Name: Stimulation de cellules endothéliales vasculaires à l’aide de pièges extracellulaires de neutrophiles en présence de lipoprotéines de basse densité (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Découvrez comment stimuler des cellules endothéliales aortiques humaines avec des pièges extracellulaires de neutrophiles et des lipoprotéines de basse densité. Cette méthode permet d'analyser les réponses inflammatoires dans les maladies cardiovasculaires.

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<ol><li>Papayannopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+immunity+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in immunity and disease.</a> Nat Rev Immunol. 18 (2), 134-147 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in homeostasis and disease.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 235(2024).</li>
<li>Megens, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+luminal+neutrophil+extracellular+traps+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Presence of luminal neutrophil extracellular traps in atherosclerosis.</a> Thromb Haemost. 107 (3), 597-598 (2012).</li>
<li>Meher, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+role+of+IL+%28Interleukin%29-1%CE%B2+in+neutrophil+extracellular+trap+formation+and+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Novel role of IL (Interleukin)-1β in neutrophil extracellular trap formation and abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 38 (4), 843-853 (2018).</li>
<li>Borissoff, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+levels+of+circulating+DNA+and+chromatin+are+independently+associated+with+severe+coronary+atherosclerosis+and+a+prothrombotic+state%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Elevated levels of circulating DNA and chromatin are independently associated with severe coronary atherosclerosis and a prothrombotic state.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (8), 2032-2040 (2013).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid-specific+deletion+of+Peptidylarginine+Deiminase+4+mitigates+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Myeloid-specific deletion of Peptidylarginine Deiminase 4 mitigates atherosclerosis.</a> Front Immunol. 9, 1680(2018).</li>
<li>Zhai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+from+activated+vascular+smooth+muscle+cells+drive+the+progression+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps from activated vascular smooth muscle cells drive the progression of atherosclerosis.</a> Nat Commun. 13 (1), 7500(2022).</li>
<li>Abdo, A. I., Rayner, B. S., van Reyk, D. M., Hawkins, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+lipoprotein+modified+by+myeloperoxidase+oxidants+induces+endothelial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Low-density lipoprotein modified by myeloperoxidase oxidants induces endothelial dysfunction.</a> Redox Biol. 13, 623-632 (2017).</li>
<li>Mueller, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+lipoprotein+%28a%29+Isolation+from+a+small+volume+of+plasma+with+applications+for+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A method for lipoprotein (a) Isolation from a small volume of plasma with applications for clinical research.</a> Sci Rep. 12 (1), 9138(2022).</li>
<li>Hosseinzadeh, A., Messer, P. K., Urban, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+redox-cycling+nitroxide+tempol+inhibits+NET+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Stable redox-cycling nitroxide tempol inhibits NET formation.</a> Front Immunol. 3, 391(2012).</li>
<li>Gupta, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+endothelial+cells+induce+neutrophil+extracellular+traps+and+are+susceptible+to+NETosis-mediated+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Activated endothelial cells induce neutrophil extracellular traps and are susceptible to NETosis-mediated cell death.</a> FEBS Lett. 584 (14), 3193-3197 (2010).</li>
<li>Obama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+action+of+oxidized+low-density+lipoproteins+and+neutrophils+on+endothelial+inflammatory+responses+through+neutrophil+extracellular+trap+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cooperative action of oxidized low-density lipoproteins and neutrophils on endothelial inflammatory responses through neutrophil extracellular trap formation.</a> Front Immunol. 10, 1899(2019).</li>
<li>Schröter, J., Schiller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorinated+phospholipids+and+fatty+acids%3A+Patho%29physiological+relevance%2C+potential+toxicity%2C+and+analysis+of+lipid+chlorohydrins%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Chlorinated phospholipids and fatty acids: Patho)physiological relevance, potential toxicity, and analysis of lipid chlorohydrins.</a> Oxid Med Cell Longev. 2016, 8386362(2016).</li>
<li>Nose, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+role+of+perilipin-3+%28TIP47%29+in+formation+of+lipid+droplets+and+PGE2+production+in+HL-60-derived+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Crucial role of perilipin-3 (TIP47) in formation of lipid droplets and PGE2 production in HL-60-derived neutrophils.</a> PLoS One. 8 (8), e71542(2013).</li>
<li>Manda-Handzlik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+agents+differentiating+HL-60+cells+toward+granulocyte-like+cells+on+their+ability+to+release+neutrophil+extracellular+traps%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The influence of agents differentiating HL-60 cells toward granulocyte-like cells on their ability to release neutrophil extracellular traps.</a> Immunol Cell Biol. 96 (4), 413-425 (2018).</li>
<li>Ermert, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+neutrophil+extracellular+traps+in+microbial+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Mouse neutrophil extracellular traps in microbial infections.</a> J Innate Immun. 1 (3), 181-193 (2009).</li>
<li>Ohinata, H., Obama, T., Makiyama, T., Watanabe, Y., Itabe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-density+lipoprotein+suppresses+neutrophil+extracellular+traps+enhanced+by+oxidized+low-density+lipoprotein+or+oxidized+phospholipids%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">High-density lipoprotein suppresses neutrophil extracellular traps enhanced by oxidized low-density lipoprotein or oxidized phospholipids.</a> Int J Mol Sci. 23 (22), 13992(2022).</li>
<li>Pertiwi, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+derived+from+macrophages%2C+mast+cells%2C+eosinophils%2C+and+neutrophils+are+generated+in+a+time-dependent+manner+during+atherothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps derived from macrophages, mast cells, eosinophils, and neutrophils are generated in a time-dependent manner during atherothrombosis.</a> J Pathol. 247 (4), 505-512 (2019).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+roles+of+eosinophils+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Differential roles of eosinophils in cardiovascular disease.</a> Nat Rev Cardiol. 22 (3), 165-182 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,1 % de poly-L-lysine</td><td>SigmaAldrich</td><td>P8920-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Plat de 10 cm</td><td>Corning</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de culture tissulaire à 12 puits</td><td>Faucon</td><td>353043</td><td></td></tr><tr><td>2 % Gélatine</td><td>SigmaAldrich</td><td>G1393-20ML</td><td></td></tr><tr><td>Tube 4PC</td><td>L’Himac</td><td>S404332A</td><td></td></tr><tr><td>Acide rétinoïque tout-trans</td><td>Wako</td><td>188-01113</td><td>Peut être remplacé par n’importe quel fournisseur</td></tr><tr><td>Tubulure de dialyse Cellurose</td><td>Groupe MISUMI Inc.</td><td>Référence 0327-23-37-07 (UC18-32-100)</td><td>Peut être remplacé par n’importe quel fournisseur</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Dojindo</td><td>345-01865</td><td>Peut être remplacé par n’importe quel fournisseur</td></tr><tr><td>Milieu de croissance cellulaire endothéliale Kit 2</td><td>PromoCell</td><td>C-22111</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td>Peut être remplacé par n’importe quel fournisseur</td></tr><tr><td>Héparine sodique (5 000 unités/5 ml)</td><td>Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td>Peut être remplacé par n’importe quel fournisseur</td></tr><tr><td>Centrifugeuse réfrigérée à grande vitesse</td><td>TOMY</td><td>SRX-201</td><td>Accélération : 9, Décélération : 7</td></tr><tr><td>Cellules endothéliales de l’aorte humaine</td><td>Lonza</td><td>CC-2535</td><td></td></tr><tr><td>KBr</td><td>Wako</td><td>168-03475</td><td>Peut être remplacé par n’importe quel fournisseur</td></tr><tr><td>Logiciel de microscopie KEYENCE</td><td>CLÉ</td><td>Analyseur BZ-II</td><td></td></tr><tr><td>Micro ultracentrifugeuse</td><td>L’Himac</td><td>CS150GX</td><td></td></tr><tr><td>Microscopie</td><td>OLYMPE</td><td>CK40</td><td></td></tr><tr><td>Microscopie</td><td>CLÉ</td><td>BZ-9000</td><td>Pour l’imagerie en accéléré (option)</td></tr><tr><td>Caméra de microscopie</td><td>Nikon</td><td>DS-Fi3</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel de caméra de microscopie</td><td>Nikon</td><td>DS-L4</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline/streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140-122 100ML</td><td>Peut être remplacé par n’importe quel fournisseur</td></tr><tr><td>tampon phosphate salin (& fois ; 10)</td><td></td><td></td><td>Dissoudre 2,6 g de NaH2PO4&middot ; 2H2O, 29 g de Na2HPO4&middot ; 12H2O, 80 g de NaCl et 2,0 g de KCl dans de l’eau distillée et ajuster au volume de 1 L. (Peut être remplacé par n’importe quel fournisseur)</td></tr><tr><td>PMA (Phorbol 12-Myristate 13-Acétate)</td><td>Wako</td><td>162-23591</td><td>Peut être remplacé par n’importe quel fournisseur</td></tr><tr><td>ReagentPack</td><td>Lonza</td><td>CC-5034</td><td>(CC-5022 : Solution saline tamponnée HEPES, CC-5012 : Trypsine/EDTA, CC-5002 : Solution neutralisante de trypsine)&nbsp ;</td></tr><tr><td>Rotor</td><td>L’Himac</td><td>S100AT6-0242</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 (avec rouge de phénol)</td><td>Wako</td><td>189-02025</td><td>Peut être remplacé par n’importe quel fournisseur</td></tr><tr><td>RPMI-1640 (sans rouge de phénol)</td><td>Wako</td><td>186-02155</td><td>Peut être remplacé par n’importe quel fournisseur</td></tr><tr><td>Fiole T-25</td><td>Corning</td><td>3275</td><td></td></tr></tbody></table>

stimulation de cellules endothéliales vasculaires à l’aide de pièges extracellulaires de neutrophiles en présence de lipoprotéines de basse densité

Stimulation of Vascular Endothelial Cells Using Neutrophil Extracellular Traps in the Presence of Low-Density Lipoprotein

Après l’élimination des chylomicrons, suivie des fractions VLDL du plasma humain par ultracentrifugation séquentielle, le plasma humain a été mélangé à une solution KBr pour ajuster la densité à d = 1,063. Au cours de cette étape, le précipitant restant n’a pas été complètement dissous dans la solution, et un mélange sévère, qui a créé des bulles de gaz, a été évité pour garder le LDL intact. Après l’ultracentrifugation, le LDL a été évalué visuellement sur la couche supérieure par sa couleur jaune-orange<sup cl...

Stimulation de cellules endothéliales vasculaires à l’aide de pièges extracellulaires de neutrophiles en présence de lipoprotéines de basse densité

Neutrophil extracellular traps (NETs) have emerged as causative factors in various non-infectious diseases and have been implicated in cardiovascular ...

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Biochemistry

Biochimie

Cette vidéo présente une technique in vitro pour générer et isoler des pièges extracellulaires neutrophiles (TNE). Les neutrophiles sont isolés du sang périphérique et stimulés avec de l’acétate de myristate de phorbol (PMA) pour produire des TNE. Au cours de l’incubation, les neutrophiles subissent un processus de mort cellulaire (NETosis) pour libérer des TNE composées de chromatine décondensée mélangée à des protéines cytoplasmiques granulaires.

Une technique in vitro pour générer des pièges extracellulaires de neutrophiles humains

Cette vidéo montre l’induction et la visualisation de pièges extracellulaires de neutrophiles ou TNE dans des neutrophiles pré-marqués à l’aide de sérum de patient contenant des anticorps cytoplasmiques anti-neutrophiles. De plus, l’utilisation d’un colorant d’ADN imperméable et la microscopie à fluorescence permettent de visualiser les TNE.

Induction et visualisation de pièges extracellulaires de neutrophiles dans des neutrophiles pré-marqués

Cette vidéo démontre la stimulation in vitro des pièges extracellulaires (MET) de macrophages dans des macrophages humains dérivés de monocytes à l’aide de différents stimuli inflammatoires tels que le TNF-alpha, le PMA et le HOCL. La vidéo montre également la méthode de coloration par colorant SYTOX des MET pour la visualisation.

Stimulation in vitro et visualisation de pièges extracellulaires de macrophages

L'adhésion des neutrophiles à l'endothélium activé sur les sites d'infection est une partie intégrante de la réponse inflammatoire de l'hôte. Décrite dans le présent rapport est une analyse de liaison des neutrophiles qui permet...

Quantitative<em&gt; In vitro</em&gt; Test pour mesurer l&#39;adhésion des neutrophiles à Activé cellules endothéliales microvasculaires humaines primaires dans des conditions statiques

Dans le protocole suivant, nous décrivons une façon très simple d'isoler les pièges neutrophiles extracellulaires (EVF) de sang total humain en utilisant des réactifs facilement disponibles. Nous montrons ensuite comment les EVF isolées peuvent être utilisées dans un essai in vitro de l'adhésion avec les cellules cancéreuses.

Simplifié droits de neutrophiles extracellulaires Piège (NET) Isolement et Manipulation

Lipides sont connus pour jouer un rôle important dans les fonctions cellulaires. Nous décrivons ici une méthode pour déterminer la composition lipidique des neutrophiles, en mettant l'accent sur le taux de cholestérol, en utilisant à la fois HPTLC et HPLC pour obtenir une meilleure compréhension des mécanismes sous-jacents de la formation de piège extracellulaire neutrophile.

Méthodes d&#39;étude Les modifications lipidiques de neutrophiles et de la formation subséquente des neutrophiles pièges extracellulaires

Nous présentons ici une méthode dans laquelle neutrophiles humains de faible densités (LDN), récupérés du liquide de lavage péritonéal postopératoire, produisent massives pièges extracellulaires neutrophiles (filets) et efficacement emprisonnent quelques cellules tumorales gratuit qui poussent par la suite.

Neutrophiles pièges extracellulaires générées par les neutrophiles faible densité obtient du liquide de Lavage péritonéal médiat attachement et la croissance des cellules tumorales

Présenté ici est un protocole pour détecter la production de pièges extracellulaires macrophages (MET) dans la culture cellulaire vivante en utilisant la microscopie et la coloration de fluorescence. Ce protocole peut être étendu pour examiner des marqueurs spécifiques de protéine de MET par coloration d'immunofluorescence.

Stimulation in vitro et visualisation de la libération de piège extracellulaire dans les macrophages humains différenciés dérivés de monocytes

Un protocole pour l’induction et l’analyse de pièges extracellulaires (TNE) in vitro est présenté. La quantification de l’ADN, de la cathélicidine (LL37) et de l’activité enzymatique a fourni des données qui montrent la variabilité de la composition et de la morphologie des TNE induites par des stimuli microbiens et chimiques dans des conditions contrôlées similaires.

Analyse morphologique et compositionnelle des pièges extracellulaires neutrophiles induits par des stimuli microbiens et chimiques

Ce protocole définit une approche de microscopie à haut débit en temps réel pour visualiser et quantifier la libération de pièges extracellulaires (TNE) de neutrophiles humains in vitro. La méthode reproductible permet d’étudier les caractéristiques et la cinétique de la libération de TNE lors de la stimulation avec des inducteurs de NETosis distincts et permet d’évaluer la pharmacologie des antagonistes de NETosis.

Quantification microscopique en temps réel et à haut débit de la libération de pièges extracellulaires de neutrophiles humains et évaluation de la pharmacologie des antagonistes

Les neutrophiles de basse densité (LDN) augmentent considérablement dans plusieurs maladies. Les LDN sont généralement isolés par tri cellulaire. Nous présentons une méthode pratique pour obtenir de la NDT pure et viable. Après la centrifugation du sang périphérique par gradient de densité, les cellules sont incubées avec des microbilles magnétiques, puis la LDN est séparée par des colonnes magnétiques.

Méthode à microbilles magnétiques rapides pour la purification efficace de neutrophiles de faible densité

Découvrez comment stimuler des cellules endothéliales aortiques humaines avec des pièges extracellulaires de neutrophiles et des lipoprotéines de basse densité. Cette méthode permet d'analyser les réponses inflammatoires dans les maladies cardiovasculaires.

Stimulation de cellules endothéliales vasculaires à l’aide de pièges extracellulaires de neutrophiles en présence de lipoprotéines de basse densité (Vidéo) | JoVE Journal

Stimulation de cellules endothéliales vasculaires à l’aide de pièges extracellulaires de neutrophiles en présence de lipoprotéines de basse densité

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