bio-One</td><td>632181</td><td></td></tr><tr><td>Solution saline tamponnée au phosphate (PBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td>Sans MgCl2/CaCl2</td></tr><tr><td>Tube en polypropylène (15 mL)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>188261</td><td></td></tr><tr><td>Tube en polypropylène (5 mL)</td><td>Carl Roth</td><td>EKY9.1</td><td>Noir</td></tr><tr><td>Tube en polypropylène (50 mL)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Plat de préparation pour la canulation du cœur de souris</td><td>Hugo Sachs Elektronik</td><td>73-4327</td><td>Canule incluse</td></tr><tr><td>Anticorps CD31 anti-souris purifié</td><td>Becton Dickinson</td><td>53369</td><td>Clone : MEC13.3</td></tr><tr><td>Pompe à rouleaux</td><td>Ismatec</td><td>ISM597-230</td><td></td></tr><tr><td>Film d’étanchéité</td><td>Bemis</td><td>Réf. PM-996</td><td>Parafilm</td></tr><tr><td>Stéréomicroscope</td><td>Leica</td><td>S6D</td><td></td></tr><tr><td>Rotateur de tube</td><td>Heidolph</td><td>Polymax 1040</td><td></td></tr><tr><td>Laser à lumière blanche</td><td>Photonique NKT</td><td>SuperK extrême</td><td>200 mW, 480&ndash ; 2400 milles marins</td></tr><tr><td>Souche de souris WT</td><td>Janvier Labs</td><td>-</td><td>C57BL/6JRj</td></tr><tr><td>Xylazine (2 %)</td><td>Ceva Tiergesundheit</td><td>6324464.00.00</td><td></td></tr></tbody></table>

analyse 3d simultanée des lésions cardiaques et de la réponse immunitaire dans l’infarctus aigu du myocarde reperfusé à l’aide de la microscopie à fluorescence à feuillet de lumière

Simultaneous 3D Analysis of Cardiac Damage and Immune Response in Reperfused Acute Myocardial Infarction Using Light Sheet Fluorescence Microscopy

L’approche présentée utilisant la microscopie à fluorescence à feuillet de lumière (LSFM) permet l’analyse simultanée de l’AAR, des lésions endothéliales et de l’infiltration des neutrophiles après repAMI. La figure 1A illustre la coloration intravitale et ex vivo des anticorps chez les souris C57BL/6J 24 h après l’induction de la repAMI. Des anticorps pour la coloration des lésions endothéliales cardiaques (anti-CD31 marqué avec AlexaFluor 790) et l’infiltration de neutrophiles (an...

Analyse 3D simultanée des lésions cardiaques et de la réponse immunitaire dans l’infarctus aigu du myocarde reperfusé à l’aide de la microscopie à fluorescence à feuillet de lumière

Complex cellular interactions determine functional and structural tissue remodeling during reperfused acute myocardial infarction (repAMI). These ...

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Une façon d’obtenir de nouvelles connaissances sur la complexité de la réponse inflammatoire cérébrale est présentée. Nous décrivons des protocoles basés sur l’immunofluorescence suivis d’une analyse confocale tridimensionnelle pour étudier le modèle de co-expression des marqueurs phénotypiques microglie/macrophage dans un modèle murin d’ischémie focale.

Trois dimensions d&#39;analyse confocale de marqueurs microglies / macrophages de polarisation dans Experimental Brain Injury

Ce protocole décrit une nouvelle méthode pour la comparaison 3D du tissu myocardique tout cœur avec l'IRM. Il est conçu pour l'évaluation précise des injections intramyocardiaques dans la zone frontalière de Infarctus d'un modèle porcin chronique d'un infarctus du myocarde.

3D entier coeur Myocardial analyse des tissus

Dans le cœur, les événements moléculaires coordonnent la fonction électrique et contractile de l'organe. Un ensemble de techniques de microscopie de fluorescence de champ locales présentées ici permet l'enregistrement des variables cellulaires dans les cœurs intacts. mécanismes définissant la fonction cardiaque Identifier est essentiel dans la compréhension comment le cœur fonctionne dans des situations pathologiques.

Champ local Fluorescence Microscopy: Imagerie signaux cellulaires dans les coeurs intacts

Ici, nous décrivons une approche de microscopie de feuille lumineuse pour visualiser l'infiltration de leucocytes CD45 + cardiaque dans un modèle murin de myocardite fulminante aseptique, qui est induite par le traitement intratrachéal de la toxine diphtérique des souris CD11c.DTR.

Visualisation quantitative de l&#39;infiltration de leucocytes dans un modèle murin de myocardite fulminante par microscopie à feuilles lumineuses

Cette étude utilise une technique de microscopie (LSFM) de fluorescence lumière-feuille recto-verso illumination combinée avec compensation optique pour étudier le coeur murin.

Microscopie de Fluorescence lumière-feuille pour l’étude du coeur murin

La prolifération cardiomyocyte suivant la blessure est un processus dynamique qui exige une symphonie des repères extracellulaires des populations de cellules non-myocytes. En utilisant le traçage de la lignée, le CLARITY passif et les techniques de microscopie confocale à monture entière en trois dimensions, nous pouvons analyser l’influence d’une variété de types de cellules sur la réparation cardiaque et la régénération.

Capturer la réponse aux blessures cardiaques des populations cellulaires ciblées par l’imagerie tridimensionnelle du cœur effacé

Une méthode raffinée de dégagement de tissu a été développée et appliquée au coeur adulte de souris. Cette méthode a été conçue pour effacer le tissu cardiaque dense et autofluorescent, tout en maintenant la fluorescence étiquetée de fibroblaste attribuée à une stratégie génétique de rapporteur.

Nettoyage des tissus à base de CLARTÉ raffiné pour l’organisation tridimensionnelle des fibroblastes dans les cœurs de souris sains et blessés

Nous rapportons une méthode de reconstruction mésoscopique de l’ensemble du cœur de souris en combinant de nouvelles avancées dans la transformation tissulaire et la coloration avec le développement d’un microscope à feuille de lumière à balayage axial.

Imagerie optique mésoscopique du cœur entier de souris

Ce protocole présente une collection de données géométriques sarcomères, calciques et macroscopiques provenant d’une trabécule cardiaque en contraction active ex vivo. Ces mesures simultanées sont rendues possibles par l’intégration de trois modalités d’imagerie.

Imagerie tomographique simultanée en champ lumineux, en fluorescence et par cohérence optique de trabécules cardiaques contractants ex vivo

Le protocole utilise la microscopie à feuillet de lumière avancée ainsi que des méthodes de nettoyage tissulaire adaptées pour étudier les structures cardiaques complexes dans les cœurs de rongeurs, ce qui présente un grand potentiel pour la compréhension de la morphogenèse et du remodelage cardiaques.

L’imagerie par feuillet de lumière révèle la structure cardiaque du cœur des rongeurs

Le test actuel de 2,3,5-Triphényltétrazolium (TTC) introduit un protocole de coloration affiné de la TTC qui permet l’analyse des lésions du myocarde à la résolution microscopique, produisant des images de haute qualité permettant une évaluation précise et fiable de la taille de l’infarctus et de la viabilité des cardiomyocytes au niveau cellulaire.

Un test microscopique de chlorure de 2,3,5-triphényltérazolium pour une analyse précise et fiable des lésions myocardiques

Découvrez l'analyse 3D simultanée des lésions cardiaques et de la réponse immunitaire après infarctus du myocarde chez la souris. Cette méthode par microscopie à feuillet de lumière permet de localiser précisément les zones endommagées et les interactions cellulaires.

Analyse 3D simultanée des lésions cardiaques et de la réponse immunitaire dans l’infarctus aigu du myocarde reperfusé à l’aide de la microscopie à fluorescence à feuillet de lumière (Vidéo) | JoVE Journal

Analyse 3D simultanée des lésions cardiaques et de la réponse immunitaire dans l’infarctus aigu du myocarde reperfusé à l’aide de la microscopie à fluorescence à feuillet de lumière

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