Name: Procédures pour l’identification des inhibiteurs d’entrée du SARS-CoV-2 en tant qu’antiviraux potentiels à l’aide de pseudovirus à base de MLV (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:10:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Découvrez une méthode sécurisée pour identifier les inhibiteurs d'entrée du SARS-CoV-2 en utilisant des pseudovirus basés sur le MLV. Ce protocole permet le criblage antiviral en laboratoire de confinement biologique de niveau 2.

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<ol><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+and+emerging+variants%3A+Unmasking+structure%2C+function%2C+infection%2C+and+immune+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 and emerging variants: Unmasking structure, function, infection, and immune escape mechanisms.</a> Front Cell Infect Microbiol. 12, 869832(2022).</li>
<li>Jackson, C. B., Farzan, M., Chen, B., Choe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+SARS-CoV-2+entry+into+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of SARS-CoV-2 entry into cells.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 23 (1), 3-20 (2022).</li>
<li>Le, K., Kannappan, S., Kim, T., Lee, J. H., Lee, H. -R., Kim, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+understanding+of+SARS-CoV-2+virus+entry+to+host+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Structural understanding of SARS-CoV-2 virus entry to host cells.</a> Front Mol Biosci. 10, 1288686(2023).</li>
<li>Ayoub, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+SARS-CoV-2+spike+glycoproteins+for+pseudotyping+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Virol%22%5BJournal%5D)">Improved SARS-CoV-2 spike glycoproteins for pseudotyping lentiviral vectors.</a> Front Virol. 1, 793320(2021).</li>
<li>Lippi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosafety+measures+for+preventing+infection+from+COVID-19+in+clinical+laboratories%3AIFCC+Taskforce+Recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Biosafety measures for preventing infection from COVID-19 in clinical laboratories:IFCC Taskforce Recommendations.</a> Clin Chem Lab Med. 58 (7), 1053-1062 (2020).</li>
<li>Cruz-Cardenas, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pseudovirus-based+platform+to+measure+neutralizing+antibodies+in+Mexico+using+SARS-CoV-2+as+proof-of-concept%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A pseudovirus-based platform to measure neutralizing antibodies in Mexico using SARS-CoV-2 as proof-of-concept.</a> Sci Rep. 12 (1), 17966(2022).</li>
<li>Rizatdinova, S. N., Ershova, A. E., Astrakhantseva, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudotyped+viruses%3A+A+useful+platform+for+pre-clinical+studies+conducted+in+a+BSL-2+laboratory+setting%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Pseudotyped viruses: A useful platform for pre-clinical studies conducted in a BSL-2 laboratory setting.</a> Biomolecules. 15 (1), 135(2025).</li>
<li>Millet, J. K., Whittaker, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+leukemia+virus+%28MLV%29-based+coronavirus+spike-pseudotyped+particle+production+and+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Murine leukemia virus (MLV)-based coronavirus spike-pseudotyped particle production and infection.</a> Bio Protoc. 6 (23), e2035(2016).</li>
<li>Millet, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+pseudotyped+particles+to+study+highly+pathogenic+coronaviruses+in+a+biosafety+level+2+setting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of pseudotyped particles to study highly pathogenic coronaviruses in a biosafety level 2 setting.</a> J Vis Exp. (145), e59010(2019).</li>
<li>Eichler, M., Aksi, E., Pfeilschifter, J., Imre, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+pseudotyped+virus+particles+to+monitor+Ebola+virus+and+SARS-CoV-2+viral+entry+in+human+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Application of pseudotyped virus particles to monitor Ebola virus and SARS-CoV-2 viral entry in human cell lines.</a> STAR Protoc. 2 (4), 100818(2021).</li>
<li>Thomas, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+pseudo-typed+virus+particle+based+method+to+determine+the+efficacy+of+virucidal+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Development of a pseudo-typed virus particle based method to determine the efficacy of virucidal agents.</a> Sci Rep. 14 (1), 2174(2024).</li>
<li>Yang, S., Zhou, X., Li, R., Fu, X., Sun, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+PEI-based+transfection+method+for+transient+transfection+and+lentiviral+production%3APEI-based+transfection+for+lentiviral+production%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimized PEI-based transfection method for transient transfection and lentiviral production:PEI-based transfection for lentiviral production.</a> Curr Protoc Chem Biol. 9 (3), 147-157 (2017).</li>
<li>Gee, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+nanovesicles+for+packaging+of+CRISPR-Cas9+protein+and+sgRNA+to+induce+therapeutic+exon+skipping%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Extracellular nanovesicles for packaging of CRISPR-Cas9 protein and sgRNA to induce therapeutic exon skipping.</a> Nat Commun. 11 (1), 1334(2020).</li>
<li>Ferrara, F., Temperton, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudotype+neutralization+assays%3AFrom+laboratory+bench+to+data+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">Pseudotype neutralization assays:From laboratory bench to data analysis.</a> Methods Protoc. 1 (1), 8(2018).</li>
<li>Soneoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transient+three-plasmid+expression+system+for+the+production+of+high+titer+retroviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A transient three-plasmid expression system for the production of high titer retroviral vectors.</a> Nucleic Acids Res. 23 (4), 628-633 (1995).</li>
<li>Chen, Y., Miller, W. M., Aiyar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transduction+efficiency+of+pantropic+retroviral+vectors+is+controlled+by+the+envelope+plasmid+to+vector+plasmid+ratio%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Prog%22%5BJournal%5D)">Transduction efficiency of pantropic retroviral vectors is controlled by the envelope plasmid to vector plasmid ratio.</a> Biotechnol Prog. 21 (1), 274-282 (2005).</li>
<li>Zhang, J. H., Chung, T. D., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+statistical+parameter+for+use+in+evaluation+and+validation+of+high+throughput+screening+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays.</a> J Biomol Screen. 4 (2), 67-73 (1999).</li>
<li>Wool-Lewis, R. J., Bates, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Ebola+virus+entry+by+using+pseudotyped+viruses%3AIdentification+of+receptor-deficient+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of Ebola virus entry by using pseudotyped viruses:Identification of receptor-deficient cell lines.</a> J Virol. 72 (4), 3155-3160 (1998).</li>
<li>Giroglou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retroviral+vectors+pseudotyped+with+severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus+S+protein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Retroviral vectors pseudotyped with severe acute respiratory syndrome coronavirus S protein.</a> J Virol. 78 (17), 9007-9015 (2004).</li>
<li>Ma, M., Kersten, D. B., Kamrud, K. I., Wool-Lewis, R. J., Schmaljohn, C., González-Scarano, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+leukemia+virus+pseudotypes+of+La+Crosse+and+Hantaan+bunyaviruses%3AA+system+for+analysis+of+cell+tropism%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Res%22%5BJournal%5D)">Murine leukemia virus pseudotypes of La Crosse and Hantaan bunyaviruses:A system for analysis of cell tropism.</a> Virus Res. 64 (1), 23-32 (1999).</li>
<li>Bruett, L., Clements, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+murine+leukemia+virus+vectors+pseudotyped+with+the+visna+virus+envelope+show+expanded+visna+virus+cell+tropism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Functional murine leukemia virus vectors pseudotyped with the visna virus envelope show expanded visna virus cell tropism.</a> J Virol. 75 (23), 11464-11473 (2001).</li>
<li>Radoshitzky, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transferrin+receptor+1+is+a+cellular+receptor+for+New+World+haemorrhagic+fever+arenaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transferrin receptor 1 is a cellular receptor for New World haemorrhagic fever arenaviruses.</a> Nature. 446 (7131), 92-96 (2007).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+retroviral+pseudotypes+with+influenza+hemagglutinins+from+H1%2C+H3%2C+and+H5+subtypes+for+sensitive+and+specific+detection+of+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishment of retroviral pseudotypes with influenza hemagglutinins from H1, H3, and H5 subtypes for sensitive and specific detection of neutralizing antibodies.</a> J Virol Methods. 153 (2), 111-119 (2008).</li>
<li>Bulcha, J. T., Wang, Y., Ma, H., Tai, P. W. L., Gao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vector+platforms+within+the+gene+therapy+landscape%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Viral vector platforms within the gene therapy landscape.</a> Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 53(2021).</li>
<li>Sholukh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+cell-based+and+surrogate+SARS-CoV-2+neutralization+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of cell-based and surrogate SARS-CoV-2 neutralization assays.</a> J Clin Microbiol. 59 (10), e0052721(2021).</li>
<li>Xiang, Q., Li, L., Wu, J., Tian, M., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+pseudovirus+system+in+the+development+of+vaccine%2C+antiviral-drugs%2C+and+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Res%22%5BJournal%5D)">Application of pseudovirus system in the development of vaccine, antiviral-drugs, and neutralizing antibodies.</a> Microbiol Res. 258, 126993(2022).</li>
<li>Johnson, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+pseudotyping+conditions+for+the+SARS-CoV-2+spike+glycoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Optimized pseudotyping conditions for the SARS-CoV-2 spike glycoprotein.</a> J Virol. 94 (21), e01062-e01120 (2020).</li>
<li>Xiaojie, S., Yu, L., Lei, Y., Guang, Y., Min, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralizing+antibodies+targeting+SARS-CoV-2+spike+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Neutralizing antibodies targeting SARS-CoV-2 spike protein.</a> Stem Cell Res. 50, 102125(2021).</li>
<li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+design+of+picomolar+SARS-CoV-2+miniprotein+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">De novo design of picomolar SARS-CoV-2 miniprotein inhibitors.</a> Science. 370 (6515), 426-431 (2020).</li>
<li>Monteil, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+SARS-CoV-2+infections+in+engineered+human+tissues+using+clinical-grade+soluble+human+ACE2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Inhibition of SARS-CoV-2 infections in engineered human tissues using clinical-grade soluble human ACE2.</a> Cell. 181 (4), 905-913.e7 (2020).</li>
<li>Ahmad, I., Pawara, R., Surana, S., Patel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+repurposed+ACE2+inhibitors%3ASARS-CoV-2+entry+blockers+of+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22Top+Curr+Chem%22%5BJournal%5D)">The repurposed ACE2 inhibitors:SARS-CoV-2 entry blockers of COVID-19.</a> Top Curr Chem. 379 (6), 40(2021).</li>
<li>Alqaaf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+natural+products+as+potential+inhibitors+of+SARS-CoV-2+spike+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Discovering natural products as potential inhibitors of SARS-CoV-2 spike proteins.</a> Sci Rep. 15 (1), 200(2025).</li>
<li>Chan, C. C. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+small-molecule+inhibitors+of+SARS-CoV-2+by+chemical+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharm+Sin+B%22%5BJournal%5D)">Identification of novel small-molecule inhibitors of SARS-CoV-2 by chemical genetics.</a> Acta Pharm Sin B. 14 (9), 4028-4044 (2024).</li>
<li>Lei, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralization+of+SARS-CoV-2+spike+pseudotyped+virus+by+recombinant+ACE2-Ig%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Neutralization of SARS-CoV-2 spike pseudotyped virus by recombinant ACE2-Ig.</a> Nat Commun. 11 (1), 2070(2020).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-influenza+virus+drug%2C+arbidol+is+an+efficient+inhibitor+of+SARS-CoV-2+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discov%22%5BJournal%5D)">The anti-influenza virus drug, arbidol is an efficient inhibitor of SARS-CoV-2 in vitro.</a> Cell Discov. 6 (1), 28(2020).</li>
<li>Kang, Y., Shi, Y., Xu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arbidol%3AThe+current+demand%2C+strategies%2C+and+antiviral+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Immun+Inflamm+Dis%22%5BJournal%5D)">Arbidol:The current demand, strategies, and antiviral mechanisms.</a> Immun Inflamm Dis. 11 (8), e984(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,2 & micro ; m Filtres à seringues à faible liaison aux protéines &nbsp ;</td><td>Thermo Scientific</td><td>720-1320</td><td>Filtres à seringue (0,2 & mu ; m,13 mm, PES, stérile)</td></tr><tr><td>Solution 1X à 0,25 % de trypsine-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Trypsine-EDTA (0,25 %), phénol rouge</td></tr><tr><td>0,45 & micro ; m Unités de filtration à bouchon de bouteille PVDF &nbsp ;</td><td>Avantor</td><td>514-1045</td><td>Systèmes de filtration sous vide à surface de bouteille (PVDF, 250 ml, 50 mm, 0,45 & micro ; m)</td></tr><tr><td>Tubes microcentrifuges stériles de 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30123611</td><td>Safe-Lock & nbsp ; Tubes</td></tr><tr><td>Solution 100 X de pénicilline Streptomycine</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td>Solution de pénicilline-streptomycine, 100x</td></tr><tr><td>5 X tampon de lyse de l’analyse luciférase &nbsp ;</td><td>Promega</td><td>E2650</td><td>Partie du système d’analyse luciférase Promega Bright-Glo</td></tr><tr><td>Tubes coniques stériles de 50 mL</td><td>Corning&nbsp ;</td><td>352070</td><td>Tube centrifugeuse PP haute clarté de 50 mL, fond conique, stérile</td></tr><tr><td>Plaques de culture tissulaire à 6 puits</td><td>Thermo Scientific</td><td>140675</td><td>Multiplats traités en culture cellulaire</td></tr><tr><td>Plaques de culture tissulaire à 96 puits</td><td>Thermo Scientific</td><td>168055</td><td>Nunc&trade ; Microwell & commerce ; 96-Puits, microplaque à fond plat traitée par Nunclon Delta</td></tr><tr><td>Chlorhydrate d’arbidol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML0860</td><td></td></tr><tr><td>Polyéthylénine ramifiée, 25 kDa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>408727</td><td></td></tr><tr><td>Microscope laser confocal &nbsp ; (FV 3000)</td><td>Olympus Co.</td><td>SKU : FV3000</td><td></td></tr><tr><td>Diméthylsulfoxyde (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (Eagle Medium modifié de Dulbecco) avec : glucose élevé, L-glutamine, rouge de phénol, pyruvate de sodium)</td><td>Gibco</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Gibco</td><td>26140-079</td><td>Inactivé par la chaleur (56 degrés ; C, 30 min)</td></tr><tr><td>Cellules dérivées de HEK293T (Lignée cellulaire Lenti-X 293T)</td><td>Biographie de Takara</td><td>632180</td><td>Sous-clone hautement transfectable de la lignée cellulaire HEK293 et soutient des niveaux élevés d’expression protéique virale</td></tr><tr><td>Tampon HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Cellules très susceptibles à l’infection (293T-ACE2. TMPRSS2 (mCherry) Ligne cellulaire)</td><td>Ressources BEI</td><td>NR-55293</td><td>HEK293T lignée cellulaire modifiée pour exprimer de manière stable ACE2 et TMPRSS2</td></tr><tr><td>Acide chlorhydrique&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Microscope à contraste de phase inversé &nbsp ;</td><td>Olympus Co.&nbsp ;</td><td>SKU : 2404040005</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9516-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Substrat de luciférase</td><td>Promega</td><td>E2650</td><td>partie du système d’analyse luciférase à glo clair</td></tr><tr><td>Lecteur de microplaques avec détection de luminescence</td><td>Agilent BioTek</td><td>BTH1MG</td><td></td></tr><tr><td>MTT [bromure 3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltézolium]</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2128</td><td></td></tr><tr><td>Plaques blanches opaques à 96 puits</td><td>Corning</td><td>3917</td><td>Microplaques en polystyrène plat à fond plat solide à 96 puits traitées TC</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM999</td><td></td></tr><tr><td>plasmide pcDNA3-EGFP</td><td>Addgene</td><td>13031</td><td>pcDNA3-EGFP était un cadeau de Doug Golenbock (plasmide Addgene #13031 ; http://n2t.net/addgene:13031 ; RRID : Addgene_13031)</td></tr><tr><td>plasmide pCMV-MLVgagpol</td><td>-</td><td>-</td><td>Généreusement offert par le Dr Gary Whittaker & nbsp ;</td></tr><tr><td>Solution saline tamponnée phosphate sans Ca2+ ni Mg2+ (PBS)</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td>Solution physiologique tamponnée phosphate, 1X sans calcium ni magnésium</td></tr><tr><td>Système de plasmides Promega PureYield Maxiprep</td><td>Promega</td><td>A2393</td><td></td></tr><tr><td>Plasmide pTG-Luc</td><td>-</td><td>-</td><td>Généreusement offert par le Dr Gary Whittaker & nbsp ;</td></tr><tr><td>Plasmide pUNO1-SARS-CoV-2 Spike (Wuhan)</td><td>Invivogen</td><td>P1-Pointe</td><td></td></tr><tr><td>Plasmide pVSV-G</td><td>Addgene</td><td>138479</td><td>pVSV-G était un cadeau d’Akitsu Hotta (plasmide d’Addgene # 138479 ; http://n2t.net/addgene:138479 ; RRID : Addgene_138479)</td></tr><tr><td>Protéine de fusion ACE2-Fc humaine recombinante</td><td>Invivogen</td><td>FC-HaCE2</td><td></td></tr><tr><td>Milieu sérique réduit (Opti-MEM)</td><td>Gibco</td><td>31985-070</td><td>Médium sérique réduit Opti-MEM</td></tr></tbody></table>

procédures pour l’identification des inhibiteurs d’entrée du sars-cov-2 en tant qu’antiviraux potentiels à l’aide de pseudovirus à base de mlv

Procedures for the Identification of SARS-CoV-2 Entry Inhibitors as Potential Antivirals using MLV-Based Pseudoviruses

Procédures pour l’identification des inhibiteurs d’entrée du SARS-CoV-2 en tant qu’antiviraux potentiels à l’aide de pseudovirus à base de MLV

The SARS-CoV-2 virus is an emergent, zoonotic pathogen that has caused a huge burden of disease and mortality around the world since its emergence in ...

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Cette vidéo présente un test d’attachement viral pour le criblage de composés antiviraux. À l’aide du virus de l’hépatite C génétiquement modifié et de la luciférase, il évalue les effets inhibiteurs sur l’attachement viral, comme l’indique l’intensité lumineuse plus faible dans les puits cotraités par rapport aux puits traités avec le virus seul.

Un test d’attachement viral pour le criblage de composés antiviraux

Trois essais, y compris l'effet cytopathique (CPE) à base de test, essai dose-réponse et (TOA) test à temps de Addition ont été développés, optimisés, validés et utilisés pour identifier de nouveaux antiviraux contre le virus de la fièvre catarrhale (BTV), ainsi à déterminer le Mécanisme d'action-de-possible (MOA) pour antiviraux nouvellement identifiés.

Les tests pour l&#39;identification de nouveaux antiviraux contre la fièvre catarrhale Virus

Ici, nous présentons un protocole qui examine des étapes spécifiques de l’entrée virale afin d’identifier et d’évaluer de nouveaux agents antiviraux.

Early Viral entrée dosages pour l&#39;identification et l&#39;évaluation des composés antiviraux

Nous présentons ici un protocole visant à générer des particules pseudo dans un cadre de BSL-2 intégrant la protéine spike du syndrome respiratoire de virus hautement pathogènes Moyen-Orient et coronavirus du syndrome respiratoire aigu sévère. Ces particules pseudo contiennent un gène de rapporteur luciférase permettant la quantification de l’entrée du virus dans les cellules de l’hôte cible.

Production de pseudo particules pour étudier les coronavirus hautement pathogènes dans un cadre de niveau 2 de Biosafety

L'objectif du protocole est d'illustrer les différents essais relatifs à l'entrée virale qui peuvent être utilisés pour identifier les inhibiteurs de l'entrée virale candidat.

Utilisation des essais d'entrée virale et de l'analyse moléculaire de l'amarrage pour l'identification des candidats antiviraux contre le Coxsackievirus A16

Le protocole décrit ici décrit décrit une méthode rapide et efficace pour mesurer les anticorps neutralisants contre la protéine de pointe du SRAS-CoV-2 en évaluant la capacité des échantillons de sérum de convalescent à inhiber l’infection par un virus de la stomatite vésiculeuse marqué par une protéine fluorescente verte améliorée pseudotypée avec une glycoprotéine de pointe.

Détection des anticorps neutralisants du SRAS-CoV-2 à l’aide de l’imagerie fluorescente à haut débit de l’infection à pseudovirus

Ce protocole décrit la dynamique des infections virales à l’aide du (r)SARS-CoV-2 recombinant exprimant la luciférase et la fluorescence et d’un système d’imagerie in vivo (IVIS) chez des souris transgéniques K18 hACE2 pour surmonter le besoin d’approches secondaires nécessaires pour étudier les infections par le SRAS-CoV-2 in vivo.

Imagerie vivante et quantification de l’infection virale chez des souris transgéniques K18 hACE2 à l’aide du SARS-CoV-2 recombinant exprimant le rapporteur

Nous fournissons un protocole qui peut généralement être appliqué à certains aptamères qui se lient uniquement aux virus infectieux et non aux virus qui ont été rendus non infectieux par une méthode de désinfection ou à tout autre virus similaire. Cela ouvre la possibilité de déterminer le statut d’infectiosité dans les tests portables et rapides.

Sélection in vitro d’aptamères pour différencier les virus infectieux des virus non infectieux

Les virus pseudotypés (PV) sont des virions défectueux de réplication qui sont utilisés pour étudier les interactions hôte-virus dans des conditions plus sûres que la manipulation de virus authentiques. Nous présentons ici un protocole détaillé qui montre comment les PV du SRAS-CoV-2 peuvent être utilisés pour tester la capacité de neutralisation du sérum des patients après la vaccination contre la COVID-19.

Virus pseudotypés en tant qu’outil moléculaire pour surveiller les réponses immunitaires humorales contre le SRAS-CoV-2 via un test de neutralisation

Ce protocole décrit l’application d’un nouveau pseudovirus hybride alphavirus-SARS-CoV-2 (Ha-CoV-2) comme plateforme pour la quantification rapide de l’infectiosité des variants du SARS-CoV-2 et de leur sensibilité aux anticorps neutralisants.

Application du pseudovirus Ha-CoV-2 pour la quantification rapide des variants du SRAS-CoV-2 et des anticorps neutralisants

Nous présentons un protocole in vitro optimisé pour produire des particules semblables au virus du SRAS-CoV-2 qui imitent étroitement le virus authentique. Cette approche permet d’étudier les mécanismes d’infection, d’assemblage et de sortie virales sans les contraintes de nécessiter un laboratoire de biosécurité de niveau 3.

Production d’un système de particules semblable au virus SARS-CoV-2 pour étudier les cycles de vie viraux in vitro

Découvrez une méthode sécurisée pour identifier les inhibiteurs d'entrée du SARS-CoV-2 en utilisant des pseudovirus basés sur le MLV. Ce protocole permet le criblage antiviral en laboratoire de confinement biologique de niveau 2.

Procédures pour l’identification des inhibiteurs d’entrée du SARS-CoV-2 en tant qu’antiviraux potentiels à l’aide de pseudovirus à base de MLV (Vidéo) | JoVE Journal

Procédures pour l’identification des inhibiteurs d’entrée du SARS-CoV-2 en tant qu’antiviraux potentiels à l’aide de pseudovirus à base de MLV

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