Modèle d’amputation du membre postérieur du rat sous le genou et réinnervation musculaire ciblée immédiate

Une étude examine la douleur associée aux lésions nerveuses et à l'amputation, ainsi que la manière dont la réacheminement des nerfs peut influencer cette douleur. L'amputation limite les évaluations classiques de la douleur. Ce protocole utilise des tests modifiés et alternatifs pour mesurer les comportements liés à la douleur post-amputation.

Pour commencer, obtenez un rat Sprague Dawley âgé de huit à 10 semaines et pesant entre 250 et 300 grammes. Allumez le tapis chauffant et préparez un champ chirurgical stérile. Disposez tous les instruments et matériaux stériles nécessaires à l'intervention chirurgicale.

Après avoir anesthésié le rat avec de l'isoflurane à une concentration d'induction de 4 % et une concentration d'entretien de 1 à 2 %, raser la zone en partant du bas du dos et en continuant sur toute la longueur du membre postérieur. Nettoyer le site chirurgical avec une solution antiseptique à la povidone-iodée, puis essuyer avec un tampon désinfectant à l'alcool. Répéter cette procédure deux fois supplémentaires.

Utilisez une seringue tuberculinique pour injecter un milligramme par kilogramme de méloxicam par voie sous-cutanée. Utilisez une règle pour marquer la ligne de l'articulation du genou. Effectuez deux marques supplémentaires, à deux centimètres et à trois centimètres en dessous du genou.

Utilisez un scalpel pour réaliser une incision cutanée circonférentielle à trois centimètres en dessous du genou. Effectuez une dissection mixte, contondante et tranchante, afin de séparer circulairement la peau des muscles sous-jacents jusqu'à ce qu'elle se rétracte librement. Répétez le décollement à travers les couches musculaires profondes pour disséquer jusqu'à l'os tout en préservant les plans tissulaires.

Utilisez un marqueur pour repérer le tibia et la fibula à un centimètre en direction proximale par rapport à l'incision circulaire. Utilisez de petites ciseaux chirurgicaux pour sectionner le tibia et la fibula à l'endroit marqué. Utilisez la cautérisation pour contrôler les saignements et obtenir l'hémostase.

Examinez l'extrémité de l'os et émoussez ou taillez les bords tranchants selon les besoins. Utilisez un fil de suture tressé résorbable 4-O pour rapprocher les bords antérieurs des compartiments musculaires au-dessus du tibia, et fixez-le à l'aide de quatre à six points séparés régulièrement espacés. Alignez et fermez ensemble les compartiments musculaires antérieur et postérieur au-dessus de l'os afin de former un bourrelet musculaire.

Fermer la peau latéralement par des points séparés en fil résorbable tressé 4-O, tout en évitant de les placer sur le moignon porteur. Appliquer un adhésif cutané le long de la ligne d'incision. Réaliser une incision longitudinale par division des muscles fessiers de 1,5 à deux centimètres, située approximativement à cinq millimètres en arrière du fémur.

Utilisez une dissection émoussée pour séparer les muscles glutéaux et ischio-jambiers, et exposez le nerf sciatique en amont de sa trifurcation. Identifiez les branches motrices proximales, notamment la grande branche située sous le muscle fémoral caudal ou CFM et ses divisions. Soulevez le CFM avec une pince et sectionnez-le.

Utilisez des pinces microchirurgicales fines de type Dumont pour libérer les divisions du muscle semi-membraneux et du biceps fémoral par une dissection émoussée. Saisissez l'épinéurium et ouvrez-le longitudinalement à l’aide de ciseaux à ressort courbes fins. Ensuite, séparez les branches nerveuses.

Conserver la branche caudofémorale et diviser les branches restantes près du tronc sciatique. Courber les branches motrices vers le bas pour faciliter la coaptation. Utiliser des ciseaux courbes à ressort pour ouvrir l'épinéurium et le diviser afin de neuralgiser la trifurcation sciatique.

Utilisez une pince fine pour séparer délicatement les branches nerveuses. Saisissez chacune des trois branches — fibulaire commun, tibial et sural — à cinq à dix millimètres en dessous de la trifurcation. En maintenant une tension, sectionnez chaque nerf en direction distale et excisez un segment de cinq à dix millimètres.

Utilisez des sutures en nylon 10-0 pour réaliser les coaptations en reliant d'abord le nerf périnéal commun au muscle semi-membraneux. Effectuez au moins trois nœuds par suture. Assurez un positionnement sans tension, en évitant de trop serrer et de plisser le nerf, et disposez les coaptations sans angulations prononcées.

Ensuite, connecter le nerf tibial à la branche grande du biceps fémoral, et connecter le nerf sural à la branche petite du biceps fémoral. Pour l'amputation sans réinnervation musculaire cible, après exposition des branches sciatiques, utiliser un fil de suture en soie 5/0 et une pince pour ligaturer les nerfs fibulaire commun, tibial et sural, en veillant à ce que le ligature plisse le nerf et soit fixé par quatre nœuds carrés. Tirer doucement sur chaque nerf en direction proximale à l’aide du nœud et sectionner un à deux millimètres en direction distale par rapport à la ligature.

Retirer 10 millimètres du segment nerveux distal, puis procéder à l'amputation comme indiqué précédemment. Après la fermeture de l'incision, appliquer un adhésif cutané le long de la ligne d'incision. Surveiller le rat quotidiennement pendant sept jours afin d'évaluer l'intégrité de la plaie, les signes d'infection, de douleur ou de détresse, et intervenir si nécessaire conformément aux directives du comité d'éthique IACUC.

Les seuils de retrait mécanique mesurés par le test de Von Frey étaient significativement réduits par rapport à la ligne de base et sont restés diminués au cours des différents points temporels post-amputation. Le test au pinçage a montré une tendance à une augmentation des réponses nociceptives au fil du temps par rapport à la ligne de base. L'hypersensibilité au froid du moignon était marquée et est restée durable par rapport à la ligne de base à tous les points temporels.

Ce protocole permet d'évaluer différentes stratégies de gestion des nerfs dans le contexte d'une amputation. Le plus grand défi lors de l'exécution de ce protocole consiste à manipuler les nerfs de manière atraumatique alors qu'ils ont une largeur inférieure à un millimètre. De futures études pourraient approfondir ces travaux afin d'améliorer les modèles et de développer des méthodes plus fiables pour l'étude de la douleur du membre fantôme.