Name: Activité convulsive induite par les électrochocs chez les larves de drosophile (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T16:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: Découvrez comment identifier des composés anticonvulsivants novateurs en utilisant des larves de Drosophila. Cette méthode permet d'évaluer l'efficacité thérapeutique et de mieux comprendre les mécanismes neuronaux impliqués dans l'épilepsie.

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<li>Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pentylenetetrazole-induced+changes+in+zebrafish+behavior%2C+neural+activity+and+c-fos+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pentylenetetrazole-induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression.</a> Neuroscience. 131 (3), 759-768 (2005).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Porte-électrode</td><td>World Precision Instruments&nbsp ;</td><td>Référence M3301</td><td></td></tr><tr><td>Capillaires en verre</td><td>Harvard Instruments</td><td>GC100F-10</td><td></td></tr><tr><td>Fil de tungstène (99,95 %)</td><td>Goodfellow Cambridge, Royaume-Uni</td><td></td><td>0,1 mm de diamètre</td></tr><tr><td>Stimulateur de tension</td><td>Digitimer Ltd, Royaume-Uni</td><td>DS2A mkII&nbsp ;</td><td>Stimulateur isolé à tension constante&nbsp ;</td></tr></tbody></table>

activité convulsive induite par les électrochocs chez les larves de drosophile

Seizure Activity Induced by Electroshock in Drosophila Larvae

De nombreuses mutations de la drosophile présentent un comportement accru semblable à celui d’une crise 7,20. La base génétique de ces mutations est variée, ce qui imite favorablement les causes génétiques tout aussi variées de l’épilepsie humaine. Trois des mutations de la drosophile les plus étudiées sont parabangsenseless (parabss), julius seizure (jus) et facilement choqué (<...

Activité convulsive induite par les électrochocs chez les larves de drosophile

Epilepsy presents a significant health burden that is exacerbated by high numbers of individuals who are drug-refractory. Whilst some drug-refractory ...

Nous utilisons les larves de la drosophile pour identifier de nouveaux traitements contre l’épilepsie. Tout comme les humains, les mouches peuvent être porteuses de mutations génétiques qui les rendent sujettes aux convulsions, et nous pouvons réduire la gravité des crises chez les mouches avec des médicaments anti-épileptiques utilisés cliniquement. Les principaux défis sont de comprendre pleinement le fonctionnement du système nerveux de la mouche, de sorte que nous puissions cartographier les zones à leurs zones équivalentes dans le cerveau humain.Environ 1 % de la population souffre d’épilepsie, et de ce nombre, environ 1/3 ne répond pas bien aux médicaments anticonvulsivants actuellement utilisés. Nous explorons de nouvelles façons de traiter l’épilepsie. L’utilisation de larves de mouches plutôt que de mouches adultes est avantageuse car les larves vivent dans la nourriture qu’elles mangent. Cela rend l’ajout de médicaments expérimentaux très simple. La technique que nous utilisons pour induire des crises est également simple mais efficace.Nous avons identifié certains médicaments candidats qui ont une puissante activité anti-épileptique. Nous allons maintenant nous concentrer sur la compréhension de l’efficacité de ces médicaments et sur les tests pour s’assurer qu’ils peuvent être utilisés en toute sécurité chez les mammifères.[Instructeur] Pour commencer, construisez la sonde d’électrochocs pour la procédure. S’assurer que des tiges d’environ 100 larves errantes du troisième stade provenant d’une souche témoin de type sauvage et d’une souche mutante convulsive sont disponibles. Retirez une seule larve errante du troisième stade de la paroi de la fiole et placez-la dans une petite boîte de Pétri en plastique. À l’aide d’un petit pinceau, lavez délicatement les larves avec de l’eau doublement distillée pour éliminer tout résidu de nourriture. Maintenant, transférez les larves lavées dans un plat en plastique vide. À l’aide d’une pince, tenez un petit fragment d’essuie-tout et séchez doucement les larves. Retirez l’excès d’eau sans sécher complètement les larves pour éviter qu’elles ne collent au plat. Laissez la larve récupérer pendant 30 secondes pour assurer une manipulation facile lors de la mise en place de la sonde. Ensuite, observez la larve sous un microscope de dissection à un grossissement de 15 à 20 fois. Une fois que la larve a repris sa capacité normale à ramper, placez doucement la sonde à électrochocs sur la surface dorsale antérieure au-dessus du système nerveux central. Appliquez une pression suffisante pour comprimer la larve à environ un tiers à la moitié de sa profondeur afin d’assurer une bonne conductivité sans causer de dommages. Appliquez une impulsion de deux secondes de tension constante à l’aide d’un stimulateur de tension isolé, dont l’intensité a été préalablement calibrée à l’aide d’une courbe de titrage. Immédiatement, démarrez une minuterie dès que le choc est délivré. Observez la larve pour détecter des signes de paralysie transitoire, de spasmes ou de comportement roulant. Arrêtez la minuterie une fois que la larve s’éloigne clairement de sa position d’origine, indiquant la récupération par un mouvement péristaltique vers l’avant. Ensuite, rincez d’abord les fils de la sonde avec de l’éthanol à 100 %, puis de l’eau distillée deux fois. Après avoir inspecté les fils sous grossissement, grattez doucement tout résidu à l’aide d’une pince sans modifier l’espacement des fils. Utilisez la sonde pour délivrer une impulsion de deux secondes de tensions variables à environ 15 larves par tension pour chaque génotype. Ne choquez chaque larve qu’une seule fois. Mesurez le temps de récupération de chaque larve et calculez le temps de récupération moyen pour chaque tension aux génotypes. Tracez les temps de récupération moyens sur un graphique et ajustez une ligne droite aux données. Choisissez une tension qui montre une différence distincte et significative dans le temps de récupération entre les larves mutantes de type sauvage et les larves mutantes convulsives. Assurez-vous que la tension sélectionnée n’entraîne pas de récupération prolongée qui entraverait le débit. Pour la préparation du médicament, ajoutez les médicaments dissous dans un solvant approprié directement sur la surface de la nourriture solide pour mouches et laissez-lui le temps de s’imprégner et de s’évaporer. Vous pouvez également prélever la nourriture dans les flacons et la faire fondre à nouveau. Lorsque la température descend à 40 degrés Celsius, ajoutez la solution médicamenteuse et mélangez soigneusement à l’aide d’un mélangeur vortex. Versez environ cinq millilitres d’aliments traités dans des flacons et laissez-le se solidifier avant utilisation. Exécutez un gradient de concentration en testant une gamme de concentrations de médicament pour déterminer la dose optimale. Appliquez des électrochocs sur des larves du génotype d’essai ou sur celles exposées à un médicament et mesurez le temps de récupération des crises. Appliquez un temps limite de 300 secondes pour éliminer les durées de récupération trop longues. N’enregistrez que les crises dont le temps de récupération est supérieur à 30 secondes comme quantifiables. La sonde a été calibrée, et il était évident, d’après les ajustements de la ligne, que le mutant présentait un temps de récupération de crise accru à toutes les tensions par rapport au type sauvage. Les temps de récupération des crises variaient considérablement selon les génotypes de l’œsophage, le parabang inconscient présentant le temps de récupération le plus long et la crise de Julius le plus court parmi les mutants. Le traitement au valproate de sodium et à la phénytoïne a considérablement réduit le temps de récupération des crises chez le mutant insensé parabang par rapport aux témoins du véhicule.

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Méthodes électrophysiologiques pour l&#39;enregistrement du potentiel synaptique de la JNM des larves de drosophile

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Cette procédure utilise une lumière bleue-activé le canal d'algues et de cellules d'outils spécifiques d'expression génétique pour évoquer les potentiels synaptiques avec des impulsions de lumière à la jonction neuromusculaire (JNM)...

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Enregistrement électrophysiologique dans le Drosophile Embryon

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Enregistrement extracellulaire de l’activité électrique dans le système nerveux central de la drosophile

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Prosencéphale enregistrement électrophysiologique des larves dans le poisson-zèbre

La méthode de mesure de la drosophile adulte mémoire associative est décrite. L'essai est basé sur la capacité de la mouche à associer une odeur présenté avec un renforcement négatif (choc électrique) et ensuite rappeler cette information à un moment ultérieur, ce qui permet à la mémoire mesurée.

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En utilisant une webcam et une combinaison de logiciels libres et peu coûteux, les modèles de locomotives de Drosophila melanogaster peuvent être analysés pour détecter des différences dans la vitesse, la distance et le temps de diverses activités motrices.

Une méthode peu coûteuse pour l&#39;analyse de la saisie-comme activité et de mouvement dans<em&gt; Drosophila</em

Ce protocole décrit une méthode pour enregistrer l’activité électrique descendante du système nerveux central Drosophila melanogaster pour permettre le rapport coût-efficacité et pratique essais d’agents pharmacologiques, les mutations génétiques des protéines neuronales, et/ou le rôle des voies physiologiques inexplorées.

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