Séparation HPLC automatisée utilisant LC-mate : un autoéchantillonneur répétitif intégré et un collecteur de fractions pour la purification à l’échelle microscopique

Nos recherches portent sur la conception d’un instrument qui s’intègre directement aux installations HPLC pour automatiser toutes ces étapes manuelles répétitives. L’injection manuelle d’échantillons et la collecte de fractions sont très fastidieuses. LC-Mate propose une solution automatisée multiplateforme pour la purification des échantillons HPLC.

Pour commencer, vérifiez les connexions de plomberie du solvant entre le système HPLC, le LC-Mate et la colonne chromatographique afin d’assurer des chemins d’écoulement corrects. Pour vérifier la connexion de la ligne de transmission du signal entre le détecteur UV et le LC-Mate, connectez le fil noir à la borne rouge et le fil blanc à la borne noire afin d’aligner la polarité du signal analogique sorti. Observez l’affichage LC-Mate pour confirmer que la forme d’onde du signal analogique apparaît.

Si aucune forme d’onde n’est visible, inversez les connexions des fils en reliant le fil noir à la borne noire et le fil blanc à la borne rouge. Pour vérifier la connexion de déclenchement entre le détecteur ultraviolet et le LC-Mate, branchez l’extrémité unique du câble de données dans la sortie du détecteur ultraviolet. Connectez les fils noir et blanc de l’autre extrémité du câble aux bornes de détente noire et bleue du LC-Mate respectivement. Serrez les bornes pour assurer une connexion de détente ferme.

Ensuite, assurez-vous du bon démarrage du système HPLC et du LC-Mate. Cliquez sur l’icône LC Mate à l’interface pour exécuter automatiquement le programme d’auto-test système et initialiser les modules matériels clés. Attendez le brève signal d’invitation et la disparition du message d’auto-test pour confirmer que l’initialisation est terminée.

Configurez les conditions de séparation du HPLC et commencez l’élution pour équilibrer la colonne. Dans l’interface de test, saisissez le volume d’injection, le temps d’élution et les temps de répétition, puis appuyez sur l’icône Start pour lancer l’auto-échantillonneur, le collecteur de fractions et le fonctionnement HPLC. Identifier des conditions de séparation réalisables, notamment la résolution, la durée de fonctionnement, le temps de rétention, le volume d’injection et la longueur d’onde ultraviolette.

Sélectionnez le module de fonction Seuil sur le côté gauche de l’interface pour ouvrir l’écran de paramètres. Saisissez le volume d’injection, les temps de répétition, le seuil et le temps d’élution, puis appuyez sur Start pour commencer l’opération automatisée. Surveillez les indicateurs de statut.

Observez l’injection en cours pour confirmer l’introduction de l’échantillon. Vérifiez l’indicateur de séparation en cours pour vérifier que la séparation chromatographique a lieu. Notez l’indicateur de vidage de la seringue pour identifier quand la seringue purge le liquide résiduel.

Pour effectuer la collecte des fractions basée sur le temps, sélectionnez le module de collecte temporelle à gauche de l’interface pour ouvrir le menu des paramètres. Volume d’injection d’entrée, temps de répétition, temps d’élution et temps de collecte requis. Appuyez sur le bouton Start pour lancer la séquence automatisée répétée.

Ensuite, sélectionnez le module de fonction Collecter Tout sur le côté gauche de l’interface. Fixez une valeur seuil de collecte pour collecter tous les pics chromatographiques séparément. Pour le nettoyage de la canalisation, insérez la conduite d’injection de l’auto-échantillonneur dans une petite bouteille contenant un solvant propre.

Sélectionnez le module Nettoyage à gauche de l’interface pour ouvrir le menu des paramètres. Ensuite, réglez le volume d’injection entre zéro et 1000, et les temps de répétition pour le nettoyage du pipeline d’injecteur. Cliquez sur Nettoyage ci-dessous Nettoyage terminé pour commencer le nettoyage de la canalisation par injecteur.

Surveillez le nombre de cycles pour suivre les cycles de lavage terminés. Fixez l’heure de nettoyage pour le nettoyage du pipeline de collecte. Cliquez sur Nettoyage sous Pipeline actuel pour commencer le nettoyage du pipeline de collecte.

Surveillez l’affichage actuel du pipeline pour confirmer le nettoyage séquentiel du pipeline 0 au pipeline 10. Activez l’enregistrement automatique pour permettre au système de sauvegarder les chromatogrammes après chaque cycle d’élution. Sinon, cliquez sur le bouton Enregistrer après l’élution pour sauvegarder manuellement les données.

Après avoir saisi les métadonnées dans la boîte de dialogue, choisissez l’emplacement de stockage depuis le stockage local, une carte SD ou un bus série universel externe. La séparation semi-préparative du HPLC avec LC-Mate permettait une injection continue et stable d’échantillons et une collecte de fractions lors de la purification du 2"O-galloyl-hyperoside. Les impuretés mineures ont été efficacement éliminées pour obtenir un hyperoside purifié de 2"O-galloyl à l’aide du système LC-Mate.

L’injection continue et stable d’échantillons ainsi que la collecte de fractions ont également été réalisées avec succès lors de la purification de la phloridzine et de la trilobate. Cela démontre que le système LC-Mate améliore significativement l’efficacité opérationnelle en réduisant considérablement les interventions manuelles. L’écart type relatif de la zone maximale complète de l’injection en anneau était de 0,813 %, ce qui indique une excellente stabilité et reproductibilité des injections de LC-Mate.

Ce système facilite la purification automatisée respective et la collecte précise des fractions pour des flux de travail HPLC à grande échelle et efficaces. La variante correcte du signal, la sélection correcte des modes et le réglage des paramètres sont essentiels pour une application réussie de l’instrument LC-Mate. Nous prévoyons d’augmenter la capacité des canaux et d’intégrer de nouveaux détecteurs pour une meilleure compatibilité multiplateforme.