Name: Un modèle murin néonatal d’entérocolite nécrosante et d’isolement de la lamina propria pour le profilage des cellules immunitaires (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T14:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: Découvrez un protocole pour induire l'entérocolite nécrosante chez des souris néonatales et isoler les cellules immunitaires de la lamina propria. Cette méthode permet le profilage détaillé des réponses immunitaires intestinales par cytométrie en flux.

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<ol><li>Alsaied, A., Islam, N., Thalib, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+incidence+of+necrotizing+enterocolitis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Global incidence of necrotizing enterocolitis: A systematic review and meta-analysis.</a> BMC Pediatr. 20 (1), 344(2020).</li>
<li>Warner, B. B., Tarr, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis+and+preterm+infant+gut+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Fetal+Neonatal+Med%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis and preterm infant gut bacteria.</a> Semin Fetal Neonatal Med. 21 (6), 394-399 (2016).</li>
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<li>Leaphart, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+for+TLR4+in+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis+by+modulating+intestinal+injury+and+repair1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A critical role for TLR4 in the pathogenesis of necrotizing enterocolitis by modulating intestinal injury and repair1.</a> J Immunol. 179 (7), 4808-4820 (2007).</li>
<li>Hackam, D. J., Sodhi, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor-mediated+intestinal+inflammatory+imbalance+in+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor-mediated intestinal inflammatory imbalance in the pathogenesis of necrotizing enterocolitis.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 6 (2), 229-238.e1 (2018).</li>
<li>Sulistyo, A., Rahman, A., Biouss, G., Antounians, L., Zani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+necrotizing+enterocolitis%3A+Review+of+the+literature+and+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Innov+Surg+Sci%22%5BJournal%5D)">Animal models of necrotizing enterocolitis: Review of the literature and state of the art.</a> Innov Surg Sci. 3 (2), 87-92 (2018).</li>
<li>Lopez, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Models of necrotizing enterocolitis.</a> Semin Perinatol. 47 (1), 151695(2023).</li>
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<li>Mihi, B., Lanik, W. E., Gong, Q., Good, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A mouse model of necrotizing enterocolitis.</a> Methods Mol Biol. 2321, 101-110 (2021).</li>
<li>Nolan, L. S., Gong, Q., Hofmeister, H. N., Good, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+induction+of+experimental+necrotizing+enterocolitis+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for the induction of experimental necrotizing enterocolitis in neonatal mice.</a> STAR Protoc. 2 (4), 100951(2021).</li>
<li>Kaplina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%3A+The+role+of+hypoxia%2C+gut+microbiome%2C+and+microbial+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis: The role of hypoxia, gut microbiome, and microbial metabolites.</a> Int J Mol Sci. 24 (3), 2471(2023).</li>
<li>Good, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+rhamnosus+hn001+decreases+the+severity+of+necrotizing+enterocolitis+in+neonatal+mice+and+preterm+piglets%3A+Evidence+in+mice+for+a+role+of+TLR9%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus rhamnosus hn001 decreases the severity of necrotizing enterocolitis in neonatal mice and preterm piglets: Evidence in mice for a role of TLR9.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 306 (11), G1021-G1032 (2014).</li>
<li>Denning, T. L., Bhatia, A. M., Kane, A. F., Patel, R. M., Denning, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+nec%3A+Role+of+the+innate+and+adaptive+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of nec: Role of the innate and adaptive immune response.</a> Semin Perinatol. 41 (1), 15-28 (2017).</li>
<li>Yu, Y. -R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+comprehensive+flow+cytometric+analysis+of+immune+cells+in+normal+and+inflamed+murine+non-lymphoid+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">A protocol for the comprehensive flow cytometric analysis of immune cells in normal and inflamed murine non-lymphoid tissues.</a> PLOS ONE. 11 (3), e0150606(2016).</li>
<li>Mihi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-22+signaling+attenuates+necrotizing+enterocolitis+by+promoting+epithelial+cell+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Med%22%5BJournal%5D)">Interleukin-22 signaling attenuates necrotizing enterocolitis by promoting epithelial cell regeneration.</a> Cell Rep Med. 2 (6), 100320(2021).</li>
<li>Bautista, G. M., Cera, A. J., Chaaban, H., Mcelroy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-of-the-art+review+and+update+of+in+vivo+models+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pediatr%22%5BJournal%5D)">State-of-the-art review and update of in vivo models of necrotizing enterocolitis.</a> Front Pediatr. 11, 1161342(2023).</li>
<li>Sodhi, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+milk+oligosaccharides+2%27-fucosyllactose+and+6%27-sialyllactose+protect+against+the+development+of+necrotizing+enterocolitis+by+inhibiting+toll-like+receptor+4+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">The human milk oligosaccharides 2'-fucosyllactose and 6'-sialyllactose protect against the development of necrotizing enterocolitis by inhibiting toll-like receptor 4 signaling.</a> Pediatr Res. 89 (1), 91-101 (2021).</li>
<li>Blum, L., Vincent, D., Boettcher, M., Knopf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+aspects+of+necrotizing+enterocolitis+models%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunological aspects of necrotizing enterocolitis models: A review.</a> Front Immunol. 15, 1434281(2024).</li>
<li>Nolan, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indole-3-carbinol-dependent+aryl+hydrocarbon+receptor+signaling+attenuates+the+inflammatory+response+in+experimental+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunohorizons%22%5BJournal%5D)">Indole-3-carbinol-dependent aryl hydrocarbon receptor signaling attenuates the inflammatory response in experimental necrotizing enterocolitis.</a> Immunohorizons. 5 (4), 193-209 (2021).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL Syringe-Tuberculin Slip Tip</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td>Seringue pour alimentation par formule</td></tr><tr><td>1.5 mL semi-micro Disposable Cuvettes</td><td>BRAND GMBH + CO KG</td><td>759085D</td><td></td></tr><tr><td>1.7 ml Microtubes Clear</td><td>Axygen - Corning Inc.</td><td>MCT-175-C</td><td>Nonpryogenic &amp; Rnase-/Dnase-free</td></tr><tr><td>5% Oxygen, Balance Nitrogen Certified Reference Material, Size 200 High Pressure Steel Cylinger, CGA 580</td><td>Airgas</td><td>X02NI95C2003186</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mo CD16/CD32 Purified Clone: 93</td><td>eBioscience Inc.&nbsp;</td><td>14-0161-85</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD16/CD32 Purified Clone: 93</td><td>eBioscience Inc.&nbsp;</td><td>14-0161-86</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-mouse Ly-6C Clone: HK1.4 Isotype: Rat IgGc</td><td>BioLegend</td><td>128015</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS Rinsing Solution</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td></td></tr><tr><td>BB515 Rat Anti-CD11b Clone: M1/70</td><td>BD Biosciences</td><td>564455</td><td></td></tr><tr><td>BB700 Rat Anti-Mouse CD4 Clone: RM4-5</td><td>BD Biosciences</td><td>566408</td><td></td></tr><tr><td>BD Microtainer SST</td><td>Becton Dickinson</td><td>365867</td><td>Tube de sérum</td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p1200</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-365</td><td></td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p20</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-366</td><td></td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p200</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-362</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Stain Buffer</td><td>BD Biosciences</td><td>563795</td><td></td></tr><tr><td>BUV615 Rat Anti-Mouse Ly-6G Clone: 1A8</td><td>BD Biosciences</td><td>751263</td><td></td></tr><tr><td>BV650 Rat Anti-Mouse I-A/I-E Clone: M5/114.15.2</td><td>BD Biosciences</td><td>563415</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J Neonatal Mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>CD45-VioGreen mouse</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-102-412</td><td></td></tr><tr><td>CD64 Antibody, anti-mouse, PE-Vio 770, REAfinity Clone REA286</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-119-659</td><td></td></tr><tr><td>CFX Opus Real-Time PC Systems&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>12011319</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type 4</td><td>Worthington Biochemical Corporation&nbsp;</td><td>LS004188</td><td></td></tr><tr><td>DL-dithiothreitol&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D9779-5g</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience FOXP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td><td>Life Technologies Corp.&nbsp;</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0.5M), pH 8.0</td><td>Quality Biological Inc</td><td>351-027-721</td><td></td></tr><tr><td>Esbilac Puppy Milk Replacer</td><td>Pet-Ag, Inc.</td><td>99502-1</td><td>Lait pour chiot</td></tr><tr><td>Fisherbrand Disposable Cuvettes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-127</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 10mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 25mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 50mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11F</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 5mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>Genie Temp-Shaker 300</td><td>USA Scientific, Inc.</td><td>SI-G1600</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS Dissociator (protocol; m_intestine-01)</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS&nbsp; C Tubes</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130096334</td><td></td></tr><tr><td>Ghost Dye Red 780 Viability Dye</td><td>Tonbo Biosciences</td><td>13-0865-T100</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol ReagentPlus</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7757-500ML</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prims Software, Version 10.0</td><td>GraphPad</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Greiner Bio-One Round Bottom Polypropylene Culture Tube with Two-Position Vent Stopper</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-000-212</td><td></td></tr><tr><td>Handi+ Oxygen analyzer</td><td>Maxtec</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Balanced Salt Solution</td><td>Gibco</td><td>141650-095</td><td></td></tr><tr><td>HEPES Buffer</td><td>Mediatech, Inc.&nbsp;</td><td>25-060-CI</td><td></td></tr><tr><td>Hypoxia Chamber</td><td>Billups-Rothenburg, Inc.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Schneider et al., 2012</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex MeisterHand Iris Scissors, 10.2cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-655</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex MeisterHand Iris Scissors, 9cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-598</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex&trade; Swiss Jeweler-Style Forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-110</td><td></td></tr><tr><td>Isolette Infant Incubator</td><td>Air-Shields Vickers</td><td>C100-200-2 Series 02</td><td>Incubateur pour souris</td></tr><tr><td>Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipes</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L3129-10mg</td><td></td></tr><tr><td>Luria Broth Broth, Miller Molecular Genetics Powder</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1426-500</td><td></td></tr><tr><td>MACS BSA Stock Solution</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix Tube Rotator</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-090-753</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>1.5 ml, clear, graduated, sterile</td></tr><tr><td>NanoDrop OneC Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>ND-ONEC-W</td><td></td></tr><tr><td>Ohaus scout portable balance</td><td>Fisher Scientific</td><td>30253024</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde

un modèle murin néonatal d’entérocolite nécrosante et d’isolement de la lamina propria pour le profilage des cellules immunitaires

A Neonatal Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis and Lamina Propria Isolation for Immune Cell Profiling

Un modèle murin néonatal d’entérocolite nécrosante et d’isolement de la lamina propria pour le profilage des cellules immunitaires

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a severe inflammatory disease of the neonatal intestine, primarily affecting preterm infants. NEC is characterized by ...

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Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Source : Seman, B. G., et al. Un modèle d’imagerie néonatale de septicémie bactérienne à Gram négatif. J. Vis. Exp. (2020)La vidéo présente un modèle murin néonatal pour étudier l’infection systémique à l’aide de bactéries bioluminescentes encapsulées. Les nouveau-nés sont injectés avec des suspensions bactériennes à forte ou faible dose et sont renvoyés à leur mère pour des soins postnataux. Les bactéries encapsulées échappent à la détection immunitaire précoce, se propagent systémiquement et...

Modéliser l’infection chez les souris néonatales à l’aide de bactéries bioluminescentes encapsulées

Ici, un procédé est décrit pour la mise en place d'une infection systémique chez le rat nouveau-né avec des cultures d'Escherichia coli K1. Cette procédure non invasive permettant la colonisation du tractus gastro-intestinal, de la translocation de l'agent pathogène dans la circulation systémique, et l'invasion du système nerveux central chez le plexus choroïde.

Modèle non-invasive de neuropathogènes Escherichia coli Maladies infectieuses chez le rat nouveau-né

Ce protocole prévoit les mesures nécessaires pour établir et évaluer les infections néonatales chez les souris âgées de 7 jours.

Un modèle de souris contrôlée pour infection polymicrobienne néonatale

Cette étude détaille le processus des quantités précises de gavage des probiotiques pour souris néonatales. Le montage expérimental a été optimisé afin d’inclure, sans s’y limiter aux probiotiques dosage, méthodes d’administration et la quantification des bactéries dans les intestins.

Études de probiotiques chez la souris néonatales à l’aide de Gavage

Enteroids sont en train de devenir un nouveau modèle dans l’étude des maladies humaines. Le protocole décrit comment simuler un modèle enteroid de l’entérocolite nécrosante humain utilisant lipopolysaccharide (LPS) traitement d’enteroids produit du tissu néonatal. Enteroids recueillis montrent des modifications inflammatoires semblables à ceux vus dans l’entérocolite nécrosante humaine.

Un nouveau modèle de Enteroid épithéliales humaines d’entérocolite nécrosante

Nous avons développé un modèle de chorioamnionite pour simuler l’exposition foetale à l’inflammation maternelle (FEMI) sans complications des organismes vivants pour examiner les effets de FEMI sur le développement du tractus intestinal de la progéniture. Ceci permet l’étude des causes mécanistes pour le développement des dommages intestinaux suivant chorioamnionitis.

Un modèle murin d’exposition foetale à l’inflammation maternelle pour étudier les effets de la chorioamnionite aiguë sur le développement intestinal nouveau-né

L’infection des souris néonatales avec E. coli bioluminescent O1:K1:H7 a comme conséquence une infection septique avec l’inflammation pulmonaire significative et la pathologie pulmonaire. Ici, nous décrivons des procédures pour modéliser et étudier davantage la septicémie néonatale utilisant la formation image intravitale longitudinale en parallèle avec l’énumération des charges bactériennes systémiques, du profilage inflammatoire, et de l’histopathologie de poumon.

Un modèle néonatal d’imagerie de la septicémie bactérienne gramnégative

La fonction épithéliale intestinale dérégulée de barrière et les immuno-réactions sont des cachets de la maladie d’entrailles inflammatoire qui restent mal étudiées en raison d’un manque de modèles physiologiques. Ici, nous décrivons un modèle intestinal de boucle de souris qui emploie un segment bien-vascularisé et extériorisé d’entrailles pour étudier la perméabilité muqueuse et le recrutement de leucocyte in vivo.

Évaluation fonctionnelle de la perméabilité intestinale et de la migration transépithéliale des neutrophiles chez la souris à l’aide d’un modèle normalisé de boucle intestinale

L’entérocolite nécrosante (CEN) est la maladie gastro-intestinale (GI) la plus grave qui survient souvent chez les prématurés, en particulier les nourrissons de très faible poids à la naissance, avec une mortalité élevée et une pathogenèse incertaine. La cause de la CEN peut être liée à des anomalies inflammatoires du système de régulation immunitaire. Un modèle animal NEC est un outil indispensable pour la recherche sur le système immunitaire contre les maladies NEC. Les modèles animaux NEC...

Un modèle murin BALB/c néonatal d’entérocolite nécrosante

Ce protocole décrit un modèle in vitro d’entérocolite nécrosante (NEC), qui peut être utilisé pour des études mécanistiques de la pathogenèse de la maladie. Il est doté d’une puce microfluidique ensemencée d’entéroïdes intestinaux dérivés de l’intestin néonatal humain, de cellules endothéliales et du microbiome intestinal d’un nouveau-né atteint d’une NEC sévère.

Modèle microfluidique d’entérocolite nécrosante incorporant des entéroïdes intestinaux néonatals humains et un microbiome dysbiotique

La naissance prématurée (accouchement &lt; 37 semaines) est un problème de santé mondial urgent, avec des options de prévention et de traitement sous-optimales. Nous présentons un modèle murin d’accouchement prématuré induit par une infection bactérienne vaginale ascendante et décrivons comment analyser la morbidité et la mortalité néonatales qui en résultent.

Modélisation de l’infection vaginale ascendante, de l’accouchement prématuré et de la morbidité néonatale chez la souris

Découvrez un protocole pour induire l'entérocolite nécrosante chez des souris néonatales et isoler les cellules immunitaires de la lamina propria. Cette méthode permet le profilage détaillé des réponses immunitaires intestinales par cytométrie en flux.

Un modèle murin néonatal d’entérocolite nécrosante et d’isolement de la lamina propria pour le profilage des cellules immunitaires (Vidéo) | JoVE Journal

Un modèle murin néonatal d’entérocolite nécrosante et d’isolement de la lamina propria pour le profilage des cellules immunitaires

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