Name: Dissection des muscles de vol indirect de Drosophila melanogaster pour les approches microscopiques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Découvrez la dissection des muscles de vol indirect de Drosophila melanogaster pour l'analyse microscopique. Ce protocole optimise la préservation des sarcomères et permet d'étudier la myogenèse et la régulation de l'ARN.

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<table><tbody><tr><td>Plats de culture tissulaire de 60 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012921</td><td>60 mm, polystyrène</td></tr><tr><td>Acide acétique, glaciaire (certifié ACS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38S-212</td><td></td></tr><tr><td>Triphosphate d’adénosine (ATP)</td><td>Millipore Sigma</td><td>A1852</td><td></td></tr><tr><td>Papier aluminium, robuste</td><td>Amazon</td><td></td><td>12 pouces. x 1000 pieds.</td></tr><tr><td>Plats de dissection en silicium noir : poudre de charbon actif</td><td>Millipore Sigma</td><td>C9157</td><td>Également disponible dans la plupart des pharmacies</td></tr><tr><td>Plats de dissection en silicium noir : Sylgard 184</td><td>Millipore Sigma</td><td>761036</td><td>Pour fabriquer des plats à dissection en silicium, mélangez les composants Sylgard dans un sac ziploc et mélangez bien. Ajoutez de la poudre de charbon actif (~200 mg) à Sylgard (~50 g), mélangez bien, coupez le coin du sac, remplissez des plats de culture de 60 mm, enlevez les bulles avec une pointe de pipette, et séchez toute la nuit.&nbsp ;</td></tr><tr><td>Plateau de diapositives en carton, Research Products International Corp</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-136-7558</td><td></td></tr><tr><td>Microscope confocal, confocal inversée Nikon AXR</td><td>Nikon</td><td></td><td><a href="http://www.microscope.healthcare.nikon.com/">www.microscope.healthcare.nikon.com/</a></td></tr><tr><td>Microscope confocal, Zeiss LSM 780 confocal inversée</td><td>Zeiss</td><td></td><td><a href="http://www.zeiss.com/">www.zeiss.com</a></td></tr><tr><td>Chambre d’élevage d’insectes Darwin (Incubateur)</td><td>Fisher Scientific/Darwin Chambers</td><td>IN034</td><td>Incubateur à contrôle de lumière, de température et d’humidité</td></tr><tr><td>Plat de dissection (verre noir)</td><td>Mikroskop Technik Diethelm</td><td>398011</td><td>Lymphbecken (bols de teinture/réservoirs de lymphe), verre noir, 4x4 cm, avec couvercle en verre transparent</td></tr><tr><td>Pinces Dumont #3</td><td>Outils scientifiques finement</td><td>11231-30</td><td>Pinces à pointe droite Dumoxel de 12 cm avec 0,17 x 0,1 mm de pointe &nbsp ;</td></tr><tr><td>Pinces Dumont #5</td><td>Outils scientifiques finement</td><td>11252-20</td><td>Pinces Inox à pointe droite de 11 cm, grade biologique avec pointe et nbsp de 0,05 x 0,02 mm ;</td></tr><tr><td>EGTA (acide égtazique)</td><td>Millipore Sigma</td><td>324626</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol, absolu (200 proof)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP28184</td><td>Grade en biologie moléculaire</td></tr><tr><td>Verre de couverture premium Fisherbrand (18 x 18 mm), couvertures</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548A</td><td>Verre, carré, épaisseur #1 (0,13 - 0,16 mm)</td></tr><tr><td>Verre de couverture premium Fisherbrand (22 x 22 mm), couvertures</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548B</td><td>Verre, carré, épaisseur #1 (0,13 - 0,16 mm)</td></tr><tr><td>Plaques de culture cellulaire à fond plat (24 puits)</td><td>Fisher Scientific</td><td>7200740</td><td></td></tr><tr><td>Caméra microscope fluorescente disséquante, caméra Infinity8</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td>6 mégapixels, faible luminosité, monochrome</td></tr><tr><td>Fly : Smn[E33]</td><td></td><td></td><td>Du stock de mouches ; don de Grégoire Matera</td></tr><tr><td>Vol : w[1118]</td><td>Centre de bétail de Bloomington</td><td>RRID : BDSC_3605</td><td>Crosse de mouches</td></tr><tr><td>glycérol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP229-1</td><td>Grade en biologie moléculaire</td></tr><tr><td>Solution glyoxale (40 % en poids dans H2O)</td><td>Millipore Sigma</td><td>128465</td><td>&nbsp ; C’est une solution à 40 % d’origine</td></tr><tr><td>Logiciel de traitement d’image, Affinity Designer 2</td><td>Affinité</td><td></td><td>https://affinity.serif.com/en-us/</td></tr><tr><td>Logiciel de traitement d’image, Image J (Fidji)</td><td>ImageJ2</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td></tr><tr><td>Épingles à insectes</td><td>Outils scientifiques finement</td><td>26002-10</td><td>Acier inoxydable, 0,1 mm de diamètre (broches Minutien)</td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium (MgCl2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AA12315A1</td><td></td></tr><tr><td>Méthanol (HPLC)</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>A452-4</td><td>Chill à -20 ? Avant utilisation</td></tr><tr><td>Lames de microscope, givrées</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-400</td><td>Zone d’écriture, non chargée, 75 mm x 25 mm x 1 mm</td></tr><tr><td>Lames de microscope, verre nature</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-4</td><td>Pré-nettoyé, 75 mm x 25 mm</td></tr><tr><td>Lames microtomes MX35 Ultra</td><td>epredia (Fisher Scientific)</td><td>3053835</td><td>Profil bas, 34&deg ; angle de coupe ; Les lames C35 feather 80 mm fonctionnent bien</td></tr><tr><td>Vernis à ongles, transparent (vernis à ongles Sally Hansen Xtreme Wear)</td><td>Amazon</td><td></td><td>0,4 fl. oz.</td></tr><tr><td>Sérum de chèvre normal</td><td>Millipore Sigma</td><td>S26 LITRES</td><td></td></tr><tr><td>Nutator (Mini Rocker Nutating, Benchmark)</td><td>Midwest Scientific</td><td>H3D1020</td><td>24 tours par minute, fixe ; 8 x 6 pouces. Plateforme avec tapis à fossettes</td></tr><tr><td>Paintbrush (Manche n° 0)</td><td>Amazon</td><td></td><td>Pinceau rond n°0 ou similaire provenant de n’importe quel matériel d’art</td></tr><tr><td>Paraformoldéhyde (PFA)</td><td>Millipore Sigma</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>Solution tamponnée phosphate (PBS) : KCl</td><td>Millipore Sigma</td><td>529552-250GM</td><td>Préparer PBS selon le Cold Spring Harb Protoc ; 2006; doi :10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Solution physiologique tamponnée au phosphate (PBS) : KH2PO4</td><td>Millipore Sigma</td><td>P0662-500G</td><td>Préparer PBS selon le Cold Spring Harb Protoc ; 2006; doi :10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Solution physiologique tamponnée phosphate (PBS) : Na2HPO4</td><td>Millipore Sigma</td><td>S9763-500G</td><td>Préparer PBS selon le Cold Spring Harb Protoc ; 2006; doi :10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Solution tampon phosphate (PBS) : NaCl</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>S271-1</td><td>Préparer PBS selon le Cold Spring Harb Protoc ; 2006; doi :10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Pointes de pipette PR1MA (10 & micro ; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR10XLRK-NS</td><td>Universal 10 & micro ; Pointes de pipette en L</td></tr><tr><td>Pointes de pipette PR1MA (1000 & micro ; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-1000RK-FL</td><td>Universal 1000 & micro ; Pointes de pipette en L</td></tr><tr><td>Pointes de pipette PR1MA (200 & micro ; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-200RK-NS</td><td>Universal 200 & micro ; Pointes de pipette en L</td></tr><tr><td>Rhodamine-Phalloïdine</td><td>Invitrogen, Sondes Moléculaires</td><td>R415</td><td></td></tr><tr><td>Ruban adhésif double face écossais</td><td>Scotch/3M (Agrafes)</td><td>649280</td><td>Les deux côtés sont recouverts d’adhésif, 0,5" x 7 yards, disponibles chez la plupart des manutentionnaires de fournitures de bureau</td></tr><tr><td>Dihydrogène phosphate de sodium dihydré (NaH2PO4)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAA1131636</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel : GraphPad Prism</td><td>GraphPad Prism</td><td></td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td></tr><tr><td>Logiciel : Infinity Analysis 7</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td><a href="https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/">https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/</a></td></tr><tr><td>Logiciel : Microscoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel</td></tr><tr><td>Mouchoir/Kimtech Science Kimwipes Essuie-glaces délicats pour tâches, 1 pin</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666</td><td>Lingettes de mouchoir standard</td></tr><tr><td>Pipette de transfert</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9AMMD</td><td>Pipette en plastique</td></tr><tr><td>Trition X-100</td><td>Millipore Sigma</td><td>T9284-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort Vannas</td><td>Outils scientifiques finement</td><td>15000-00</td><td>Tranchant de 3 mm, diamètre de pointe 0,05 mm, longueur 8 cm</td></tr><tr><td>Vectashield avec DAPI</td><td>Laboratoires Vector</td><td>H-2000</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield sans DAPI</td><td>Laboratoires Vector</td><td>H-1900</td><td></td></tr><tr><td>Papier Whatman</td><td>Millipore Sigma</td><td>WHA1004070</td><td>Cercles en papier filtre, Grade 4, 70 mm</td></tr><tr><td>Microscope stéréo fluorescent Z10</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr><tr><td>Microscope stéréo stéréo ergonomique Z850 à zoom disséquant</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr></tbody></table>

dissection des muscles de vol indirect de drosophila melanogaster pour les approches microscopiques

Dissection of Drosophila melanogaster Indirect Flight Muscles for Microscopy Approaches

Dissection des muscles de vol indirect de Drosophila melanogaster pour les approches microscopiques

The indirect flight muscles (IFMs) of Drosophila melanogaster are a powerful genetic model to explore foundational principles of myogenesis. The ...

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JoVE Journal

Biology

Biologie

Drosophile larvaire JNM Dissection

L'identification des mécanismes sous-jacents des lésions musculaires est cruciale. Ici, nous présentons la technique histologique pour la préparation de paraffine et congelés des sections de muscles thoraciques chez la drosophile. Cela permet l'analyse de la morphologie des muscles et la localisation des protéines et autres composants de la cellule musculaire.

Les articles inclus en paraffine et congelés de Drosophile</emMuscles adultes>

Dissection et l&#39;imagerie de zones actives dans le Drosophile Jonction neuromusculaire

Les muscles de vol de la drosophile sont utilisés comme système modèle pour le développement musculaire et la physiologie. Cette vidéo décrit la musculature de vol des adultes et met en évidence un protocole pour disséquer les muscles de vol indirect en développement qui conviennent au séquençage de l’ARN des nymphes.

drosophile Dissection musculaire de vol indirect (IFM) de la chrysalide tardive : une méthode de prélèvement de tissus à haut débit

Cette vidéo présente un protocole d’évaluation de l’intégrité structurelle des jonctions neuromusculaires dans les muscles longitudinaux dorsaux de la drosophile. La procédure consiste à colorer les neurones et les muscles avec deux anticorps distincts et à comparer les modèles de fluorescence entre les mouches mutantes et les mouches de type sauvage. Une réduction de la coloration neuronale chez les mouches mutantes indique une neurodégénérescence, tandis que la structure musculaire reste...

Évaluation de l’intégrité structurelle des jonctions neuromusculaires longitudinales dorsales chez la drosophile

Des études de la morphogenèse neuronale utilisant la drosophile arborisation dendritique larvaire (da) neurones bénéficient de la visualisation in situ des protéines neuronales et épidermiques par immunofluorescence. Nous décrivons un procédé qui permet d'améliorer l'analyse par immunofluorescence des neurones DA et des cellules épidermiques entourant en retirant le tissu musculaire de la paroi du corps de la larve.

Enlèvement de<em&gt; Drosophila</em&gt; Muscle Tissue de Fillets larvaires pour immunofluorescence Analyse des neurones sensoriels et les cellules épidermiques

Nous présentons une méthode pour quantifier la zone musculaire, qui est une méthode indirecte pour déterminer la masse musculaire chez les adultes de la drosophile . Nous avons démontré que l’application de notre méthodologie en analysant le vol indirect les muscles dans un modèle drosophile de la maladie de la dystrophie myotonique.

Détermination de zone optique transversale musculaire des Muscles de vol Indirect adulte de Drosophila Melanogaster

Le muscle de vol de Drosophila est un modèle puissant pour étudier la régulation transcriptionnelle, l'épissage alternatif, le métabolisme, et la mécanobiologie. Nous présentons un protocole pour la dissection du muscle de vol fluorescent-étiqueté des chiots vivants pour produire des échantillons fortement enrichis idéaux pour la protéomique et le séquençage profond. Ces échantillons peuvent offrir des aperçus mécanistes importants dans divers aspects du développement musculaire.

Dissection des muscles de vol de melanogaster de Drosophila pour des approches d'Omics

Un protocole est présenté qui permet la visualisation de Drosophila melanogaster intact à n’importe quel stade de développement à l’aide de la tomographie microcalculée.

Imagerie d’animaux entiers de Drosophila melanogaster à l’aide de la tomographie microcalculée

Ce rapport fournit une nouvelle procédure de préparation d’échantillons pour visualiser les jonctions neuromusculaires chez les larves de drosophile . Cette méthode est plus efficace pour empêcher l’enroulement des échantillons par rapport à la méthode traditionnelle et est particulièrement utile pour l’analyse ultrastructurale de la jonction neuromusculaire de la drosophile .

Optimisation du processus de préparation d’échantillons pour la microscopie électronique à transmission des jonctions neuromusculaires chez les larves de drosophile

La drosophile est un modèle bien établi pour l’étude des molécules clés qui régulent la myogenèse. Cependant, les méthodes actuelles sont insuffisantes pour déterminer la dynamique transcriptionnelle de l’ARNm et la distribution spatiale au sein de la syncytia. Pour remédier à cette limitation, nous avons optimisé une méthode d’hybridation in situ par fluorescence de l’ARN permettant la détection et la quantification des ARNm à l’échelle d’une seule molécule.

Étude de la dynamique transcriptionnelle musculaire à l’échelle d’une seule molécule chez la drosophile

Découvrez la dissection des muscles de vol indirect de Drosophila melanogaster pour l'analyse microscopique. Ce protocole optimise la préservation des sarcomères et permet d'étudier la myogenèse et la régulation de l'ARN.

Dissection des muscles de vol indirect de Drosophila melanogaster pour les approches microscopiques

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