Name: Un protocole pour la récolte de la suspension unicellulaire sur les cornées de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T12:33:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: Apprenez à isoler des suspensions unicellulaires de haute qualité à partir de cornées de souris intactes. Cette méthode combine dissection précise et digestion enzymatique séquentielle pour obtenir des cellules viables avec une intégrité ARN excellente.

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<ol><li>Eghrari, A. O., Riazuddin, S. A., Gottsch, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+the+cornea%3Astructure%2C+function%2C+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Overview of the cornea:structure, function, and development.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 134, 7-23 (2015).</li>
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<li>Collin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+cell+atlas+of+human+cornea+that+defines+its+development%2C+limbal+progenitor+cells+and+their+interactions+with+the+immune+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">A single cell atlas of human cornea that defines its development, limbal progenitor cells and their interactions with the immune cells.</a> Ocul Surf. 21, 279-298 (2021).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+method+for+achieving+a+single-cell+suspension+from+mouse+corneas%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Optimization of method for achieving a single-cell suspension from mouse corneas.</a> Exp Eye Res. 233, 109544(2023).</li>
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<li>Topouzi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+isolation+and+3D+culture+of+dermal+papilla+cells+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Methods for the isolation and 3D culture of dermal papilla cells from human hair follicles.</a> Exp Dermatol. 26 (6), 491-496 (2017).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+amniotic+membrane+de-epithelialization+method+on+its+biological+properties+and+ability+to+promote+limbal+epithelial+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of amniotic membrane de-epithelialization method on its biological properties and ability to promote limbal epithelial cell culture.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (4), 3072-3081 (2013).</li>
<li>Hewett, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+endothelial+cells+from+micro-+and+macro-vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human endothelial cells from micro- and macro-vessels.</a> Methods Mol Biol. 1430, 61-76 (2016).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Existence+of+small+slow-cycling+Langerhans+cells+in+the+limbal+basal+epithelium+that+express+ABCG2%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Existence of small slow-cycling Langerhans cells in the limbal basal epithelium that express ABCG2.</a> Exp Eye Res. 84 (4), 626-634 (2007).</li>
<li>Song, Z., Tsai, C. H., Mei, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+methods+to+isolate+mouse+limbal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of different methods to isolate mouse limbal epithelial cells.</a> Exp Eye Res. 212, 108767(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 594 anti-lapin pour l’âne</td><td>Abcam</td><td>ab150064</td><td></td></tr><tr><td>Antikératine</td><td>Abcam</td><td>ab230175</td><td></td></tr><tr><td>Anti-pancytokératine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AE1/AE3, Alexa FluorTM 488</td><td></td></tr><tr><td>Stérilisateur d’autoclave</td><td>An Shen</td><td>LDZH-100KBS</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td></td></tr><tr><td>Filtre cellulaire</td><td>NEST</td><td>258369</td><td>40 & mu ; m</td></tr><tr><td>Machine centrifuge</td><td>Eppendorf AG</td><td>22331 Hambourg</td><td></td></tr><tr><td>Collagénase A</td><td>Roche</td><td>10103578001</td><td></td></tr><tr><td>Microscope confocal</td><td>&nbsp ; Oberkochen</td><td>Zeiss LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de comptage</td><td>MARIENFELD</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>Tube centrifuge</td><td>NEST</td><td>620611</td><td>2 mL, 50 mL</td></tr><tr><td>Couverture</td><td>MARIENFELD</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Solarbio</td><td>C0065</td><td></td></tr><tr><td>Microscope disséquant</td><td>Carl ZEISS</td><td>VISU150</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12&nbsp ; Médias</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Solarbio</td><td>D8371</td><td></td></tr><tr><td>Fœtal&nbsp ; bovin&nbsp ; Sérum</td><td>Gibco</td><td>16140071</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Solarbio</td><td>IH0100</td><td></td></tr><tr><td>ITS</td><td>Gibco</td><td>23337619</td><td></td></tr><tr><td>Facteur de croissance épidermique de la souris</td><td>Invitrogen</td><td>PMG8041</td><td></td></tr><tr><td>chirurgie ophtalmique &nbsp ; Pinces</td><td>Dumot</td><td>0208-5-PO</td><td></td></tr><tr><td>ciseaux chirurgicaux ophtalmiques</td><td>FST</td><td>15021-15</td><td></td></tr><tr><td>Four</td><td>AISITE</td><td>DH6000 II</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline & Strepttomycine</td><td>Gibco</td><td>15070063</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>Boîte de Petri</td><td>NEST</td><td>705201</td><td>60mm</td></tr><tr><td>Solution physiologice tamponnée au phosphate</td><td>Solarbio</td><td>P1010</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur thermostatique</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3111</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr><tr><td>Bleu de Trypan&nbsp ;</td><td>Solarbio</td><td>T8070</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine/EDTA&nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>R001100</td><td></td></tr><tr><td>Table ultra-nettoyante</td><td>You Qi</td><td>VS-840-2</td><td></td></tr><tr><td>4 % de paraformaldéhyde</td><td>Solarbio</td><td>P1110</td><td></td></tr></tbody></table>

un protocole pour la récolte de la suspension unicellulaire sur les cornées de souris

A Protocol for Harvesting Single-cell Suspension from Mouse Corneas

Un protocole pour la récolte de la suspension unicellulaire sur les cornées de souris

As the outermost layer of the eyeball, the cornea plays a critical role in maintaining ocular surface homeostasis and vision. Recent advances in ...

a-protocol-for-harvesting-single-cell-suspension-from-mouse-corneas

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Biology

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Cette vidéo décrit un simple gain de temps technique pour la dissociation des tissus automatisée en utilisant les dissociateur gentleMACS pour préparer une seule cellule de suspensions de splénocytes de souris.

Préparation des suspensions unicellulaires à partir de rate de souris avec le dissociateur gentleMACS

Dissocier les cellules de différents types de tissus spécifiques requiert des paramètres spécifiques pour aggitation tissus pour obtenir un volume élevé de viabilité, de cellules cultivables. Le Miltenyi gentleMACS dissociateur optimise cette tâche avec un simple, protocole pratique. Dans cette publication, l'utilisation de cet appareil sur le tissu nerual est expliqué.

Génération d&#39;une seule cellule suspensions de tissus de souris de neurones

Dans cette vidéo, nous allons démontrer comment isoler des cellules souches rétiniennes de l'épithélium ciliaire de l'oeil de la souris et les faire grandir dans la culture pour former clonale sphères de la rétine. Les sphères qui sont isolées possèdent les propriétés cardinales des cellules souches: l'auto-renouvellement et multipotentiality.

L&#39;isolement des cellules souches rétiniennes de l&#39;Oeil de la souris

Cette vidéo montre la culture de cellules gliales de Müller (MG) isolées de rétines de souris. Les rétines sont dissociées en une suspension unicellulaire à l’aide d’enzymes digestives. Les cellules sont ensuite cultivées dans un milieu avec un facteur de croissance qui favorise la prolifération des cellules MG et la mortalité des cellules neuronales. Les cellules neuronales mortes sont éliminées pendant le passage et les cellules MG sont cultivées pour une analyse plus approfondie.

Etablissement d’une culture de cellules gliales de Müller obtenue à partir de rétines de souris

Cette vidéo montre la procédure d’isolement des cellules ganglionnaires primaires de la rétine (CGR) murines à l’aide de la cytométrie en flux. Cette méthode permet l’étude future des CGR, dans le but de mieux comprendre le déclin majeur de l’acuité visuelle qui résulte de la perte des CGR fonctionnels dans les maladies neurodégénératives.

Isolement de cellules ganglionnaires rétiniennes murines à l’aide du tri cellulaire activé par fluorescence

La peau abrite un réseau complexe de cellules immunitaires. Nous décrivons une méthodologie efficace pour la digestion de la peau de souris, à partir de différentes parties du corps de l’animal, afin d’obtenir une suspension unicellulaire et d’analyser les différentes populations de leucocytes résidant dans la peau par cytométrie en flux.

Préparation de Suspensions de cellules uniques pour l&#39;analyse cytofluorimétrie de différentes régions de la peau de souris

Des millions de personnes souffrent de maladies dégénératives de la rétine qui entraînent une cécité irréversible. Un élément commun de nombreuses de ces maladies est la perte de cellules ganglionnaires de la rétine (RGC). Ce protocole détaillé décrit l'isolement des RGC murins primaires par sélection positive et négative avec cytométrie de flux.

Isolement des cellules de ganglion rétiniennes murines primaires (RGC) par cytométrie de flux

L’épithélium pigmentaire rétinien (RPE) est un épithélium multifonctionnel de le œil. Nous présentons ici un protocole visant à mettre en place des cultures de cellules primaires provenant de la RPE murine.

Cultures de cellules primaires de l’épithélium pigmentaire rétinien de souris

L'objectif de ce protocole est d'isoler les kératinocytes épidermiques de la peau dorsale de souris adultes pour une variété d'applications en aval telles que la biologie moléculaire, la biochimie, le tri cellulaire activé par fluorescence et les utilisations in vitro primaires (p. ex., clonogènes kératinocytes).

Isolement des kératinocytes épidermiques de souris et de leur culture clonogène in vitro

Ce protocole décrit une méthode d’isolement des cellules endothéliales rétiniennes postnatales murines optimisées pour le rendement, la pureté et la viabilité cellulaires. Ces cellules conviennent aux approches de séquençage de nouvelle génération.

Isolement de cellules endothéliales rétiniennes murines pour le séquençage de nouvelle génération

L’épithélium pigmentaire rétinien (EPR) agit comme une barrière cruciale entre la choroïde et la rétine, favorisant la santé et la fonction des types de cellules rétiniennes, telles que les photorécepteurs. Nous décrivons ici un protocole simple et efficace pour isoler et cultiver l’EPR murin adulte.

Méthode simplifiée d’isolement et de culture de cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes de souris adultes

Apprenez à isoler des suspensions unicellulaires de haute qualité à partir de cornées de souris intactes. Cette méthode combine dissection précise et digestion enzymatique séquentielle pour obtenir des cellules viables avec une intégrité ARN excellente.

Un protocole pour la récolte de la suspension unicellulaire sur les cornées de souris

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