Name: Préparation de la propagation des chromosomes méiotiques à partir d’ovocytes de souris pour l’évaluation de la synapse et de la recombinaison (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-18T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Découvrez la préparation de chromosomes méiotiques à partir d'ovocytes de souris pour évaluer la synapse et la recombinaison. Cette méthode permet aux chercheurs d'étudier les mécanismes de la méiose in vivo.

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<table><tbody><tr><td>0,45 & mu ; Filtre à seringue m</td><td>Millipore Sigma</td><td>SLHAR33SB</td><td>pour fabriquer une pipette à commande buccale</td></tr><tr><td>0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Corning</td><td>46-034-CI&nbsp ;</td><td>pour HEB</td></tr><tr><td>1 mL de seringue stérile avec aiguille de calibre 25, aiguille de 16 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-125&nbsp ;</td><td>pour la rupture des ovaires</td></tr><tr><td>Boîte de Petri de 100 x 15 mm</td><td>VWR</td><td>25384-302&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Pipets jetables en verre Pasteur en borosilicate de 14,6 cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20B&nbsp ;</td><td>pour fabriquer une pipette à commande buccale</td></tr><tr><td>Boîte de Petri de 35 x 10 mm</td><td>Corning</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>Broches en acier inoxydable #3 de 40 mm x 0,45 mm pour l’entomologie</td><td>Amazon</td><td>B0CSSPW5S7</td><td>pour immobiliser les souris fœtales pour la dissection</td></tr><tr><td>Acide acétique, glaciaire</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td>pour le fixateur de Carnoy</td></tr><tr><td>Ensembles de tubes aspirateurs pour pipettes microcapillaires calibrées</td><td>Millipore Sigma</td><td>A5177-5EA</td><td>pour fabriquer une pipette à commande buccale</td></tr><tr><td>Verre de montre B.P.I.</td><td>NDS Technologies & nbsp ;</td><td>1580-00</td><td>Sinon, utiliser une boîte embryonnaire de 30 mm de diamètre x 12 mm de profondeur (Electron Microscopy Sciences SKU : 70543-30)</td></tr><tr><td>Acide borique</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP168-1</td><td>pour ajuster le pH du HEB, PFA</td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine</td><td>Millipore Sigma</td><td>A7906-100G</td><td>pour ADB</td></tr><tr><td>Réservoir de CO2</td><td></td><td></td><td>pour incubateur</td></tr><tr><td>Lames de microscope de Corning</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS294875X25</td><td>L x F 75 mm x 25 mm, givré d’un côté</td></tr><tr><td>Lames de microscope Corning, givrées d’un côté, d’une extrémité</td><td>VWR</td><td>294875X25</td><td></td></tr><tr><td>Couvrez le verre, rectangulaire. 60 x 24 mm, #1,5</td><td>VWR</td><td>48393-251</td><td></td></tr><tr><td>Plat de dissection</td><td>Sciences de la microscopie électronique</td><td>70540</td><td></td></tr><tr><td>Dissection Microscope</td><td></td><td></td><td>Tout modèle standard</td></tr><tr><td>Ciseaux de dissection, pointe tranchante, 4,5"</td><td>VWR</td><td>82027-578</td><td></td></tr><tr><td>Pinces à pointe ultra fine et pointues</td><td>VWR</td><td>76548-836</td><td></td></tr><tr><td>Giemsa Stain</td><td>Millipore Sigma</td><td>GS500-500</td><td>Pour colorer les étalements de chiasmates</td></tr><tr><td>Stylo PAP barrière hydrophobe ImmEdge</td><td>Laboratoires Vector</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur</td><td></td><td></td><td>Tout modèle standard avec technologie CO2 et chemise d’eau</td></tr><tr><td>Station de travail FIV</td><td>K-Systems</td><td></td><td>N’importe quel modèle avec un plan de travail chauffant</td></tr><tr><td>Kodak Photo-Flo 200 Solution</td><td>Photo & BH Vidéo</td><td>1464510</td><td>pour les lavages à coulisse</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td>pour le fixateur de Carnoy</td></tr><tr><td>Pot de coloration Coplin de MP Biomédicals</td><td>Fisher Scientific</td><td>ICN17006201</td><td></td></tr><tr><td>Sérum de chèvre normal</td><td>Gibco</td><td>16210-072</td><td>pour ADB</td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde, grade EM, prill purifié</td><td>Sciences de la microscopie électronique</td><td>19200</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td>for&nbsp ; Lames de montage pour les écartements de chiasmates</td></tr><tr><td>Fixation antidécoloration en verre ProLong avec teinture NucBlue</td><td>Thermo Scientific</td><td>P36985</td><td>pour monter des lames immunocolorées</td></tr><tr><td>Tube en silicone, diamètre intérieur : 0,125 », diamètre extérieur : 0,25 »</td><td>VWR</td><td>89068-474</td><td>pour fabriquer une pipette à commande buccale</td></tr><tr><td>Sodium Citrate Dihydrate</td><td>Fisher Scientific</td><td>S279-500</td><td>pour HEB, solution hypotonique</td></tr><tr><td>Système de coloration par lame Staintray</td><td>Sciences de la microscopie électronique</td><td>71396-B</td><td>Pour une utilisation comme chambre humidifiée. Il faut utiliser le couvercle noir pour la coloration par immunofluorescence. On peut aussi tapisser le fond d’une boîte à glissière opaque ou de la vaisselle de papier absorbant humide pour les utiliser comme chambre humidifiée et ;</td></tr><tr><td>Conseils pour strip-teaseuses - 100</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-100</td><td>pour pipette à commande buccale</td></tr><tr><td>Conseils pour strip-teaseuses - 150</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-150</td><td>pour pipette à commande buccale</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Millipore Sigma</td><td>S-8501</td><td>pour HEB, solution hypotonique au saccharose</td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-5</td><td>pour HEB</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-100&nbsp ;</td><td>pour PFA, ADB et Triton-PBS</td></tr><tr><td>Pot de coloration Coplin de United Scientific</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17495A</td><td>Plastique blanc opaque pour les lavis et les lames de blocage après ajout d’anticorps secondaires photosensibles</td></tr><tr><td>Lames de concavité en verre de United Scientific</td><td>Fisher Scientific</td><td>S139533</td><td>1,3 mm d’épaisseur, comptage à 2 puits</td></tr><tr><td>Ciseaux de microdissection Vannas 5mm droits</td><td>VWR</td><td>76457-358</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Axio Imager.Z2, Colibri 7</td><td>Carl Zeiss</td><td>000000-2624-307</td><td></td></tr><tr><td>Zen Blue 3.11 Logiciel</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>Logiciels d’acquisition et d’analyse d’images</td></tr><tr><td>Anticorps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 AffiniPure F(ab') ? Fragment Goat Anti-Mouse IgG, spécifique au fragment Fc</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>115-546-071</td><td>dilution utilisée 1:1 000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 AffiniPure F(ab') ? Fragment Goat Anti-Rabbit IgG, Fc spécifique au fragment</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>111-546-046</td><td>dilution utilisée 1:1 000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 AffiniPure F(ab') ? Fragment de IgG, Fc&gamma Anti-Humains de Chèvre ; Spécifique au fragment</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>109-606-170</td><td>dilution utilisée 1:1 000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 AffiniPure Anti-Cobaye de chèvre IgG, Fc fragment specifi</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>106-605-008</td><td>dilution utilisée 1:1 000</td></tr><tr><td>Bandea Pig anti-MLH3 pAb</td><td></td><td></td><td>Fabriqué sur mesure avec Thermo-Fisher, avec dilution 1:500</td></tr><tr><td>Cobaye anti-SYCP1 pAb</td><td></td><td></td><td>de Christer H&ouml ; &ouml ; g (Kouznetsova et al. 2005), utilisé en dilution 1:200</td></tr><tr><td>Protéine anti-centromère humaine pAb</td><td>Antibodies Inc.</td><td>15-234</td><td>dilution utilisée 1:1 000</td></tr><tr><td>Souris anti-MLH1 mAb</td><td>BD Biosciences</td><td>550838</td><td>dilution 1:100 utilisée</td></tr><tr><td>Anti-SYCP3 mAb de souris</td><td>Abcam</td><td>ab97672</td><td>dilution utilisée 1:1 000</td></tr><tr><td>Rabbit anti-HORMAD1 pAb</td><td>Proteintech</td><td>13917-1-AP</td><td>Dilution 1:500 utilisée</td></tr><tr><td>Rabbit anti-MSH4 pAb</td><td>Abclonal</td><td>A8556</td><td>dilution 1:100 utilisée</td></tr><tr><td>Rabbit anti-RAD51 pAb</td><td>Millipore</td><td>PC130</td><td>Dilution 1:500 utilisée</td></tr><tr><td>Rabbit anti-SYCP3 pAb</td><td>Abcam</td><td>ab15093</td><td>dilution utilisée 1:1 000</td></tr><tr><td>Rhodamine Red-X (RRX) AffiniPure F(ab') ? Fragment Goat Anti-Mouse IgG, spécifique au fragment Fc</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>115-296-071</td><td>dilution utilisée 1:1 000</td></tr><tr><td>Rhodamine Red-X (RRX) AffiniPure F(ab') ? Fragment Goat Anti-Rabbit IgG, Fc spécifique au fragment</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>111-296-046</td><td>dilution utilisée 1:1 000</td></tr></tbody></table>

préparation de la propagation des chromosomes méiotiques à partir d’ovocytes de souris pour l’évaluation de la synapse et de la recombinaison

Preparation of Meiotic Chromosome Spreads from Mouse Oocytes for Assessment of Synapsis and Recombination

Préparation de la propagation des chromosomes méiotiques à partir d’ovocytes de souris pour l’évaluation de la synapse et de la recombinaison

Three critical and interdependent processes define meiotic prophase I: homologous chromosomes must pair together, a proteinaceous structure called the ...

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JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

Les ovocytes sont sujettes à une aneuploïdie raison d'erreurs dans la ségrégation des chromosomes lors de la maturation méiotique. Oeufs aneuploïdes peut causer l'infertilité, fausses couches ou des troubles du développement tels que le syndrome de Down. Ici, nous décrivons les méthodes pour introduire des matériaux de choix dans des ovocytes et des méthodes pour étudier la maturation méiotique et évaluer ploïdie.

Évaluation microinjection des ovocytes de souris, la maturation et de ploïdie

Ici, nous présentons un protocole de l'épuisement de l'ARNm de siRNA médiation spécifique suivie d'une analyse d'immunofluorescence pour évaluer l'assemblage du fuseau méiotique et de l'organisation dans des ovocytes de souris. Ce protocole est approprié pour l'appauvrissement de produits de transcription in vitro et l'évaluation fonctionnelle de broche différents et / ou des facteurs de MTOC associée dans les ovocytes.

Meiotic évaluation de la broche dans la souris ovocytes par silençage siRNA médiation

La méiose est le processus de développement par lequel les gamètes sont constituées par une seule tournée de réplication de l’ADN et de deux cycles successifs de la ségrégation des chromosomes. La méiose chez les mammifères peut être examinée en utilisant une technique pour préparer les tartinades méiotique. Ici, nous démontrons une méthode de préparation des étalements de noyaux de spermatocytes de souris.

Préparation des chromosomes à la méiose se propage de Spermatocytes de souris

L’ovogenèse chez les mammifères est connu pour être source d’erreurs, notamment en raison de missegregation de chromosome. Ce manuscrit décrit des méthodes de préparation de la chromatine se propager de la prophase de la souris, métaphase I et II-mise en scène des ovocytes. Ces techniques fondamentales permettent l’étude des protéines liées à la chromatine et la morphologie des chromosomes tout au long de l’ovogenèse chez les mammifères.

La chromatine propager des préparations pour l’analyse de Progression d’ovocyte de souris de la Prophase à la métaphase II

Comme les variantes génétiques associées à des maladies humaines commencent à devenir non couvert, il devient de plus en plus important de développer des systèmes permettant d’évaluer rapidement l’importance biologique de ces variants identifiés. Ce protocole décrit les méthodes d’évaluation de la fonction du gène humain au cours de la méiose femelle j’ai utiliser les ovocytes de souris.

À l’aide des ovocytes de souris pour évaluer la fonction du gène humain au cours de la méiose I

Les écarts de surface nucléaires sont un outil indispensable pour étudier les événements chromosomiques pendant la méiose. Ici nous démontrons une méthode pour préparer et visualiser des chromosomes méiotiques pendant la prophase I des spermatocytes de poisson zèbre.

Préparation des propagations méiotiques de chromosome des spermatocytes de poisson-zèbre

L’erreur dans la ségrégation chromosomique est une caractéristique commune dans les ovocytes. Par conséquent, l’étude du point de contrôle de l’assemblage de la broche donne des indices importants sur les mécanismes nécessaires pour produire des œufs sains. Le présent protocole décrit trois essais complémentaires pour évaluer l’intégrité du point de contrôle de l’assemblage de la broche dans les ovocytes de souris.

Évaluation de l’intégrité du point de contrôle de l’assemblage de la broche dans les ovocytes de souris

Ce protocole décrit une technique permettant d’évaluer les modifications du système vasculaire maternel pendant la grossesse chez la souris. À l’aide de méthodes stéréologiques, le remodelage des artères spirales déciduales est évalué quantitativement et les résultats confirmés qualitativement à l’aide de l’immunohistochimie.

Évaluation de la maternelle remodelage vasculaire pendant la grossesse dans l&#39;utérus de la souris

Nous présentons ici un protocole pour la caractérisation des ovocytes de souris antraux basés sur une organisation nucléolaire.

Isolement et caractérisation de souris Antral ovocytes Basé sur Nucleolar Organisation chromatine

Ce manuscrit décrit une approche expérimentale pour caractériser morphologiquement et biochimiquement les ovocytes à cheval. Plus précisément, le présent travail illustre comment recueillir des ovocytes à cheval immatures et matures par captage d'ovules guidé par ultrasons (OPU) et comment étudier la ségrégation des chromosomes, la morphologie de la broche, l'acétylation des histones mondiales et l'expression de l'ARNm.

Analyse de la ségrégation chromosomique, de l&#39;acétone d&#39;histone et de la morphologie de la broche dans les ovocytes

Découvrez la préparation de chromosomes méiotiques à partir d'ovocytes de souris pour évaluer la synapse et la recombinaison. Cette méthode permet aux chercheurs d'étudier les mécanismes de la méiose in vivo.

Préparation de la propagation des chromosomes méiotiques à partir d’ovocytes de souris pour l’évaluation de la synapse et de la recombinaison (Vidéo) | JoVE Journal

Préparation de la propagation des chromosomes méiotiques à partir d’ovocytes de souris pour l’évaluation de la synapse et de la recombinaison

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