Name: Dosage de l’efflux de phospholipides spécifiques aux lipoprotéines de haute densité (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: Découvrez un dosage rapide de l'efflux de phospholipides spécifiques aux lipoprotéines de haute densité dans le plasma humain. Cette méthode évalue la fonctionnalité HDL pour prédire le risque de maladies cardiovasculaires.

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<li>Horiuchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+and+application+of+a+novel+cholesterol+efflux+assay+using+immobilized+liposomes+as+a+substitute+for+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Rep%22%5BJournal%5D)">Validation and application of a novel cholesterol efflux assay using immobilized liposomes as a substitute for cultured cells.</a> Biosci Rep. 38 (2), BSR20180144(2018).</li>
<li>Lorkowski, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+cell-free+fluorescent+assay+for+HDL+function%3A+Low+apolipoprotein+a1+exchange+rate+associated+with+increased+incident+cardiovascular+events%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">A novel cell-free fluorescent assay for HDL function: Low apolipoprotein a1 exchange rate associated with increased incident cardiovascular events.</a> J Appl Lab Med. 5 (3), 544-557 (2020).</li>
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<li>Borja, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDL-apoa-I+exchange%3A+Rapid+detection+and+association+with+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">HDL-apoa-I exchange: Rapid detection and association with atherosclerosis.</a> PLoS One. 8 (8), e71541(2013).</li>
<li>Remaley, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+specificity+for+lipid+efflux+by+the+human+ABCAI+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein specificity for lipid efflux by the human ABCAI transporter.</a> Biochem Biophys Res Commun. 280 (3), 818-823 (2001).</li>
<li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free%2C+high-density+lipoprotein-specific+phospholipid+efflux+assay+predicts+incident+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Cell-free, high-density lipoprotein-specific phospholipid efflux assay predicts incident cardiovascular disease.</a> J Clin Invest. 133 (18), e165370(2023).</li>
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<li>Ossoli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoprotein+X+causes+renal+disease+in+LCAT+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lipoprotein X causes renal disease in LCAT deficiency.</a> PLoS One. 11 (2), e0150083(2016).</li>
<li>Martínez-Beamonte, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+extra+virgin+olive+oil+high+in+bioactive+compounds+on+atherosclerosis+in+apoe-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Nutr+Food+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of extra virgin olive oil high in bioactive compounds on atherosclerosis in apoe-deficient mice.</a> Mol Nutr Food Res. , (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,2-dimyristoyl-sn-glycéro-3-phosphocholine</td><td>Avanti Research</td><td>850345</td><td>14:0 PC (DMPC) Soluiton au chloroforme</td></tr><tr><td>1,2-dioléoyl-sn-glycéro-3-phosphoéthanolamine-N-(lissamine rhodamine B sulfonyl) (sel d’ammonium)</td><td>Avanti Research</td><td>810150-C</td><td>Solution de chloroforme LRh-PE</td></tr><tr><td>Film adhésif</td><td>Applied Biosystems&nbsp ;</td><td>4306311</td><td>Film adhésif transparent MicroAmp &nbsp ;</td></tr><tr><td>Ruban en téflon haute densité Bay Corporation 1/2 pouce x 520</td><td>Solutions de tests médicaux</td><td>86732</td><td></td></tr><tr><td>Tubes en verre borosilicaté de 20 mm et aigus ; 150 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-961-33</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Thermo Scientific</td><td>Série Sorvall X Pro</td><td></td></tr><tr><td>Chloroforme</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>366927</td><td>adapté aux HPLC, &ge ; 99.8%</td></tr><tr><td>Poudre de cholestérol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8667</td><td>3&bêta ;-hydroxy-5-cholestène, 5-cholestène-3&bêta ;-ol</td></tr><tr><td>Papier de pesée en verre</td><td>Cole-Palmer</td><td>&nbsp ; UX-01338-02</td><td>Pour la gestion du LC-CSH</td></tr><tr><td>Plaque d’incubation</td><td>USA Scientific & nbsp ;</td><td>1402-9700</td><td>Plaque TempDouble jupe semi-jupe à 96 puits 0,2 mL Plaques PCR &nbsp ;</td></tr><tr><td>Agent d’élimination des lipides (LRA)</td><td>Supelco</td><td>13358-U</td><td>LC-CSH</td></tr><tr><td>Plaque de mesure</td><td>Greiner bio-one&nbsp ;</td><td>655076</td><td>Microplaque, PS, 96 puits, F-BOTTOM (PUITS DE CHEMINÉE), NOIR ; FLUOTRAC, LIAISON MÉDICALE</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft 365 MSO&nbsp ;</td><td>Version 2507</td><td></td></tr><tr><td>Embouts de pipet MultiFlex</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-550-206</td><td>Pour aspirer le surnageant lors des lavages LC-CSH</td></tr><tr><td>Lecteur de plaques multi-étiquettes</td><td>Perkin Elmer & nbsp ;</td><td>1420-050</td><td>Compteur multi-étiquettes Victor3 Wallac1420</td></tr><tr><td>Solution saline normale</td><td>Qualité biologique &nbsp ;</td><td>114-055-101</td><td>Pour des usages multiples &nbsp ;</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Cole-Palmer</td><td>HS23452</td><td>Couvrir le dessus du tube de verre lors du vortex</td></tr><tr><td>Fioles Erlenmeyer polycabonées</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-041-8</td><td>Pour une solution Triton-X à 10 %</td></tr><tr><td>Plasma humain regroupé (dérivé du sang) Héparine Li)</td><td>Innovation Research Inc</td><td>IPLAWBLIH</td><td>Plasma de référence, contrôle positif (PC) et nbsp ;</td></tr><tr><td>Surfact-Amps X 100&nbsp ;</td><td>Thermo Scientific</td><td>28314</td><td>10 % Triton X-100, dilué 10 fois avec de l’eau distillée</td></tr><tr><td>Thermomixeur</td><td>Eppendorf</td><td>5382000023</td><td>Thermomixeur C avec bloc thermique à 96 puits</td></tr><tr><td>Bloc intelligent thermomixeur</td><td>Eppendorf</td><td>5306000006</td><td>SmartBlock à 96 puits</td></tr><tr><td>Pipettes de transfert (3 mL, Falcon)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9CM</td><td>Pour retirer les bulles du dessus du puits</td></tr><tr><td>Mélangeur vortex</td><td>Daigger</td><td>3030A</td><td>Porte-affixe pour tube en verre sur le dessus</td></tr></tbody></table>

dosage de l’efflux de phospholipides spécifiques aux lipoprotéines de haute densité

High-Density Lipoprotein-Specific Phospholipid Efflux Assay

Dosage de l’efflux de phospholipides spécifiques aux lipoprotéines de haute densité

Plasma levels of high-density lipoprotein (HDL)-cholesterol (HDL-C) is currently a key metric for the clinical assessment of cardiovascular disease (CVD) ...

high-density-lipoprotein-specific-phospholipid-efflux-assay

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JoVE Journal

Biochemistry

Biochimie

Le dosage du cholestérol est conçu pour quantifier le taux de cholestérol efflux partir de cellules cultivées et la capacité de plasma accepteurs d'accepter le cholestérol libéré par les cellules. Le test se compose de marquage des cellules avec le cholestérol, l'équilibration du cholestérol entre les pools intracellulaires et la libération de cholestérol à un accepteur extracellulaire.

Essai efflux de cholestérol

Les protéoliposomes sont utilisés pour étudier les canaux purifiés et les transporteurs reconstitués dans un environnement biochimique bien défini. Une procédure expérimentale pour mesurer l’efflux médié par ces protéines est illustrée. Les étapes de préparation des protéoliposomes, d’enregistrement et d’analyse des données pour déterminer quantitativement les propriétés fonctionnelles de la protéine reconstituée sont décrites.

Un protéoliposome-Based Assay Efflux pour déterminer les propriétés unique molécule de Cl<sup&gt; -</sup&gt; Chaînes et transporteurs

Ce protocole décrit l’isolement et la quantification des petits ARN des lipoprotéines de haute densité.

Isolement de lipoprotéines de haute densité pour les non-codant petit ARN Quantification

De nombreuses (phospho)lipases prédites sont mal caractérisées en ce qui concerne leurs spécificités de substrat et leurs fonctions physiologiques. Nous fournissons ici un protocole pour optimiser les activités enzymatiques, rechercher des substrats naturels et proposer des fonctions physiologiques pour ces enzymes.

Définition Substrat Spécificités pour lipase et phospholipase candidats

Nous décrivons un test basé sur la fluorescence pour mesurer le brouillage des phospholipides dans de grands liposomes unilamellaires reconstitués avec de l’opsine.

Un test basé sur la fluorescence de phospholipides scramblase Activité

Nous décrivons ici un dosage fluorimétrique acellulaire biochimique pour dosage du HDL-la peroxydation lipidique. Ce test rapid et reproductible peut servir à déterminer la fonction de HDL dans les études à grande échelle et peut contribuer à notre compréhension de la fonction de HDL dans la maladie humaine.

Acellulaire biochimique dosage fluorimétrique pour haut débit mesure de peroxydation des lipides dans les lipoprotéines de haute densité

Ce protocole prévoit une approche efficace pour mesurer l’absorption de cholestérol LDL avec des taux de flux en temps réel à l’aide d’un système dans divers types de cellules d’imagerie de cellules vivantes. Cette technique fournit une plate-forme pour l’activité pharmacologique de composés affectant les afflux de LDL tout en surveillant pour la morphologie cellulaire et cytotoxicité donc potentielle de l’écran.

Test d’absorption LDL cholestérol analyse avec cellule d’imagerie de cellules vivantes surveillance sanitaire

Mesure de la capacité de l’efflux de cholestérol in vitro de sérum ou de plasma dans les modèles de cellules macrophages est un outil prometteur comme biomarqueur d’athérosclérose. Dans la présente étude, nous optimiser et uniformiser une méthode d’efflux de cholestérol NBD fluorescente et développer une analyse de haut-débit à l’aide de plaques de 96 puits.

Haut-débit Nitrobenzoxadiazole marqué cholestérol Efflux Assay

Ici, nous décrivons des protocoles utilisant des capteurs lipidiques fluorescents et des liposomes pour déterminer si une protéine extrait et transporte de la phosphatidylsérine ou du phosphatidylinositol 4-phosphate in vitro.

Mesures basées sur la fluorescence de l’échange phosphatidylsérine/phosphatidylinositol 4-phosphate entre les membranes

Nous présentons une méthode rentable pour évaluer la perméabilité de la membrane liposomale avec une sensibilité et une résolution supérieures aux techniques conventionnelles. À l’aide d’une nouvelle réaction de substitution de ligand encapsulé, cette technique détecte les changements induits par la phospholipase A2 dans les membranes modèles. Facilement intégrée aux analyses standard, cette approche accessible améliore la résolution pour l’étude de la biophysique membranaire et des...

Essai de perméabilité de la membrane des liposomes pour étudier les effets des groupes phosphate de phosphatidylinositol sur l’action membranotrope du venin PLA2

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