Name: Méthode à microbilles magnétiques rapides pour la purification efficace de neutrophiles de faible densité (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: Découvrez une méthode rapide de microbilles magnétiques pour isoler des neutrophiles de faible densité purs et viables à partir de sang périphérique. Cette technique améliore l'étude des mécanismes immunitaires et des stratégies thérapeutiques.

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<table><tbody><tr><td>&nbsp ; Anticorps polyclonal anti-citrulline du lapin</td><td>AbCam</td><td>AB100932</td><td>Dilution 1/50</td></tr><tr><td>Plaque de culture tissulaire à 96 puits</td><td>Partenaire ; Corning, Inc.</td><td>3596</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps IgG1 de souris Alexa Fluor 488 anti-humain CD11b</td><td>BioLegend</td><td>301317</td><td>0,25 &mu ; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorps IgM de souris Alexa Fluor 647 anti-humain CD66b</td><td>BioLegend</td><td>305109</td><td>0,05 &mu ; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorps anti-souris IgG (H+L) contre la chèvre, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001</td><td>Dilution 1/50</td></tr><tr><td>Anticorps monoclonal IgG1 de souris anti-élastase neutrophile</td><td>Santa Cruz Biotechnologie</td><td>SC-55549</td><td>10 & micro ; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorps anti-IgG de lapin (H+L) anticorps d’âne, Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-31572</td><td>Dilution 1/50</td></tr><tr><td>Anticorps IgG1 de souris anti-humain APC CD62L</td><td>BioLegend</td><td>304809</td><td>0,03 & mu ; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorps IgG1 de souris anti-humain APC/Cyanine7</td><td>BioLegend</td><td>367107</td><td>0,25 &mu ; g/mL</td></tr><tr><td>Attune NxT flow cytometer &nbsp ;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>(lasers bleu/rouge)</td><td></td></tr><tr><td>Fraction V de l’albumine sérique bovine (BSA)</td><td>MP Biomédicals</td><td>810025</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps IgG1 de souris Brilliant Violet 510 anti-humain CD33</td><td>BioLegend</td><td>366609</td><td>0,30 & mu ; g/mL</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Calbiochem/EMD Millipore</td><td>268298</td><td></td></tr><tr><td>Dextran T500</td><td>Pharmacosmos A/C</td><td>5.51005E+11</td><td></td></tr><tr><td>Dihydrorhodamine-123</td><td>Anaspec, Inc.</td><td>AS-85711</td><td></td></tr><tr><td>Trieur de cellules FACS</td><td>Becton Dickinson&nbsp ;</td><td>Modèle FACSAria</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>Merck KG</td><td>GE 17-1440-03</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps IgG1 FITC anti-humain CD98 de souris</td><td>BioLegend</td><td>315603</td><td>0,30 & mu ; g/mL</td></tr><tr><td>Logiciel FlowJo</td><td>Becton Dickinson</td><td>Version 10, 2019</td><td></td></tr><tr><td>Microscope inversé à fluorescence</td><td>Olympe</td><td>Modèle IX-70</td><td></td></tr><tr><td>Héparine</td><td>Inhepar - PiSA Farmaceutica</td><td>3660149</td><td>5000 UI/mL</td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H7006</td><td></td></tr><tr><td>Microbilles de chimérisme CD66b du MacSprep</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-111-552</td><td></td></tr><tr><td>Aimant</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Colonne de séparation magnétique</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifugeuse</td><td>Eppendorf</td><td>Modèle 5415C</td><td></td></tr><tr><td>Lecteur de microplaques</td><td>BioTek Instruments</td><td>Synergie des modèles HT</td><td></td></tr><tr><td>Paraformélélidoïde</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps IgG1 de souris anti-PE</td><td>BioLegend</td><td>312203</td><td>0,05 &mu ; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorps IgG2a de souris anti-PE</td><td>BD Pharmingen</td><td>550868</td><td>Dilution 1/40</td></tr><tr><td>Anticorps IgG1 de souris anti-humain PE/Cyanine5</td><td>BioLegend</td><td>323013</td><td>0,25 &mu ; g/mL</td></tr><tr><td>Phorbol 12-myristate 13-acétate (PMA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>poly-L-lysine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2658</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse réfrigérée</td><td>Eppendorf</td><td>Modèle 5702R</td><td></td></tr><tr><td>Milieu de culture tissulaire RPMI-1640</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td><td></td></tr><tr><td>SYTOX Green</td><td>Molecular Probes, Inc.</td><td>S-7020</td><td></td></tr><tr><td>Préados-20 & nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield</td><td>Laboratoires Vector</td><td>H-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

méthode à microbilles magnétiques rapides pour la purification efficace de neutrophiles de faible densité

Rapid Magnetic-microbead Method for Efficient Purification of Low-density Neutrophils

Les neutrophiles de basse densité (NDT) chez les individus sains représentent environ 5 % des PBMC (Figure 2A). Le protocole décrit ici fournit généralement de la LDN pure (&gt; 90 %). Les cellules sont également récupérées efficacement (rendement d’environ 98 %) avec une viabilité élevée (&gt; 95 %; Figure 2B). À titre de comparaison, les LDN ont également été purifiés par tri cellulaire activé par fluorescence, comme décrit pré...

Méthode à microbilles magnétiques rapides pour la purification efficace de neutrophiles de faible densité

Neutrophils, important leukocytes of innate immunity, have traditionally been considered a homogeneous cell population. Nevertheless, recent evidence has ...

rapid-magnetic-microbead-method-for-efficient-purification-low

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Les neutrophiles sont parmi les premières cellules à arriver sur le site de la réponse immunitaire inflammatoire, et de leurs fonctions et mécanismes ont été largement étudiés in vitro. Nous démontrons une méthode de gradient de densité standard de séparation pour isoler les neutrophiles humains du sang total en utilisant des milieux de séparation disponibles commercialement.

Isolement des neutrophiles Protocole

La vidéo explique une façon de purifier les lymphocytes B par ciblage immunomagnétique et séparation de la suspension de cellules mononucléées du sang périphérique. La méthode consiste à marquer des types de cellules indésirables avec des anticorps ou des ligands spécifiques (liés à des particules magnétiques) ciblant des protéines de surface cellulaire spécifiques, à appauvrir de la suspension cellulaire hétérogène par séparation magnétique.

Sélection immunomagnétique négative : une méthode pour purifier les lymphocytes B des cellules mononucléées du sang périphérique

Dans cette vidéo, nous décrivons la procédure d’isolement des neutrophiles de basse densité, ou LDN, du liquide de lavage péritonéal d’un patient humain postopératoire. Les LDN ainsi obtenus peuvent être utilisés dans d’autres expériences en aval pour comprendre leur rôle dans la croissance et la progression tumorales.

Isolement péritonéal des neutrophiles de basse densité : une technique pour obtenir des neutrophiles de basse densité à partir d’un liquide de lavage péritonéal à l’aide du tri cellulaire activé magnétique

Nous décrivons un protocole pour l'isolement et la purification des neutrophiles de la moelle osseuse de souris par centrifugation de gradient de densité et de neutrophiles étiquetage utilisant des colorants CellTracker. Cela représente une méthode simple, rapide, reproductible et économique pour obtenir un grand nombre de neutrophiles pour des études fonctionnelles en aval ou des expériences de transfert et de suivi adoptifs.

Isolement, la purification et l&#39;étiquetage des neutrophiles osseuse de souris de moelle pour les études fonctionnelles et expériences de transfert adoptif

Les neutrophiles jouent un rôle important non seulement dans la défense de l’hôte contre les micro-organismes envahisseurs, mais sont également impliqués dans la surveillance immunitaire des cellules tumorales. Ici, nous décrivons des techniques liées à l’isolement de neutrophiles ayant des propriétés antitumorales et des méthodes de surveillance de la fonction antitumorale des neutrophiles in vitro et in vivo.

Isolement et caractérisation de neutrophiles avec des propriétés anti-tumorales

Les neutrophiles sont le type de globules blancs le plus abondant. L’isolement des neutrophiles du sang humain par la méthode de séparation par gradient de densité et la différenciation des cellules promyélocytaires humaines (HL60) le long de la voie granulocytaire sont décrits ici ; Tester leur rôle sur la sensibilité des cellules du lymphome aux agents anti-lymphomes.

Neutrophiles Isolement et analyse pour déterminer leur rôle dans le lymphome cellulaire Sensibilité aux agents thérapeutiques

Les mutations dans le gène riche de leucine de répétition de kinase 2 (LRRK2) causent la maladie héréditaire de Parkinson. Nous avons développé une méthode facile et robuste pour évaluer la phosphorylation LRRK2-contrôlée de Rab10 dans les neutrophiles périphériques humains de sang. Ceci peut aider à identifier des individus avec l’activité accrue de voie de kinase de LRRK2.

Isolement humain de neutrophile de sang périphérique pour interroger la voie de kinase LRRK2 associée de Parkinson en évaluant la phosphorylation de Rab10

Ce protocole détaille une méthode pour isoler les neutrophiles du sang total, des manteaux bouffants ou des membranes de leucaphérèse, obtenant un bon rendement, une pureté élevée et une activation cellulaire minimale. Nous utilisons la purification par gradient, la sédimentation des globules rouges (RBC) et la lyse des globules rouges pour obtenir une préparation de neutrophiles de haute qualité / pureté.

Isolement des neutrophiles humains du sang total et des buffys

Cette recherche décrit deux techniques pour isoler les pièges extracellulaires neutrophiles abondants (TNE) de la moelle osseuse du rat. Une méthode combine un kit d’isolement des neutrophiles commercial avec une centrifugation à gradient de densité, tandis que l’autre utilise uniquement la centrifugation à gradient de densité. Les deux approches produisent des TNE fonctionnelles surpassant celles des neutrophiles du sang périphérique.

Approche unique pour isoler les neutrophiles de la moelle osseuse du rat avec une capacité comparable

Ce protocole détaille une méthode compatible avec l’automatisation à haut débit pour isoler les cellules mononucléées du sang périphérique humain à des fins de biobanque et à d’autres fins.

Isolement de cellules mononucléées de sang périphérique humain à partir de couches leucocytaires par séparation immunomagnétique à haut débit

Ici, nous proposons une approche fiable pour isoler les neutrophiles de densité faible et normale du sang total en utilisant l’isolement magnétique (sélection négative) et le milieu à gradient de densité discontinu. Il garantit l’isolement intact des cellules de haute pureté (≥93 %), facilitant ainsi l’analyse précise en aval des sous-populations de neutrophiles, ce qui est crucial pour comprendre leurs rôles dans la santé et la maladie.

L’isolement et la caractérisation des neutrophiles de basse et de densité normale dans le sang total

Découvrez une méthode rapide de microbilles magnétiques pour isoler des neutrophiles de faible densité purs et viables à partir de sang périphérique. Cette technique améliore l'étude des mécanismes immunitaires et des stratégies thérapeutiques.

Méthode à microbilles magnétiques rapides pour la purification efficace de neutrophiles de faible densité

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