Name: Étude de la glycolyse dans la microglie primaire à l’aide d’un test de flux extracellulaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T12:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: Apprenez à mesurer la glycolyse dans la microglie primaire isolée du cortex cérébral de souris néonatales. Ce protocole utilise un analyseur de flux extracellulaire pour quantifier l'ECAR en temps réel et étudier les changements métaboliques lors de l'inflammation.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Prinz, M., Jung, S., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+biology%3A+One+century+of+evolving+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia biology: One century of evolving concepts.</a> Cell. 179, 292-311 (2019).</li>
<li>Tay, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+microglia+recovery+population+revealed+by+single-cell+RNAseq+following+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol.+Commun%22%5BJournal%5D)">Unique microglia recovery population revealed by single-cell RNAseq following neurodegeneration.</a> Acta Neuropathol. Commun. 6, 87(2018).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis+and+oxidative+phosphorylation+play+critical+roles+in+natural+killer+cell+receptor-mediated+natural+killer+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Glycolysis and oxidative phosphorylation play critical roles in natural killer cell receptor-mediated natural killer cell functions.</a> Front. Immunol. 11, 202(2020).</li>
<li>Soto-Heredero, G., Gómezde Las Heras, M. M., Gabandé-Rodríguez, E., Oller, J., Mittelbrunn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis-a+key+player+in+the+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Glycolysis-a key player in the inflammatory response.</a> FEBS J. 287, 3350-3369 (2020).</li>
<li>O'Neill, L. A., Kishton, R. J., Rathmell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+immunometabolism+for+immunologists%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A guide to immunometabolism for immunologists.</a> Nat. Rev. Immunol. 16, 553-565 (2016).</li>
<li>Bernier, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+metabolic+flexibility+supports+immune+surveillance+of+the+brain+parenchyma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Microglial metabolic flexibility supports immune surveillance of the brain parenchyma.</a> Nat. Commun. 11, 1559(2020).</li>
<li>Bernier, L. P., York, E. M., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunometabolism+in+the+brain%3A+How+metabolism+shapes+microglial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Immunometabolism in the brain: How metabolism shapes microglial function.</a> Trends Neurosci. 43, 854-869 (2020).</li>
<li>Geric, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming+during+microglia+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunometabolism%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming during microglia activation.</a> Immunometabolism. 1, e190002(2019).</li>
<li>Yoo, I., Ahn, I., Lee, J., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+flux+assay+%28Seahorse+assay%29%3A+Diverse+applications+in+metabolic+research+across+biological+disciplines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cells%22%5BJournal%5D)">Extracellular flux assay (Seahorse assay): Diverse applications in metabolic research across biological disciplines.</a> Mol. Cells. 47, 100095(2024).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamine+metabolism+modulates+microglial+NLRP3+inflammasome+activity+through+mitophagy+in+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Glutamine metabolism modulates microglial NLRP3 inflammasome activity through mitophagy in Alzheimer’s disease.</a> J. Neuroinflammation. 21, 261(2024).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transporter+1+critically+controls+microglial+activation+through+facilitating+glycolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Glucose transporter 1 critically controls microglial activation through facilitating glycolysis.</a> Mol. Neurodegener. 14, 2(2019).</li>
<li>Lu, J., Zhou, W., Dou, F., Wang, C., Yu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+sustains+microglial+metabolic+reprogramming+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">TRPV1 sustains microglial metabolic reprogramming in Alzheimer's disease.</a> EMBO Rep. 22, e52013(2021).</li>
<li>Orihuela, R., McPherson, C. A., Harry, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+M1%2FM2+polarization+and+metabolic+states%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Microglial M1/M2 polarization and metabolic states.</a> Br. J. Pharmacol. 173, 649-665 (2016).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+glycolytic+reprogramming+controls+microglial+inflammatory+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Early glycolytic reprogramming controls microglial inflammatory activation.</a> J. Neuroinflammation. 18, 129(2021).</li>
<li>Kaushik, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+glycolytic+metabolism+supports+transmigration+of+brain-infiltrating+macrophages+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Enhanced glycolytic metabolism supports transmigration of brain-infiltrating macrophages in multiple sclerosis.</a> J. Clin. Invest. 129, 3277-3292 (2019).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-mediated+metabolic+reprogramming+shapes+distinct+microglia+functions+in+response+to+lipopolysaccharide+and%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">mTOR-mediated metabolic reprogramming shapes distinct microglia functions in response to lipopolysaccharide and.</a> Glia. 68, 1031-1045 (2020).</li>
<li>Montilla, A., Zabala, A., Matute, C., Domercq, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+metabolic+characterization+of+microglia+culture+in+a+defined+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional and metabolic characterization of microglia culture in a defined medium.</a> Front. Cell. Neurosci. 14, 22(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Solution HEPES 1M</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>1X HBSS</td><td>Gibco & nbsp ;</td><td>&nbsp ; 14175-079</td><td></td></tr><tr><td>2,5 % de trypsine</td><td>Gibco & nbsp ;</td><td>&nbsp ; 15090-046</td><td></td></tr><tr><td>2DG</td><td>Millipore sigma & nbsp ;</td><td>D6134</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotique/Antimycotique & nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>D & ndash ; (+)Glucose, anhydre & nbsp ;</td><td>Thermoscientifique & nbsp ; &nbsp ;</td><td>A16828.36</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>&nbsp ; 11965-092</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Millipore sigma & nbsp ;</td><td>11284932001- Roche</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Fisherbrand</td><td>FB12999102</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco & nbsp ;</td><td>&nbsp ; 35050-061</td><td></td></tr><tr><td>L-Lactate Kit</td><td>Abcam</td><td>AB65330</td><td></td></tr><tr><td>LPS&nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&nbsp ; L4391</td><td></td></tr><tr><td>MEM, NEAA&NBSP ;</td><td>Gibco & nbsp ;</td><td>&nbsp ; 11140-050</td><td></td></tr><tr><td>Oligomycine A</td><td>Millipore sigma & nbsp ;</td><td>495455</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline/Streptomycine</td><td>Gibco & nbsp ;</td><td>&nbsp ; 15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Bandes indicatrices de pH</td><td>Fisherbrand</td><td>13-640-516</td><td></td></tr><tr><td>Hippocampe XFe24</td><td>Agilent Technologies</td><td>N/A</td><td>Nom générique : Analyseur de flux extracellulaire</td></tr><tr><td>Microplaques de culture cellulaire Seahorse 24 V7 PS</td><td>Hippocampe Agilent</td><td>100777-004</td><td>Nom générique : Microplaques de culture cellulaire à flux extracellulaire</td></tr><tr><td>Essai sur hippocampe XF Tampon calibrant (pH 7,4)</td><td>Hippocampe Agilent & nbsp ;</td><td>&nbsp ; 100840-000</td><td>Nom générique : Tampon calibrant de flux extracellulaire</td></tr><tr><td>Média DMEM XF du test hippocampe (pH 7,4)</td><td>Hippocampe Agilent & nbsp ; &nbsp ;</td><td>&nbsp ; 103575-100</td><td>Nom générique : Média extracellulaire de test de flux</td></tr><tr><td>Kit de test de flux extracellulaire hippocampe</td><td>Hippocampe Agilent & nbsp ;</td><td>102342-100</td><td>Nom générique : Plaque de calibration de flux extracellulaire &nbsp ;</td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium &nbsp ;</td><td>Gibco & nbsp ;</td><td>&nbsp ; 11360-070</td><td></td></tr></tbody></table>

Étude de la glycolyse dans la microglie primaire à l’aide d’un test de flux extracellulaire

Investigating Glycolysis in Primary Microglia Using Extracellular Flux Assay

Microglia, the resident macrophage cells of the central nervous system, dynamically alter their metabolic programs in response to physiological and ...

investigating-glycolysis-primary-microglia-using-extracellular-flux

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Isoler les microglies primaire à partir de l'hétérogénéité cellulaire du cerveau est essentielle pour enquêter sur leur rôle dans les deux conditions physiologiques et pathologiques. Ce protocole décrit une isolation mécanique et technique mixte de culture cellulaire qui fournit un rendement élevé et de haute pureté, viables primaires pour les cellules...

Isolement primaire microglies de cultures mixtes de cellules gliales de tissus de cerveau de rat nouveau-né

Ce protocole fournit une approche biochimique pour mesurer le taux d’acidification extracellulaire (ECAR) et le taux de consommation d’oxygène (OCR) des cellules leucémiques primaires avec le dosage du flux extracellulaire. L’évaluation du profil métabolique de ces cellules permet de caractériser leurs demandes, ce qui conduit à une thérapie personnalisée.

Dosage du flux extracellulaire : une méthode de mesure du profil métabolique des cellules

La reprogrammation métabolique est une caractéristique et une condition préalable à la polarisation des macrophages M1 et M2. Ce manuscrit décrit un test pour la mesure des paramètres fondamentaux de la glycolyse et de la fonction mitochondriale dans les macrophages dérivés de la moelle osseuse de souris. Cet outil peut être utilisé pour étudier comment des facteurs particuliers affectent le métabolisme et le phénotype du macrophage.

Caractérisation métabolique des polarisée M1 et M2 macrophages dérivées de moelle osseuse Utilisation en temps réel Analyse extracellulaire Flux

La glycolyse est un marqueur métabolique déterminant dans plusieurs systèmes biologiques. La surveillance de la glycolyse par la mesure du flux extracellulaire de H+ est courante, mais nécessite une correction quantitative et sans ambiguïté. Ici, nous montrons comment recueillir et corriger des données de flux extracellulaires pour distinguer les sources respiratoires et glycolytiques d’acidification extracellulaire.

Mesure et analyse de la production extracellulaire acide pour Déterminer glycolytique Taux

L’étude du métabolisme devient de plus en plus pertinente pour la recherche immunologique. Ici, nous présentons une méthode optimisée pour mesurer la glycolyse et la respiration mitochondriale dans les splénocytes de souris et les lymphocytes T et B.

Un protocole optimisé pour l&#39;analyse glycolyse et mitochondrial Respiration dans Lymphocytes

Dans cet article, nous décrivons une méthode pour mesurer la glycolyse et la respiration mitochondriale dans les cellules humaines primaires de tueur naturel (NK) isolées du sang périphérique, au repos ou après l’activation induite par l’IL15. Le protocole décrit pourrait être facilement étendu aux cellules NK humaines primaires activées par d’autres cytokines ou stimuli solubles.

Analyse du métabolisme des cellules tueuses naturelles humaines

Nous présentons ici deux protocoles pour quantifier l’engloutissement microglial des synapses vGLUT1-positives et des synaptosomes bruts marqués en rouge pHRodo à l’aide de la cytométrie en flux.

Quantification de l’engloutissement microglial du matériel synaptique à l’aide de la cytométrie en flux

L’abus d’alcool altère l’immunité des macrophages alvéolaires (MA) en raison de la suppression de la respiration mitochondriale et de la bioénergétique. Nous avons récemment démontré que l’exposition à l’éthanol (EtOH) augmente la dépendance à la glutamine pour la respiration mitochondriale dans les MA. Dans le présent document, des méthodes sont fournies pour déterminer l’utilisation de la glutamine pour la respiration mitochondriale dans les MA traités à l’EtOH à l’aide d’un bioanalyseur de...

Évaluation de la glutamine comme source de carburant pour les macrophages alvéolaires exposés à l’éthanol chronique à l’aide d’un bioanalyseur de flux extracellulaire

Ici, nous décrivons en détail les méthodes d’extraction des macrophages de la moelle osseuse, de la rate et du cœur infarctus, puis d’évaluation du flux métabolique dans les cellules vivantes.

Analyse du flux métabolique ex vivo dans les macrophages spléniques et cardiaques et les monocytes de la moelle osseuse

Un protocole a été mis au point pour la préparation de mitochondries purifiées à partir de cellules microgliales, l’isolement de protéines mitochondriales pour la libération de N-glycanes et la détection rapide de glycanes mitochondriaux subcellulaires à l’aide d’une désorption laser assistée par une matrice infrarouge couplée à une spectrométrie de masse précise à haute résolution.

Préparation mitochondriale à partir de microglie pour l’analyse des glycanes

Apprenez à mesurer la glycolyse dans la microglie primaire isolée du cortex cérébral de souris néonatales. Ce protocole utilise un analyseur de flux extracellulaire pour quantifier l'ECAR en temps réel et étudier les changements métaboliques lors de l'inflammation.

Étude de la glycolyse dans la microglie primaire à l’aide d’un test de flux extracellulaire

Explorer plus de vidéos