Lymphadénectomie mésentérique murine pour la perturbation sélective de la communication lymphatique avec l’intestin régional

Nos recherches portent sur les réponses des lymphocytes T aux néoantigènes et aux tissus périphériques, et ces réponses sont fortement influencées par le pré-amorçament, et nous nous concentrons donc principalement sur l’endroit où ces événements d’amorçage se produisent. Actuellement, les seules options largement utilisées pour bloquer le trafic entre ganglions lymphatiques et tissus sont des modalités systémiques comme les agonistes des récepteurs S1P et le blocage de l’intégrine. Mais cette large inhibition nous empêche d’étudier la contribution de ganglions lymphatiques locaux spécifiques.

Notre protocole fournit une description approfondie des lymphadénectomies hautement sélectives à chacune des quatre principales stations ganglionnaires mésentériques, et comme ces ganglions sont très spécialisés dans le segment intestinal qu’ils drainent, cette procédure de survie bien tolérée nous permet de perturber certains segments de l’axe lymphatique de l’intestin tout en laissant le reste intact. Après avoir confirmé la profondeur anesthésique appropriée par une pincée du pied postérieur, utilisez des ciseaux chirurgicaux stériles pour réaliser une incision cutanée médiane de 0,5 à 1 centimètre dans la souris anesthésiée. À l’aide de pinces stériles, disséquez la peau de la paroi abdominale et identifiez la ligne blanche.

Puis effectuer une autre incision de 0,5 à 1 centimètre à travers la ligne alba pour accéder à la cavité péritonéale. À l’aide d’une aiguille à pointe émoussée, injectez un millilitre de solution saline stérile à température corporelle dans la cavité péritonéale. Humidifier les rideaux stériles pour préparer la position intestinale.

Pour réséquer la première station ganglionnaire, orientez l’intestin extériorisé sur des rideaux humides, le cécum étant positionné en bas, le côlon proximal en haut, et l’iléon terminal vers le chirurgien. Identifiez la chaîne des ganglions lymphatiques mésentériques qui longe longitudinalement le côlon. À l’aide de pinces à pointe fine inclinée, disséquez brutalement la première station ganglionnaire à l’écart des vaisseaux iléocoliques en plaçant la pince fermée entre ces structures et en les ouvrant doucement.

Pour réduire le risque théorique de flux collatéral vers les ganglions voisins, réalisez une ligature optionnelle avec des sutures simples interrompues le long de la chaîne ganglionnaire, un millimètre distal et un millimètre proximal de la première station ganglionnaire, à l’aide d’une suture monofilament en nylon et d’une pince à pointe fine. Rétractez doucement la station ganglionnaire par caudalité, puis à l’aide de ciseaux à pointe fine, exciser la station cible du néphalade vers la direction caudale. Observez les branches distales des vaisseaux iléocoliques, iléaux et jéjunaux pour confirmer que l’apport sanguin reste intact.

Pour réséquer la deuxième station ganglionnaire, éviscérez doucement l’intestin grêle et orientez l’intestin extériorisé sur des rideaux humides, le cécum étant positionné en bas, le côlon proximal en haut et l’intestin grêle vers la droite du chirurgien. Ensuite, identifiez la deuxième station ganglionnaire qui longe longitudinalement le côlon et commence à la confluence des vaisseaux iléaux et jéjunaux. À l’aide de pinces à pointe fine inclinées, disséquez de manière directe la deuxième station ganglionnaire loin des vaisseaux du côlon.

Pour réduire le risque théorique de flux collatéral vers les ganglions voisins, réalisez une ligature de suture optionnelle avec des sutures simples interrompues le long de la chaîne ganglionnaire, un millimètre distal et un millimètre proximal de la deuxième station ganglionnaire, à l’aide d’une suture monofilament en nylon et d’une pince à pointe fine. Rétractez doucement la station ganglionnaire de façon caudale, puis à l’aide de ciseaux à pointe fine, exciser la deuxième station ganglionnaire de la céphalade à la direction caudale. Inspectez le champ opératoire pour vérifier l’hémostasie.

Pour réséquer la quatrième station ganglionnaire, éviscérez doucement tout l’intestin grêle jusqu’au point de fixation postérieure. Orientez l’intestin sur des rideaux humides avec le cécum en bas, le côlon proximal en haut, et l’intestin grêle vers la droite du chirurgien. Identifiez la quatrième station ganglionnaire qui se trouve juste à la hauteur médiale du côlon distal et latéralement à la troisième station.

À l’aide de pinces à pointe fine inclinées ou de ciseaux à pointe extra-fine, disséquez brusquement la quatrième station ganglionnaire des vaisseaux du côlon et du tissu adipeux environnant. Pour réduire le risque théorique de flux collatéral vers les ganglions voisins, effectuer une ligature optionnelle avec des sutures uniques interrompues à chaque ganglion lymphatique identifiable, généralement à un millimètre du ganglion, à l’aide d’une suture en nylon monofilament et d’une pince à extrémité fine. Puis rétractez doucement la quatrième station ganglionnaire céphalade.

À l’aide de ciseaux à pointe fine ou extra-fine, exciser les stations ganglionnaires de la caudale à la céphale. Répétez la procédure pour le deuxième ganglion à la quatrième station ganglionnaire. Disséquez soigneusement le nœud, effectuez une ligature par suture si nécessaire, puis réséquez-le.

Inspectez le champ opératoire pour confirmer l’hémostasie. Après avoir renvoyé le contenu abdominal dans la cavité péritonéale, injectez un millilitre de solution saline stérile à température corporelle dans la cavité abdominale pour compenser la perte de liquide évaporé. Fermez l’abdomen en deux couches : d’abord la paroi abdominale, puis la peau à l’aide d’une suture en polypropylène monofilament 6-0 suivant un motif de mouvement.

Les tissus extraits par la procédure de lymphadénectomie mésentérique ont systématiquement donné des échantillons à faible teneur en adipeux, comme en témoigne l’enfoncement immédiat du PBS. L’analyse par cytométrie en flux a confirmé l’extraction réussie des ganglions lymphatiques, plus de 95 % des cellules dans les échantillons dérivés de la lymphadenectomie mésentérique ayant été identifiées comme CD45 positifs, contre seulement 7 % dans les témoins viscéraux du tissu adipeux.