Name: Isolement, culture et caractérisation des fibroblastes associés au cancer de la prostate (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Découvrez l'isolation et la culture des fibroblastes associés au cancer de la prostate à partir de spécimens de prostatectomie radicale. Cette méthode permet d'étudier les interactions fibroblastes-tumeur et d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>Plaque à 12 puits</td><td>Sarstedt</td><td>833921</td><td></td></tr><tr><td>Plaque à 24 puits</td><td>Sarstedt</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>Plaque à 6 puits</td><td>Sarstedt</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>Plaque à 96 puits</td><td>Sarstedt</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-GAPDH souris (6C5)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Réf. CB1001</td><td>Source : Souris ; Dilution pour WB : 1:1000</td></tr><tr><td>aSMA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5228&nbsp ;</td><td>Source : Souris ; Dilution pour WB : 1:3000</td></tr><tr><td>Cavéoline</td><td>Technologie de signalisation cellulaire</td><td>CST3267</td><td>Source : Lapin ; Dilution pour WB : 1:1000</td></tr><tr><td>CD31-VioBlue</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-119-980</td><td>Cytométrie en flux Ab, Marqueur de cellules endothéliales</td></tr><tr><td>CD326-PE (EpCAM)</td><td>Milteny Biotec</td><td>130113-826</td><td>Cytométrie en flux Ab, Marqueur de cellules épithéliales</td></tr><tr><td>CD45-FITC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-110769</td><td>Cytométrie en flux Ab, marqueur panleucocytaire</td></tr><tr><td>CD90-APC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-114-903</td><td>Cytométrie en flux Ab, marqueur de fibroblaste</td></tr><tr><td>Collagène VI (COL6A1)</td><td>Abcam</td><td>AB182744</td><td>Source : Lapin ; Dilution pour WB : 1:1000</td></tr><tr><td>Tube conique 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>Tube conique 50 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Microtubes Cryopure 2 mL</td><td>Sarstedt</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de culture 100 mm de diamètre&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de culture 100 mm de diamètre&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>353025</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de culture 60 mm de diamètre&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Diméthylsulfoxyde (DMSO)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>D8418</td><td>Utilisation dans une hotte biologique</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Aigle modifié' s Moyen (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Conserver à 4 &deg ; C, utilisation dans une hotte biologique</td></tr><tr><td>FAP</td><td>Abcam</td><td>AB53066</td><td>Source : Lapin ; Dilution pour la balance bal : 1:500</td></tr><tr><td>Réactif de blocage FcR, humain</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-059-901</td><td>Bloqueur Fc</td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Conserver à 4 &deg ; C, utilisation dans une hotte biologique</td></tr><tr><td>Pointes filtrées 10 & micro ; L</td><td>Sarstedt</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>Pointes filtrées 100 & micro ; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>Pointes filtrées 1000 & micro ; L</td><td>Sarstedt</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>Pointes filtrées 20 & micro ; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>Embouts filtrés 200 & micro ; L</td><td>Sarstedt</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,20 & micro ; m&nbsp ;</td><td>Sarstedt</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>Pince</td><td>2Biol</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>FSP1/S100A4</td><td>Technologie de signalisation cellulaire</td><td>D9F9D (13018)</td><td>Source : Lapin ; Dilution pour WB : 1:2000</td></tr><tr><td>IL6</td><td>Technologie abclonale</td><td>A0286</td><td>Source : Lapin ; Dilution pour WB : 1:1000</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Institut national de la santé</td><td>Version 1.53c</td><td>Logiciel d’analyse d’images</td></tr><tr><td>Plaque Incucyte ImageLock 96 puits</td><td>Sartorique</td><td>BA-04857</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte&reg ; SX5</td><td>Sartorique</td><td>SX5</td><td>Instrument d’analyse de cellules vivantes&nbsp ;</td></tr><tr><td>Réactif de transfection Lipofectamine 2000</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11668019</td><td>réactif de transfection cationique à médiation lipidique</td></tr><tr><td>MACS&reg ; Solution de stockage de tissus</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>Lecteur de microplaques (absorbance de 600 nm)</td><td>Promega</td><td>Réf. GM3500</td><td></td></tr><tr><td>Microtubes 1,5 mL&nbsp ;</td><td>Sarstedt</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>Ncad</td><td>Abcam</td><td>AB18203</td><td>Source : Lapin ; Dilution pour WB : 1:1000</td></tr><tr><td>Bleu nitro tétrazolium&nbsp ;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>N5514</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm&nbsp ;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>HS234526B</td><td></td></tr><tr><td>pBABE-puro-hTERT</td><td>Addgene</td><td>1771</td><td>Conserver à -20 &deg ; C, utilisation dans une hotte biologique</td></tr><tr><td>pCL-Ampho</td><td>Novus Biological&nbsp ;</td><td>NBP2-29541</td><td>Conserver à -20 &deg ; C, utilisation dans une hotte biologique</td></tr><tr><td>Le PDGFRB</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-432</td><td>Source : Lapin ; Dilution pour WB : 1:1000</td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine (PS, 10 000 &mu ; g/mL)&nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Conserver à 4 &deg ; C, utilisation dans une hotte biologique</td></tr><tr><td>Microscope à contraste de phase&nbsp ;</td><td>Olympe&nbsp ;</td><td>BX42</td><td></td></tr><tr><td>Saline tamponnée au phosphate&nbsp ; (Crédit : PBS)</td><td>Fait maison</td><td></td><td>NaCl, 137 mM ; KCl, 2,7 mM ; Na2HPO4, 10 mM ;KH2PO4, 1,8 mM. Autoclave et Magasin chez RT</td></tr><tr><td>Solution de poly-L-lysine</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Réf. P8920</td><td>Conserver à 4 &deg ; C, utilisation dans une hotte biologique</td></tr><tr><td>Chlorhydrate de puromycine</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Réf. P8833</td><td></td></tr><tr><td>Secura Semi Micro Balance</td><td>Sartorius</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>Pipette sérologique 10 mL&nbsp ;</td><td>Sarstedt</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>Pipette sérologique 2 mL&nbsp ;</td><td>Sarstedt</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>Pipette sérologique 25 mL&nbsp ;</td><td>Sarstedt</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>Pipette sérologique 5 mL&nbsp ;</td><td>Sarstedt</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>STAT3</td><td>CST</td><td>9139</td><td>Source : Souris ; Dilution pour WB : 1:1000</td></tr><tr><td>STAT3 Y705</td><td>CST</td><td>9131</td><td>Source : Lapin ; Dilution pour WB : 1:1000</td></tr><tr><td>Stéréomicroscope</td><td>Leica</td><td>MZ125</td><td></td></tr><tr><td>Seringue 10 mL</td><td>Pentaferte</td><td>Référence 00202260D12</td><td></td></tr><tr><td>TermoMixer</td><td>Eppendorph</td><td>22331</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA (0,5 %), sans rouge de phénol</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Entrain</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-6260</td><td>Source : Souris ; Dilution pour WB : 1:2000</td></tr><tr><td>Concentrateur centrifuge Vivaspin 20</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z614602</td><td>MWCO 10 000 Da&nbsp ;</td></tr><tr><td>Ciseaux Wagner</td><td>2Biol</td><td>14070-12</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement, culture et caractérisation des fibroblastes associés au cancer de la prostate

Isolation, Culture, and Characterization of Prostate Cancer-Associated Fibroblasts

Des paires CAF et NF de 7 patients atteints de PCa de haut grade ont été isolées avec succès avec ce protocole. L’âge des patients au moment de la chirurgie et les scores de Gleason sont résumés dans le tableau 3. Pour évaluer la pureté des populations de fibroblastes dérivées, deux CAF et NF primaires ont été détachés et colorés avec les anticorps fluorescents indiqués ou avec de l’iodure de propidium pour évaluer l’apoptose. Les résultats représentatifs de l’analyse FA...

Isolement, culture et caractérisation des fibroblastes associés au cancer de la prostate

Tumor stroma can be actively shaped by tumor cells to adopt pro-tumorigenic properties, making it a focal point of cancer research. Among the stromal ...

isolation-culture-characterization-prostate-cancer-associated

Research

Recherche

JoVE Journal

Cancer Research

Recherche sur le cancer

Cancer fibroblastes associés (CAF) de faciliter l'initiation des tumeurs, la croissance et la progression à travers signalisation qui favorise la prolifération, l'angiogenèse et l'inflammation. Nous décrivons ici une méthode pour isoler des populations pures de fibroblastes normaux et de souris CAF frais et tissus humains par tri cellulaire, en utilisant PDGFRα comme un marqueur de surface.

Isolation des fibroblastes normales et cancéreuses associées à partir de tissus frais par tri cellulaire activé par fluorescence (FACS)

L'isolement des cellules souches cancéreuses (CCM) directement à partir de tissus humains est nécessaire pour leur caractérisation biologique. Ce manuscrit décrit une méthodologie pour l'isolement des CSC de la prostate à partir de tissus humains, tout en offrant des conseils sur le dépannage des mesures difficiles.

Isolement de cellules souches du cancer à partir d&#39;échantillons cancer de la prostate humaine

Ici, nous présentons un protocole de co-culture en trois dimensions, qui est utile pour étudier les interactions multicellulaires et la modulation dépendante de la matrice extracellulaire du comportement des cellules cancéreuses. Dans ce modèle expérimental, les cellules cancéreuses sont cultivées sur des gels de collagène intégrés à des fibroblastes humains associés au cancer.

En trois dimensions modèle de co-culture tumeur stromale-Interaction

Le comportement des fibroblastes sous-tend un spectre d’entités cliniques, mais ils restent mal caractérisés, en grande partie en raison de leur hétérogénéité inhérente. La recherche traditionnelle sur les fibroblastes repose sur la manipulation in vitro, masquant le comportement des fibroblastes in vivo. Nous décrivons un protocole basé sur FACS pour l’isolement des fibroblastes de peau de souris qui ne nécessite pas de culture cellulaire.

Murin fibroblastes dermiques Isolation par FACS

Ici, nous présentons une méthode pour l’établissement d’un système in vitro rapide qui soutient la culture tridimensionnelle et la différenciation luminale ultérieure des cellules épithéliales primaires de la prostate.

Un système de culture 3D basé sur Insérer Filtre rapide pour Prostate primaire Différenciation Cellulaire

Ce manuscrit décrit un protocole basé sur le FACS pour l’isolement des fibroblastes papillaires et réticulaires de la peau humaine. Il contourne la culture in vitro qui était inévitable avec le protocole d’isolement couramment utilisé par les cultures explant. Les sous-ensembles de fibroblastes qui émanent sont fonctionnellement distincts et présentent une expression et une localisation différentielles dans le derme.

Isolement des fibroblastes papillaires et réticulaires de la peau humaine par tri cellulaire activé par fluorescence

Nous présentons un protocole pour isoler les fibroblastes adultes primaires d'une manière facile, rapide et fiable, performable par les débutants (p. ex., les étudiants). La procédure combine la digestion des tissus enzymatiques et l'agitation mécanique avec des ondes ultrasoniques pour obtenir des fibroblastes primaires. Le protocole peut facilement être adapté à des exigences expérimentales spécifiques (p. ex., tissus humains).

Isolement du fibroblaste primaire adulte à ultrasons

Utilisant les cellules épithéliales primaires humaines de prostate, nous rapportons une nouvelle méthode biomarqueur-libre de caractérisation fonctionnelle des cellules de tige-comme par un test sphéroïde-basé d'étiquette-rétention. Un protocole étape par étape est décrit pour l'étiquetage des cellules BrdU, CFSE ou Far Red 2D; formation sphénoïde tridimensionnelle; identification des cellules souches de conservation de l'étiquette par immunocytochimie; et l'isolement par FACS.

Isolement des cellules souches des cultures sphéroïdes tridimensionnelles

L’obtention d’une population pure de fibroblastes est cruciale pour étudier leur rôle dans la réparation des plaies et la fibrose. Décrit ici est une méthode détaillée pour isoler les fibroblastes et les myofibroblastes des cœurs de souris non blessés et blessés suivis par la caractérisation de leur pureté et de leur fonctionnalité par immunofluorescence, RTPCR, tri cellulaire assisté par fluorescence, et contraction du gel de collagène.

Isolement et caractérisation des fibroblastes cardiaques adultes et des myofibroblastes

Cet article vise à fournir un protocole pour l’isolement et la culture de fibroblastes primaires associés au cancer à partir d’un modèle murin syngénique du cancer du sein triple négatif et leur application pour l’étude préclinique de nouvelles nanoparticules conçues pour cibler le microenvironnement tumoral.

Isolement de fibroblastes primaires associés au cancer à partir d’un modèle murin syngénique du cancer du sein pour l’étude de nanoparticules ciblées

Des sphéroïdes tumoraux 3D multicellulaires ont été préparés avec des cellules d’adénocarcinome pulmonaire, des fibroblastes et des monocytes, suivis de l’isolement de fibroblastes associés au cancer (CAF) à partir de ces sphéroïdes. Les CAF isolés ont été comparés aux fibroblastes normaux pour évaluer la santé mitochondriale en étudiant le potentiel transmembranaire mitochondrial, les espèces réactives de l’oxygène et les activités enzymatiques.

Évaluation de la santé mitochondriale dans les fibroblastes associés au cancer isolés à partir de sphéroïdes de tumeurs pulmonaires multicellulaires 3D

Découvrez l'isolation et la culture des fibroblastes associés au cancer de la prostate à partir de spécimens de prostatectomie radicale. Cette méthode permet d'étudier les interactions fibroblastes-tumeur et d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques.

Isolement, culture et caractérisation des fibroblastes associés au cancer de la prostate

Explorer plus de vidéos