Name: Imagerie de cellules vivantes du transport endocytaire à l’aide de nanocorps fonctionnalisés dans des cellules en culture (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Découvrez l'imagerie en cellules vivantes du transport endocytaire à l'aide de nanocorps fonctionnalisés dans des cellules HeLa. Cette méthode permet de visualiser et quantifier la dynamique des protéines transmembranaires.

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<table><tbody><tr><td>Anticorps anti-GFP &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>118144600001</td><td>Le produit est distribué par Sigma-Aldrich, mais fabriqué par Roche</td></tr><tr><td>Antennes de culture cellulaire de 100 mm</td><td>TPP</td><td>TPP93100</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-actine</td><td>EMD Millipore&nbsp ;</td><td>MAB1501</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-HA</td><td>Du laboratoire</td><td>fabriqué à partir d’hybridome 12CA5</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-His6</td><td>Laboratoires Bethyl & nbsp ;</td><td>A190-114A</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-T7 &nbsp ;</td><td>Laboratoires Bethyl & nbsp ;</td><td>A190-117A</td><td></td></tr><tr><td>BL21(DE3) Compétent &nbsp ;E. coli</td><td>ONÉ</td><td>C2527H</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de calcium dihydré</td><td>Merck Millipore</td><td>102382</td><td>dissous dans de l’eau stérile, le bouillon mesure 1 M</td></tr><tr><td>Carbénicilline sel disode</td><td>Applichem</td><td>A1491</td><td>dissous dans de l’eau stérile, le stock est de 100 mg/mL</td></tr><tr><td>Coomassie-R (bleu éclatant)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B-0149</td><td></td></tr><tr><td>D-biotine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B4501</td><td>dissous dans des naH2< stériles de 500 mM / sub>PO4 ou DMSO</td></tr><tr><td>Colonnes jetables PD10 de désalage</td><td>GE Healthcare</td><td>GE17-0851-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM GlutaMAX-I</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>61965026</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, glycémie élevée, pas de glutamine, pas de phénol rouge</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31053028</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Applichem</td><td>A3778</td><td>dissous dans de l’eau stérile</td></tr><tr><td>Dulbecco » s solution séline tamponnée phosphate (DPBS) sans Ca2+/Mg2+</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5256701</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S, PES, Porengr&ouml ; &szlig ; e : 0,45 & micro ; m</td><td>Sarstedt</td><td>83.1826</td><td></td></tr><tr><td>Réactif de transfection FuGENE HD</td><td>Proméga&nbsp ;</td><td>E2311</td><td></td></tr><tr><td>Goulottes en verre (n° 1.5H)</td><td>VWR</td><td>631-0153</td><td></td></tr><tr><td>HRP anti-souris de chèvre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-0168</td><td></td></tr><tr><td>HRP anti-lapins de chèvre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-0545</td><td></td></tr><tr><td>Son kit tampon</td><td>Cytvia</td><td>11003400</td><td></td></tr><tr><td>Ses chroniques GraviTrap</td><td>Cytvia</td><td>11003399</td><td></td></tr><tr><td>ibidi &micro ;-Slide 4 well, ibiTreat</td><td>80426-IBI</td><td>ibidi</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl-&bêta ;-D-thiogalactopyranosïde (IPTG)</td><td>Applichem</td><td>A1008</td><td>dissous dans de l’eau stérile, le bouillon mesure 1 M</td></tr><tr><td>Sulfate de kanamycine</td><td>Applichem</td><td>A1493</td><td>dissous dans de l’eau stérile, le stock est de 100 mg/mL</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Applichem</td><td>A3704</td><td></td></tr><tr><td>Lysozyme&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>18037059001</td><td>Le produit est distribué par Sigma-Aldrich, mais fabriqué par Roche</td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium hexahydraté</td><td>Merck Millipore</td><td>105833</td><td>dissous dans de l’eau stérile, le bouillon mesure 1 M</td></tr><tr><td>Mini-protéan TGX gels, 4-20 %, 15 puits</td><td>Bio-Rad</td><td>4561096</td><td></td></tr><tr><td>HeLa Kyoto modifié</td><td>Du laboratoire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NEB5-alpha Competent&nbsp ;E. coli</td><td>ONÉ</td><td>C2987U</td><td></td></tr><tr><td>NucleoBond Xtra Midi Plus, 10 préparations</td><td>Macherey-Nagel & nbsp ;</td><td>740412.1</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline/Streptomycine</td><td>Bioconcept & nbsp ;</td><td>4-01F00-H</td><td></td></tr><tr><td>Fluorure de phénylméthylsulfonyle (PMSF)</td><td>Applichem</td><td>A0999.0025</td><td>dissous dans 40 % de DMSO, 60 % d’isopropanol, stock dans 500 mM</td></tr><tr><td>Lignée cellulaire Phoenix ampho</td><td>Laboratoire Nolan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polybrene (bromure d’hexadiméthrine)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9268</td><td></td></tr><tr><td>Puromycine</td><td>Invivogen</td><td>ANT-PR-1</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium & nbsp ;</td><td>Merck Millipore</td><td>106404</td><td>dissous dans de l’eau stérile, le stock fait 5 M</td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium &nbsp ;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360039</td><td></td></tr><tr><td>Trans-Blot Turbo Pack, mini</td><td>Bio-Rad</td><td>1704158</td><td></td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>Applichem</td><td>A1553</td><td></td></tr><tr><td>Extrait de levure & nbsp ;</td><td>Applichem</td><td>A1552</td><td></td></tr></tbody></table>

imagerie de cellules vivantes du transport endocytaire à l’aide de nanocorps fonctionnalisés dans des cellules en culture

Live-cell Imaging of Endocytic Transport using Functionalized Nanobodies in Cultured Cells

Imagerie de cellules vivantes du transport endocytaire à l’aide de nanocorps fonctionnalisés dans des cellules en culture

Endocytosis of receptors and other transmembrane proteins from the cell surface to endosomes and beyond is critical for homeostasis, physiology, and ...

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JoVE Journal

Biochemistry

Biochimie

Imagerie des cellules vivantes est d'une utilité particulière lorsque l'on étudie la dynamique du trafic des organelles. Nous décrivons ici un protocole d'imagerie en temps réel du noyau dense vésicules dans des neurones cultivés en utilisant la microscopie à fluorescence à champ large. Ce protocole est flexible et peut être adaptée aux organites autre image tels que les mitochondries, les endosomes, et les peroxysomes.

Imagerie en temps réel du noyau dense de vésicules cultures primaires neurones de l&#39;hippocampe

Source : Zhang, Y., et al. Application de nanoparticules fluorescentes pour étudier le remodelage du système endo-lysosomal par des bactéries intracellulaires. J. Vis. Exp. (2015)Cette vidéo démontre l’utilisation de nanoparticules fluorescentes pour visualiser le remodelage endo-lysosomal dans les cellules épithéliales humaines infectées par des bactéries intracellulaires. À la suite d’une invasion bactérienne, les agents pathogènes manipulent le cytosquelette de l’hôte et le système...

Visualisation médiée par des nanoparticules du remodelage endo-lysosomal dans des cellules infectées par des bactéries

Cette vidéo présente une méthode pour étudier l’absorption et le transport rétrograde de nanocorps fonctionnalisés afin de comprendre leurs voies de trafic intracellulaire. En introduisant du sulfate radiomarqué et en utilisant des techniques d’isolement et de détection, cette méthode permet d’étudier l’absorption endocytaire et l’arrivée des protéines cargo par le réseau trans-Golgi.

Suivi de l’arrivée de protéines de surface marquées à la GFP dans le réseau trans-Golgi à l’aide de nanocorps fonctionnalisés

Cette vidéo montre comment les vésicules neuronales sont marquées avec des protéines fluorescentes spécifiques pour visualiser leur mouvement. Tout d’abord, un plasmide codant pour une protéine fluorescente est incubé avec un agent de transfection, puis introduit dans une culture de neurones. Par la suite, des images des neurones sont acquises et analysées pour suivre le mouvement des vésicules.

Visualisation des motilités vésiculaires dans les neurones à l’aide de l’imagerie par fluorescence

Nous décrivons des méthodes d'imagerie nous utilisons pour étudier la distribution et la mobilité des protéines fluorescentes transfectées résidant dans le réticulum endoplasmique (RE) par l'intermédiaire de l'imagerie confocale de cellules vivantes. Nous analysons également ultrastructuralement l'effet de leur expression sur l'architecture de ce compartiment subcellulaire.

Visualisation de réticulum endoplasmique sous-domaines dans les cellules cultivées

Nous décrivons un procédé pour marquer la protéine à la surface des neurones vivants en utilisant un anticorps polyclonal spécifique à des épitopes extracellulaires. Protéine liée par l'anticorps sur la surface de la cellule et ensuite internalisée par endocytose peut être distinguée de la protéine restante sur, ou à un trafic, de la surface au cours de l'incubation.

Étiquetage différentiel de surface cellulaire et intériorisé protéines après Anticorps alimentation de Live de culture neurones

Cet article décrit les méthodes pour la synthèse et le marquage fluorescent de nanoparticules (NP). Les IP ont été appliquées dans des expériences pulse-chase d'étiqueter le système endo-lysosomale des cellules eucaryotes. La manipulation du système d'endo-lysosomal par les activités de l'agent pathogène intracellulaire Salmonella enterica ont été suivis par imagerie des cellules vivantes et quantifiée.

Application de nanoparticules fluorescentes pour étudier Rénovation du système Endo-lysosomale par des bactéries intracellulaires

Imagerie de cellules vivantes est un outil puissant pour visualiser les processus dynamiques. L’examen des cellules fixes fournit uniquement des images statiques, qui peuvent conduire à des erreurs d’interprétation et de la confusion au sujet du processus. Cet ouvrage présente une méthode pour étudier l’absorption, la libération de la drogue et localisation intracellulaire des nanoparticules LIPOSOMALES dans les cellules vivantes.

À l’aide de In Vitro imagerie de cellules vivantes pour explorer les agents chimiothérapeutiques livré par nanoparticules à base de lipides

L'étude du trafic membranaire est cruciale pour comprendre les fonctions neuronales. Ici, nous introduisons un procédé pour quantifier la motilité des vésicules dans les neurones. C'est une méthode pratique qui peut être adaptée à la quantification du trafic membranaire dans le système nerveux.

Quantification des molécules d&#39;endosome et de lysosome dans les neurones cultivés utilisant des sondes fluorescentes

Transport rétrograde des protéines de la surface de la cellule de l’appareil de Golgi est essentielle pour maintenir l’homéostasie de la membrane. Nous décrivons ici une méthode pour analyser biochimiquement transport de surface-à-Golgi cellulaire des protéines recombinantes, nanocorps fonctionnalisés dans les cellules HeLa.

Analyse de l’endocytose absorption et Transport rétrograde au réseau Trans-Golgi dans des cellules cultivées à l’aide de Nanocorps fonctionnalisés

Découvrez l'imagerie en cellules vivantes du transport endocytaire à l'aide de nanocorps fonctionnalisés dans des cellules HeLa. Cette méthode permet de visualiser et quantifier la dynamique des protéines transmembranaires.

Imagerie de cellules vivantes du transport endocytaire à l’aide de nanocorps fonctionnalisés dans des cellules en culture

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