Name: Génération d’un modèle à base d’organoïdes prostatiques de souris pour étudier les interactions hôte-pathogène (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Découvrez la génération d'un modèle 2D d'organoïdes prostatiques de souris pour étudier les interactions hôte-pathogène avec Escherichia coli uropathogène. Cette méthode permet d'accéder directement à la surface apicale des cellules épithéliales.

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<table><tbody><tr><td>Plaques à 48 puits</td><td>Sarstedt</td><td>83.3923</td><td>Forme du bas : plat</td></tr><tr><td>5&alpha ;-Androstan-17&bêta ;-ol-3-one dihydrotestostérone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8380</td><td>Il était désigné comme DHT. Solution d’origine 10 & mu ; M en 100 % d’éthanol</td></tr><tr><td>Lame PET à 8 puits avec 40 électrodes par puits &nbsp ;</td><td>Biophysique appliquée</td><td>8W10E+</td><td>Diapositives utilisées pour les mesures TEER</td></tr><tr><td>Plaques à 96 puits</td><td>Sarstedt</td><td>82.1583</td><td>Forme du bas : conique</td></tr><tr><td>Advance Dulbecco » s Eagle moyen modifié/F12&nbsp ;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12634028</td><td>Il a été désigné adDMEM/F12+/+ lorsqu’il est complété par 10 mmol L&minus ; 1 HEPES et 1x GlutaMAX</td></tr><tr><td>Ampiciline</td><td>Roth</td><td>K029.2&nbsp ;</td><td>Stock de concentration 100 mg/mL</td></tr><tr><td>Anticorps anti-CD24a</td><td>Proteintech</td><td>10600-1-AP</td><td>Anticorps primaire ; dilution 1:100 dans 1x PBS 1 % BSA</td></tr><tr><td>Anti-Cytokératine 5 Alexa Fluor 647 anticorps &nbsp ;</td><td>Abcam&nbsp ;</td><td>ab193895</td><td>Anticorps primaire ; dilution 1:100 dans 1x PBS 1 % BSA</td></tr><tr><td>anti-Rabbit IgG Alexa Fluor 488&nbsp ; anticorps</td><td>Invitrogen</td><td>A21441</td><td>Anticorps secondaire ; dilution 1:500 dans 1x PBS 1 % BSA</td></tr><tr><td>Anticorps polyclonal anti-ZO-1</td><td>Proteintech</td><td>21773-1-AP</td><td>Anticorps primaire ; dilution 1:750 dans 1x PBS 1 % BSA</td></tr><tr><td>B27, 50x</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Bovines Serumalbumine (BSA) Fraktion V, NZ-Origin</td><td>Roth</td><td>8076.3</td><td>Composant du tampon de blocage utilisé à 1 % dans 1x PBS</td></tr><tr><td>puits micro-Slide 8 chambrés</td><td>Ibidi</td><td>80806</td><td>Modification de surface : ibiTreat</td></tr><tr><td>Tube conique (15 mL)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T1943</td><td>Le fond plat est meilleur pour les petites granulés. & nbsp ;</td></tr><tr><td>Éthylènédiaminetétra-acétate 2H2O (EDTA) disodium</td><td>Roth&nbsp ;</td><td>8043.2</td><td>Fait maison : 93,0 g dans 400 mL d’H2O, ajuster le pH à 8,0, ajuster le volume avec H2O jusqu’à 500 mL ; 0,5 M EDTA ; composante du tampon du cytomètre à débit</td></tr><tr><td>Solution saline équilibrée de Dulbecco (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>PBS</td></tr><tr><td>ECHO Revolve Microscope & nbsp ;</td><td>ECHO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ECIS&nbsp ; Z-Theta -&nbsp ; Système d’analyse cellulaire basé sur l’impédance</td><td>Biophysique appliquée</td><td>ECIS&nbsp ; Z-Theta</td><td>Le système comprend : stations à 16 et/ou 96 puits ; module de contrôle externe ; PC portable ; logiciels de contrôle, d’acquisition et d’affichage ECIS ; module de champ élevé pour la migration et l’électroporation automatisées des cellules &nbsp ;</td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS) Supérieur</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0615</td><td>Composant du tampon du cytomètre en flux ; composant du milieu de culture de la lignée cellulaire 293T ; composante du milieu de culture HEK293T lignée cellulaire</td></tr><tr><td>Flash Phalloidin Red 594</td><td>Biolégende</td><td>424203</td><td>Dilution 1:250 dans 1x PBS 1 % BSA</td></tr><tr><td>Tampon de cytomètre en débit</td><td></td><td></td><td>1x PBS, 10 % FBS, 5 mM EDTA</td></tr><tr><td>Gentamicin&nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G1272</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX&nbsp ;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050-038</td><td>Dipeptide L-alanyl-L-glutamine, composant de l’adDMEM/F12+/+&nbsp ;</td></tr><tr><td>Densimètre cellulaire Harvard Biochrom Ultrospec 10</td><td>Fisher Scientific</td><td>10704417</td><td></td></tr><tr><td>Coloration rouge profond HCS CellMask</td><td>Technologies de vie</td><td>H32721</td><td>Dilution 1:1 000 dans 1x PBS 1 % BSA</td></tr><tr><td>HEK293T lignée cellulaire transfectée avec le vecteur d’expression Noggin-Fc de souris</td><td>Ligne cellulaire du Professeur Dr Clevers</td><td></td><td>Utilisé pour produire du Noggin ; milieu de culture : 500 ml DMEM, glycémie élevée, GlutaMAX, pyruvate (Gibco Life Technologies, 31966) + 50 ml FBS ; Farin et al. Gastroentérologie 143.6 (2012) : 1518-1529</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp ;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630056</td><td>Composant d’adDMEM/F12+/+&nbsp ;</td></tr><tr><td>Hoechst 33342&nbsp ;</td><td>Technologies de vie</td><td>H3570</td><td>Dilution 1:5 000 dans 1x PBS</td></tr><tr><td>Facteur de croissance épidermique humain (EGF) & nbsp ;</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td>Stock de concentration 500 & micro ; g/mL</td></tr><tr><td>Boucles d’inoculation</td><td>Sarstedt</td><td>86.1567.010</td><td></td></tr><tr><td>Tubes d’inoculation</td><td>Sarstedt</td><td>62.515.006</td><td></td></tr><tr><td>Microscope confocal Leica Stellaris 5</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bouillon Luria Bertani (bouillon LB)</td><td>Roth&nbsp ;</td><td>X968.1</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>356231</td><td>Matrice extracellulaire (ECM)</td></tr><tr><td>N-acétylcystéine &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165-25G</td><td>Stock de concentration 500 mM</td></tr><tr><td>Noggin CM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NovoCyte Quanteon&nbsp ;</td><td>Agilent</td><td></td><td>Cytomètre en flux</td></tr><tr><td>Paraformoldéhyde (PFA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6148</td><td>utilisé à 4 % dans 1x PBS, 4 % de saccharose</td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>Ant-pm-1</td><td></td></tr><tr><td>Q-VETTES semi-micro</td><td>Ratiolab</td><td>2712120</td><td></td></tr><tr><td>RHOKi (Y-27632)</td><td>AbMole</td><td>M1817</td><td>Inhibiteur RhoA/ROCK ; Stock de concentration 10 mM</td></tr><tr><td>R-spodin1 CM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>R-Spondin1 exprimant la lignée cellulaire 293T</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SCC111</td><td>Utilisé pour produire R-spo1 CM ; milieu de culture : 500 ml DMEM, glycémie élevée, GlutaMAX, pyruvate (Gibco Life Technologies, 31966) + 60 ml FBS&nbsp ;</td></tr><tr><td>TGF & beta ; i (A-83-01)</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td>Inhibiteur ALK4/5/7 ; Stock de concentration 5 mM&nbsp ;</td></tr><tr><td>Triton X-100 & nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9284</td><td>utilisé à 0,5 % dilué dans PBS 1x</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme&nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>12605028</td><td>Agent de dissociation enzymatique des cellules pour digérer les organoïdes prostatiques de souris en 3D</td></tr><tr><td>Souche uropathogène Escherichia coli souche UTI89</td><td>Souche WT du Prof. Dr Dobrindt</td><td></td><td>transformé avec pFPV-mCherry (addgène #20956)</td></tr></tbody></table>

génération d’un modèle à base d’organoïdes prostatiques de souris pour étudier les interactions hôte-pathogène

Generation of a Mouse Prostate Organoid-Based Model for Studying Host-Pathogen Interactions

Génération d’un modèle à base d’organoïdes prostatiques de souris pour étudier les interactions hôte-pathogène

Aging men are highly affected by prostate diseases, such as benign prostatic hyperplasia, prostatitis, and prostate cancer. Together, these conditions ...

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Les organoïdes dérivés de tumeurs sont un type de modèle de culture cellulaire 3D qui peut maintenir les caractéristiques pathologiques et la lignée cellulaire spécifique à l’organe des tumeurs. Dans l’exemple de protocole, nous verrons des scientifiques générer des organoïdes à partir d’une tumeur de la prostate à partir d’un modèle de souris génétiquement modifié.

Préparation d’organoïdes à partir de tumeurs : un modèle tumoral 3D in vitro

Dans cette vidéo, nous démontrons la culture de cellules épithéliales de prostate isolées de souris à l’aide d’une technique de culture basée sur un gel matriciel. Cette approche peut fournir des informations complémentaires sur la capacité de différenciation des cellules épithéliales de la prostate à former des structures glandulaires 3D en réponse à une manipulation génétique ou pharmacologique.

Dosage des organoïdes de la prostate : une technique de culture ex vivo basée sur un anneau de gel matriciel pour étudier la capacité de différenciation des cellules épithéliales de la prostate

Les cultures dérivées de cellules souches recèlent un énorme potentiel pour modéliser les maladies infectieuses. Ici, la culture d’organoïdes gastriques de souris et d’humains dérivés de cellules souches adultes est décrite. Les organoïdes sont micro-injectés avec l’agent pathogène gastrique Helicobacter pylori.

Organoïdes de modèle pour les maladies infectieuses: la culture des droits humains et murins organoïdes d&#39;estomac et microinjection de Helicobacter pylori

Souris génétiquement modifiées sont des modèles utiles pour l’étude des mécanismes du cancer de la prostate. Nous présentons ici un protocole en vue d’identifier et de disséquer les lobes de la prostate depuis un système urogénital de la souris, de différencier basé sur l’histologie et d’isoler et de culture primaire de cellules prostatiques in vitro comme sphéroïdes pour analyses en aval.

Identification, Caractérisation histologique et Dissection des Lobes de la Prostate souris pour modèles In Vitro sphéroïde 3D Culture

Nous présentons ici un protocole visant à guider la manipulation humaine primaire organoïde la prostate puis indiquent les points de terminaison pour évaluer le phénotype. Semis, entretien de la culture, recouvrement de gel de matrice, quantification morphologique, enrobage et sectionnement, FFIP sectionnement, entier-montez coloration et application d’essais commerciaux sont décrites.

Manutention et évaluation de la Culture humaine Organoïde la Prostate primaire

Nous montrons une méthode pour l'autopsie et la dissection des modèles de cancer de la prostate de souris, se concentrant sur la dissection de tumeur de prostate. Un protocole étape par étape pour la génération des organoïdes de tumeur de prostate de souris est également présenté.

Génération d'organoïdes tumoraux à partir de modèles de souris génétiquement modifiés du cancer de la prostate

Les organoïdes de prostate de souris représentent un contexte prometteur pour évaluer des mécanismes qui règlent la différenciation. Cet article décrit une approche améliorée pour établir des organoïdes de prostate, et introduit des méthodes pour (1) recueillir le lysate de protéine des organoïdes, et (2) fixer et tacher des organoïdes pour la microscopie confocale de monture entière.

Évaluer la capacité de différenciation des cellules épithéliales de la prostate de la souris à l'aide de la culture organoïde

Présenté ici est un protocole pour étudier des réponses pharmacologiques dans les organoïdes épithélial de prostate. Les organoïdes ressemblent beaucoup à la biologie in vivo et récapitulent la génétique des patients, ce qui en fait des systèmes modèles attrayants. Les organoïdes de prostate peuvent être établis à partir des prostates sauvages de type, des modèles génétiquement modifiés de souris, du tissu humain bénin, et du cancer de la prostate avancé.

Les cultures organoïdes de la prostate comme outils pour traduire les génotypes et les profils mutationnels en réponses pharmacologiques

Les cultures tridimensionnelles des spécimens patients de BMPC et des xénogreffes du cancer de la prostate métastatique d'os maintiennent l'hétérogénéité fonctionnelle de leurs tumeurs originales ayant pour résultat des kystes, des sphéroïdes et des organoïdes complexes de tumeur-comme. Ce manuscrit fournit une stratégie d'optimisation et un protocole pour la culture 3D d'échantillons dérivés de patients hétérogènes et leur analyse à l'aide de l'IFC.

Établissement et analyse des organoïdes tridimensionnels (3D) dérivés des spécimens de métastasie osseuse du cancer de la prostate du patient et de leurs Xénogreffes

L’hétérogénéité du cancer de la prostate et la résistance au traitement restent des défis. Nous décrivons un protocole pour générer des organoïdes dérivés du patient (PDO) qui préservent les principales caractéristiques tumorales parentales. Ce modèle standardisé soutient le dépistage des médicaments et les progrès de la médecine de précision.

Établissement et maintenance d’organoïdes du cancer de la prostate dérivés de patients : un protocole expérimental détaillé

L’étude présente une méthode d’investigation in vitro des infections bactériennes à l’aide d’organoïdes intestinaux dérivés des cellules souches tissulaires. Le protocole décrit comment cultiver et différencier les organoïdes en deux dimensions, les infecter avec des Escherichia coli invasives par adhérents, et évaluer les données clés, notamment la rupture de la barrière épithéliale, l’imagerie d’infection et la réponse de l’ARN épithélial.

Une culture organoïde bidimensionnelle sur un extrait d’invasine ou de membrane basale pour étudier les interactions hôte-bactérie

Découvrez la génération d'un modèle 2D d'organoïdes prostatiques de souris pour étudier les interactions hôte-pathogène avec Escherichia coli uropathogène. Cette méthode permet d'accéder directement à la surface apicale des cellules épithéliales.

Génération d’un modèle à base d’organoïdes prostatiques de souris pour étudier les interactions hôte-pathogène

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