L’échographie Doppler pour l’imagerie en direct et la quantification de la fonction vasculaire ovarienne chez la souris

Cette recherche vise à caractériser le flux sanguin ovaire préovulatoire urinaire à l’aide d’une méthode in vivo non invasive. Le domaine manque de méthodes non invasives pour étudier le remodelage vasculaire ovarien en temps réel sans perturber la physiologie normale chez la souris. Pour commencer, allumez l’alimentation principale située à l’arrière du système d’imagerie.

Après le démarrage du système, basculez l’interrupteur de veille de l’ordinateur sur le côté gauche de la cartouche pour réveiller le moniteur et l’ordinateur. Connectez le transducteur MS700 au port du transducteur actif de l’unité d’imagerie située au port le plus à droite. Alignez la broche de verrouillage du connecteur du transducteur avec l’encoche dans le port.

Poussez le connecteur complètement et tournez le levier de verrouillage en position verticale pour le fixer. Lancez le logiciel d’analyse en cliquant sur l’icône du logiciel. Cliquez sur Nouveau pour créer une nouvelle étude et choisissez le nom approprié dans le menu déroulant.

Dans la fenêtre Informations d’étude, saisissez le nom de l’étude, nom de la série. Le dossier d’application est pour ovaire et le paquet de mesure est vasculaire. Une fois le programme ouvert et le transducteur automatiquement détecté, sélectionnez le package d’application ovaire.

Ensuite, appliquez une petite quantité de crème d’électrode sur chacune des électrodes pour assurer un contact adéquat lors de la surveillance de la fréquence cardiaque. Une fois l’animal complètement sédaté, redirigez l’écoulement du gaz en ouvrant le robinet d’arrêt vers le cône de nez de la plateforme d’imagerie, puis en fermant le robinet vers la chambre d’induction. Transférez doucement la souris sur la plateforme d’imagerie chauffante.

Placez la souris en position couchée avec le côté dorsal vers le haut et fixez le cône du nez sur son nez pour maintenir l’anesthésie. Collez chaque pied de la crème à électrodes sur le coussinet électrode correspondant pour un suivi physiologique. Appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux pour éviter la sécheresse cornéenne pendant l’anesthésie.

Confirmez une profondeur d’anesthésie adéquate en utilisant la méthode du réflexe pincé des orteils. Surveillez les signes vitaux de l’animal, tels que la respiration et le rythme cardiaque, les mouvements indiquant un inconfort, ainsi que la température de la plateforme toutes les cinq minutes. Ensuite, rasez le quadrant inférieur droit du dos à l’aide d’un rasoir électrique du membre postérieur droit jusqu’à la ligne médiane, en restant latéralement par rapport à la colonne vertébrale.

Appliquez une fine couche de crème dépilante corporelle. Après une minute, essuyez bien la crème avec de la gaze humide. Ensuite, appliquez une couche généreuse et uniforme de gel ultrasonore sur la zone rasée.

Positionnez la sonde du transducteur en mode transversal par rapport à la souris sur le support mécanique, avec l’encoche d’orientation orientée vers la gauche de l’opérateur. Fixez la sonde en place avec la pince. Appuyez sur la touche B-Mode du panneau de configuration pour activer la fenêtre d’image standard en niveaux de gris.

Assurez-vous que la souris et la plateforme sont plates et que le transducteur est perpendiculaire à la surface. Ensuite, tirez la peau vers la gauche et positionnez le transducteur près de la partie supérieure rasée, plus près de la ligne médiane du dos. Descendez doucement le transducteur sur la zone rasée recouverte de gel à ultrasons.

Alignez le bord gauche de la sonde avec la colonne vertébrale et le bord droit sur le flanc droit. Pour identifier l’ovaire, il faut d’abord identifier le rein, une grande structure ovale gris clair avec un cortex et une almoelle moelle allongée. Poussez légèrement la plateforme d’imagerie vers la tête de la souris pour révéler l’ovaire et le tissu adipeux périovarien.

Appuyez sur le bouton Cine Store pour capturer la vidéo en mode B. Maintenant, appuyez sur la touche du mode Doppler de puissance sur le panneau de contrôle pour visualiser les vaisseaux sanguins très sensibles à un écoulement à faible vitesse. Ajustez le gain Doppler à 32 à 55 décibels, la sensibilité à 5, la plage dynamique à 15 DR et la vitesse à un kilohertz.

Déplacez doucement la plateforme d’avant en arrière pour obtenir la meilleure vue possible sur le vasculaire ovarien et identifiez l’artère ovarienne entrant dans le hilum ovarien, les vaisseaux médullaires dans la moelle allongée centrale et les vaisseaux corticaux autour des follicules en développement. Appuyez sur Cine Store pour enregistrer la vidéo affichée de l’ovaire et des vasculaires en mode Power Doppler. Pour distinguer le flux artériel du flux veineux, appuyez sur Mode Doppler couleur.

Le rouge montre le flux vers le transducteur et le bleu montre le flux qui s’éloigne de celui-ci. Le vaisseau ayant la vitesse moyenne la plus élevée est l’artère ovarienne. Appuyez sur le bouton Doppler Pulse Wave PW pour afficher les lignes de date de l’échantillon.

Appuyez de nouveau pour activer la forme d’onde spectrale Doppler. Après avoir positionné la grille d’échantillon au centre de la lumière du récipient, ajustez l’angle d’insonation à 60 degrés ou inférieur à 60 degrés et parallèle à l’écoulement à l’aide du bouton d’angle. Pour l’artère ovarienne, placez la porte juste avant qu’elle n’entre dans l’ovaire.

Pour le vaisseau médullaire, placez-le à la bifurcation centrale. Pour les vaisseaux corticaux, placez-le à la base d’un follicule en croissance. Appuyez sur Cine Store pour enregistrer à la fois l’image ultrasonore et la forme d’onde spectrale.

Une fois l’imagerie terminée, essuyez le gel à ultrasons à l’arrière et retirez doucement la souris de la plateforme d’imagerie. Et posez la souris sur une bouillotte jusqu’à ce qu’elle soit complètement réveillée. L’imagerie Doppler puissante a révélé une augmentation visible de la profusion dans les vaisseaux médullaires à une heure après l’injection de gonadotrophine chorionique humaine, suivie d’un retour à la ligne de base à huit heures et d’une diminution supplémentaire de 12 heures après l’injection.

L’imagerie Doppler en couleur a permis une différenciation claire entre l’artère ovarienne et la veine ovarienne et a amélioré la visualisation de la direction du flux au sein des vaisseaux ovariens. Les formes d’onde Doppler PW représentatives ont montré des cycles distincts avec des vitesses systolique et diastolique terminale mesurables dans l’artère ovarienne d’une souris hormonalement réactive, tandis qu’une souris non réactive présentait de faibles traces de signal sans forme d’onde détectable. Une heure après l’injection de gonadotrophine chorionique chez l’humain, la vitesse du flux sanguin a augmenté dans l’artère ovarienne, les vaisseaux médullaires et les vaisseaux corticaux chez les souris répondant à la stimulation, mais aucune augmentation de ce type n’a été observée chez la souris non réactive.

Chez les souris non réactives, la vitesse dans les vaisseaux corticaux est tombée en dessous du seuil de détection à certains moments précisés par des valeurs provisoires assignées. Grâce à l’échographie Doppler, nous avons déterminé que la vitesse du flux sanguin ovarien augmente rapidement après une montée de DLH chez la souris. L’échographie Doppler permet une évaluation répétée et non invasive de l’hémodynamique ovarienne pendant la période préovulatoire, ce que d’autres méthodes ne peuvent pas réaliser.

Après avoir caractérisé l’hémodynamique préovulatoire normale, les études futures pourront désormais utiliser ce protocole pour examiner les perturbations du flux sanguin dans des modèles de troubles ovariens comme le SOPK.